發(fā)布時間：2021-04-26 03:26

　　茅蒼術(shù)（Atractylodes lancea（Thunb.）DC.）為多年生菊科植物,以根莖入藥,具有燥濕健脾,祛風(fēng)明目等功效。茅蒼術(shù)為江蘇省道地藥材,以產(chǎn)自茅山一帶的質(zhì)優(yōu)。由于其自身的生物學(xué)特性以及各種人為因素的破壞,其種群恢復(fù)能力日漸下降,分布地區(qū)及種群數(shù)量呈現(xiàn)出明顯的衰退現(xiàn)象,被列為江蘇省4種瀕危藥用植物之一。蒼術(shù)中主要的藥效成分為倍半萜類成分,具有多種藥理活性,植物中的倍半萜主要是通過MVA途徑生成。目前對于蒼術(shù)倍半萜形成的分子機制研究甚少。本文主要構(gòu)建了茅蒼術(shù)根莖及葉的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫,對其生物合成路徑進(jìn)行了預(yù)測,對其生物合成途徑中的兩條關(guān)鍵酶進(jìn)行克隆分析,探究了茉莉酸甲酯對茅蒼術(shù)的生理生化影響及對關(guān)鍵酶的調(diào)控作用,愈傷組織體系的構(gòu)建等工作。主要包括以下幾個方面的內(nèi)容:（1）:建立了茅蒼術(shù)根莖及葉的轉(zhuǎn)錄組學(xué)平臺,本次茅蒼術(shù)轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究中,通過拼接組裝得到了 126072條unigenes,注釋率達(dá)到45.56%。獲得了 84條與茅蒼術(shù)萜類骨架生物合成相關(guān)的unigenes;50條與萜類下游途徑合成相關(guān)的unigenes,其中與單萜合成相關(guān)的有9條,與三萜倍半萜合成相關(guān)的有24條... 

