喜樹(shù)（Camptotheca acuminata）是中國(guó)一種獨(dú)特的樹(shù)種。通過(guò)組織培養(yǎng),特別是通過(guò)遺傳轉(zhuǎn)化和基因工程的手段,對(duì)提高該藥用植物的喜樹(shù)堿含量具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)以喜樹(shù)的幼嫩葉片和莖段為材料,探討MS、WPM基本培養(yǎng)基和不同激素（2,4-D、IBA、6-BA、IAA）配比對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)的影響,并篩選喜樹(shù)細(xì)胞懸浮培養(yǎng)體系的最佳培養(yǎng)基配方。利用喜樹(shù)愈傷組織構(gòu)建懸浮細(xì)胞體系,并應(yīng)用不同濃度SA進(jìn)行不同時(shí)長(zhǎng)的處理檢測(cè)懸浮細(xì)胞中喜樹(shù)關(guān)鍵酶基因表達(dá)量。初步建立通過(guò)根癌農(nóng)桿菌GV3101介導(dǎo)的喜樹(shù)水楊酸轉(zhuǎn)運(yùn)基因CaSAT基因的遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng),結(jié)果表明:1.喜樹(shù)幼嫩葉片外植體誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)以WPM+2,4-D 0.15 mg/L+6-BA 0.6 mg/L+蔗糖30 g/L,pH 5.8為最優(yōu)。繼代培養(yǎng)以MS+2,4-D 0.15 mg/L+6-BA 0.6mg/L為最適。2.通過(guò)對(duì)喜樹(shù)誘導(dǎo)愈傷組織,成功建立了喜樹(shù)愈傷組織懸浮細(xì)胞的體系,并對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行了改良,確定喜樹(shù)愈傷組織懸浮細(xì)胞培養(yǎng)基為MS+2,4-D 0.15 mg/L+6-BA 0.6mg/L+IAA 0.25 mg/L+蔗糖3... 