【文章來源】：南京中醫(yī)藥大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 茅蒼術(shù)研究進(jìn)展
        1.1 化學(xué)成分研究
            1.1.1 倍半萜類
            1.1.2 聚乙炔類成分
            1.1.3 糖苷類成分
            1.1.4 三萜及甾體
            1.1.5 其他類
        1.2 藥理學(xué)研究
            1.2.1 對消化系統(tǒng)的影響
            1.2.2 抗菌抗病毒作用
            1.2.3 降血糖作用
            1.2.4 保肝作用
            1.2.5 抗缺氧作用
            1.2.6 對中樞神經(jīng)作用
        1.3 植物萜類化合物研究進(jìn)展
            1.3.1 植物萜類化合物的分類
            1.3.2 植物萜類化合物的用途
            1.3.3 植物萜類化合物生物合成途徑
            1.3.4 3-羥基-3-甲基戊二酰CoA還原酶（HMGR）研究進(jìn)展
            1.3.5 倍半萜合酶研究進(jìn)展
        1.4 轉(zhuǎn)錄組學(xué)在藥用植物中的應(yīng)用研究進(jìn)展
            1.4.1 轉(zhuǎn)錄組學(xué)概述
            1.4.2 轉(zhuǎn)錄組研究方法
            1.4.3 轉(zhuǎn)錄組學(xué)在藥用植物研究中的運用
        1.5 植物誘導(dǎo)子研究進(jìn)展
            1.5.1 誘導(dǎo)子的分類
            1.5.2 茉莉酸甲酯的作用機制
            1.5.3 茉莉酸甲酯在植物次生代謝中的應(yīng)用
        1.6 論文主要研究目的與內(nèi)容
        參考文獻(xiàn)
第二章 茅蒼術(shù)根莖及葉轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究
    2.1 實驗材料與方法
        2.1.1 實驗材料及RNA提取
        2.1.2 轉(zhuǎn)錄組測序文庫的構(gòu)建
        2.1.3 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)加工及組裝
        2.1.4 基因功能注釋
        2.1.5 基因表達(dá)水平分析
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 總RNA質(zhì)量檢測
        2.2.2 測序數(shù)據(jù)質(zhì)量結(jié)果
        2.2.3 拼接轉(zhuǎn)錄本的長度分布
        2.2.4 unigenes的功能注釋
        2.2.5 CDS預(yù)測結(jié)果
        2.2.6 Nr注釋結(jié)果
        2.2.7 GO及KOG功能注釋
        2.2.8 KEGG功能注釋及分類
    2.3 功能基因的挖掘
        2.3.1 MVA生物合成途徑中關(guān)鍵酶的研究
        2.3.2 MEP生物合成途徑
        2.3.3 下游途徑中的關(guān)鍵酶
        2.3.4 與萜類合成相關(guān)的CYP450s的挖掘
        2.3.5 與萜類合成相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子的挖掘
        2.3.6 差異表達(dá)基因的篩選
    2.4 討論
    參考文獻(xiàn)
第三章 茅蒼術(shù)倍半萜合成酶基因Al-Ses1的克隆及生物信息學(xué)分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 RNA提取和cDNA合成
        3.1.2 倍半萜合酶全長的克隆及驗證
        3.1.3 倍半萜合酶生物信息學(xué)分析
        3.1.4 實時熒光定量PCR （real-time PCR）
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 RACE和Al-sesl全長cDNA序列
        3.2.2 Al-ses1編碼的蛋白質(zhì)理化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)與功能預(yù)測
        3.2.3 Al-ses1基因二級結(jié)構(gòu)及三級結(jié)構(gòu)預(yù)測
        3.2.4 Al-ses1信號肽
        3.2.5 Al-ses1結(jié)構(gòu)域分析
        3.2.6 進(jìn)化樹分析
        3.2.7 Al-ses1基因表達(dá)特異性表達(dá)分析
    3.3 討論
    參考文獻(xiàn)
第四章 茅蒼術(shù)HMGR基因全長克隆及表達(dá)分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 RNA提取和cDNA合成
        4.1.3 AlHMGR全長擴增及驗證
        4.1.4 AlHMGR生物信息學(xué)分析
        4.1.5 實時熒光定量PCR
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 RACE結(jié)果和AlHMGR全長cDNA序列獲得
        4.2.2 AlHMGR基因編碼的蛋白質(zhì)理化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)與功能預(yù)測
        4.2.3 AlHMGR二級結(jié)構(gòu)及三級2構(gòu)預(yù)測
        4.2.4 信號肽
        4.2.5 AlHMGR編碼蛋白序列相似性和功能結(jié)構(gòu)分析
        4.2.6 AlHMGR同源氨基酸序列比對
        4.2.7 AlHMGR基因表達(dá)特異性分析
    4.3 討論
    參考文獻(xiàn)
第五章 茉莉酸甲酯對茅蒼術(shù)生理生化及關(guān)鍵酶表達(dá)量的影響
    5.1 茉莉酸甲酯對茅蒼術(shù)生理生化指標(biāo)影響
        5.1.1 材料與方法
        5.1.2 結(jié)果與分析
        5.1.3 討論
    5.2 茉莉酸甲酯對茅蒼術(shù)MVA生物合成途徑關(guān)鍵酶表達(dá)的影響
        5.2.1 材料與方法
        5.2.2 結(jié)果與分析
        5.2.3 討論
    參考文獻(xiàn)
第六章 茅蒼術(shù)愈傷組織培養(yǎng)體系的建立
    6.1 茅蒼術(shù)無菌苗的培養(yǎng)
        6.1.1 材料
        6.1.2 外植體預(yù)處理
        6.1.3 種子消毒及無菌苗形成
    6.2 茅蒼術(shù)愈傷組織的培養(yǎng)
    6.3 結(jié)果與分析
        6.3.1 HgCl2不同消毒時間對茅蒼術(shù)發(fā)芽率的影響
        6.3.2 不同激素配比對茅蒼術(shù)無菌苗愈傷效果的影響
    6.4 討論
    參考文獻(xiàn)
結(jié)論
攻讀碩士學(xué)位期間取得的學(xué)術(shù)成果
致謝



本文編號：3160638