【文章來(lái)源】：大連工業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 喜樹(shù)
        1.1.1 喜樹(shù)簡(jiǎn)介
        1.1.2 喜樹(shù)的應(yīng)用價(jià)值
        1.1.3 研究進(jìn)展
        1.1.4 喜樹(shù)堿及其應(yīng)用價(jià)值
        1.1.5 喜樹(shù)堿代謝途徑
    1.2 組織培養(yǎng)及其影響因素
        1.2.1 組織培養(yǎng)定義
        1.2.2 實(shí)現(xiàn)植物再生的途徑
        1.2.3 影響因素
    1.3 水楊酸與水楊酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白
        1.3.1 水楊酸及其生理意義
        1.3.2 水楊酸與植物的次生代謝
        1.3.3 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白
        1.3.4 水楊酸轉(zhuǎn)運(yùn)基因的發(fā)現(xiàn)和功能
    1.4 喜樹(shù)的懸浮培養(yǎng)
    1.5 愈傷組織的誘導(dǎo)與分化
    1.6 木本植物遺傳轉(zhuǎn)化
        1.6.1 木本植物遺傳轉(zhuǎn)化特點(diǎn)
        1.6.2 影響木本植物遺傳轉(zhuǎn)化的因素
        1.6.3 木本植物轉(zhuǎn)化系統(tǒng)及方法
        1.6.4 增加喜樹(shù)中喜樹(shù)堿含量的代謝工程
        1.6.5 SAT基因的遺傳轉(zhuǎn)化
    1.7 本實(shí)驗(yàn)的目的與意義
第二章 喜樹(shù)再生體系的構(gòu)建
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 激素的配制
        2.2.2 培養(yǎng)基的配制
        2.2.3 喜樹(shù)的組織培養(yǎng)方法
        2.2.4 培養(yǎng)基的改良
        2.2.5 無(wú)菌苗的煉苗移栽
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 外植體消毒
        2.3.2 組培苗的生根誘導(dǎo)
        2.3.3 組培苗的芽苗增殖誘導(dǎo)
        2.3.4 培養(yǎng)基的改良
        2.3.5 無(wú)菌苗的煉苗移栽
    2.4 小結(jié)
第三章 水楊酸在喜樹(shù)懸浮細(xì)胞培養(yǎng)中的作用
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 培養(yǎng)基
        3.2.2 喜樹(shù)愈傷組織的誘導(dǎo)
        3.2.3 喜樹(shù)懸浮細(xì)胞體系的構(gòu)建
        3.2.4 細(xì)胞再生能力的鑒定
        3.2.5 培養(yǎng)基的改良
        3.2.6 HPLC法檢測(cè)喜樹(shù)堿含量
        3.2.7 q-RTPCR檢測(cè)SA對(duì)喜樹(shù)懸浮細(xì)胞關(guān)鍵酶基因表達(dá)量的影響
        3.2.8 喜樹(shù)懸浮細(xì)胞RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        3.2.9 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 兩種不同培養(yǎng)基上喜樹(shù)愈傷的誘導(dǎo)對(duì)比
        3.3.2 喜樹(shù)愈傷懸浮細(xì)胞體系的構(gòu)建
        3.3.3 液相檢測(cè)喜樹(shù)不同部位CPT含量
        3.3.4 喜樹(shù)懸浮細(xì)胞RNA的提取
        3.3.5 q-RT-PCR檢測(cè)SA對(duì)喜樹(shù)懸浮細(xì)胞基因表達(dá)量的影響
    3.4 小結(jié)
第四章 轉(zhuǎn)CASAT喜樹(shù)的初步構(gòu)建
    4.1 材料與儀器
        4.1.1 材料
        4.1.2 菌種
        4.1.3 試劑
        4.1.4 儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 試劑的處理
        4.2.2 培養(yǎng)基
        4.2.3 細(xì)菌培養(yǎng)條件
        4.2.4 農(nóng)桿菌的培養(yǎng)
        4.2.5 預(yù)培養(yǎng)
        4.2.6 侵染
        4.2.7 脫菌(外植體清洗辦法)
        4.2.8 誘導(dǎo)抗性愈傷組織
        4.2.9 抗性愈傷組織的篩選
        4.2.10 生根培養(yǎng)
        4.2.11 芽苗增殖與壯苗培養(yǎng)
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 外植體的預(yù)培養(yǎng)
        4.3.2 外植體的侵染
        4.3.3 侵染后外植體的脫菌
        4.3.4 抗性愈傷組織的誘導(dǎo)及篩選
        4.3.5 抗性愈傷組織的生根分化
        4.3.6 抗性愈傷的芽苗增殖分化
    4.4 小結(jié)
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]超聲、DMSO和CMC-Na處理對(duì)喜樹(shù)細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的影響[J]. 康大力,夏黎,張洪利.  海峽藥學(xué). 2014(04)
[2]喜樹(shù)果中喜樹(shù)堿和羥基喜樹(shù)堿的快速分離[J]. 戴漢松,王家文,王濤.  中國(guó)西部科技. 2013(05)
[3]根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)CMO基因在96-Ⅱ喜樹(shù)中的遺傳轉(zhuǎn)化[J]. 董鳳麗,王慧梅,祖元?jiǎng)?  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(04)
[4]喜樹(shù)葉中喜樹(shù)堿和10-羥基喜樹(shù)堿的HPLC分析（英文）[J]. 李香莉,肖凱軍,胡先運(yùn),羅心毅,郭祀遠(yuǎn).  吉首大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2009(05)
[5]HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地喜樹(shù)果中喜樹(shù)堿[J]. 黃瑞松,葉云鋒,梁?jiǎn)⒊?周芳禮,蘇青,付小紅,林翠悟.  中草藥. 2009(01)
[6]HPLC法測(cè)定喜樹(shù)幼枝中喜樹(shù)堿含量[J]. 王玲麗,馬沛勤,劉文哲.  藥物分析雜志. 2008(09)
[7]喜樹(shù)幼苗中喜樹(shù)堿及其代謝相關(guān)酶類(lèi)的分布[J]. 孫世芹,閻秀峰.  中草藥. 2008(08)
[8]光照對(duì)喜樹(shù)愈合組織生理及喜樹(shù)堿合成的影響[J]. 顧青,朱睦元.  浙江林學(xué)院學(xué)報(bào). 2006(03)
[9]喜樹(shù)葉片中喜樹(shù)堿含量的季節(jié)變化研究[J]. 郭勇,林桂蕓,孫雁霞,鄔曉勇,石大興.  西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2006(01)
[10]石杉科植物石杉總堿含量的測(cè)定及基于紫外光譜的除趨勢(shì)對(duì)應(yīng)分析[J]. 方芳,郭水良,李沛玲,盧文廣.  武漢植物學(xué)研究. 2005(06)

博士論文
[1]喜樹(shù)細(xì)胞培養(yǎng)體系的建立與喜樹(shù)異堿A和B的生物合成及過(guò)程調(diào)控[D]. 于放.大連理工大學(xué) 2005
[2]喜樹(shù)組織培養(yǎng)與遺傳轉(zhuǎn)化的研究[D]. 王慧梅.東北林業(yè)大學(xué) 2004

碩士論文
[1]大麥水楊酸合成基因ICS和PAL的克隆與分析[D]. 韓秀麗.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[2]喜樹(shù)高效再生體系的建立與農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化研究[D]. 楊國(guó)崢.貴州大學(xué) 2007
[3]外源水楊酸對(duì)喜樹(shù)幼苗中喜樹(shù)堿含量的影響[D]. 黃永鑫.東北林業(yè)大學(xué) 2007
[4]喜樹(shù)愈傷組織和葉片中喜樹(shù)堿含量變化研究[D]. 郭勇.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005
[5]喜樹(shù)、丹參組織細(xì)胞培養(yǎng)的研究[D]. 田宇紅.陜西師范大學(xué) 2003
[6]喜樹(shù)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞生理特性的初步研究[D]. 高桂珍.華中師范大學(xué) 2003
[7]喜樹(shù)細(xì)胞培養(yǎng)體系的建立及培養(yǎng)動(dòng)力學(xué)[D]. 于放.大連理工大學(xué) 2001



本文編號(hào)：3184702