發(fā)布時間：2021-04-25 13:16

　　“基因組靶向定位誘導(dǎo)損傷技術(shù)”（targeting induced local lesions in genomes TILLING）,又稱為“TILLING技術(shù)”,在研究反向遺傳學(xué)和定向突變方面是一種全新的方向。其方法的特別之處在于利用化學(xué)誘變劑“甲基磺酸乙酷”（Ethylmethane sulfonate,EMS）處理植物種子及愈傷組織,使其產(chǎn)生一系列點突變,將CEL-Ⅰ酶切的高效與化學(xué)誘變的高頻緊密結(jié)合,可快速有效地從突變?nèi)后w中篩選鑒定出突變體,為作物品種改良提供新穎的種質(zhì)資源。本研究選用釀酒高粱紅纓子作為供試材料,選擇0.5%的EMS誘導(dǎo)處理高粱種子8小時,置培養(yǎng)箱中催芽后進(jìn)行種植。有效結(jié)合田間性狀表型突變觀測,構(gòu)建突變體庫,發(fā)現(xiàn)高粱植株株高、葉色葉形、穗型、產(chǎn)量因素、育性以及早衰突變等各個方面存在不同程度的變異,突變性狀豐富,為篩選有益突變體奠定了基礎(chǔ);同時,在M1、M2代株系中,對影響高粱赤霉素受體基因GID1進(jìn)行TILLING分析,以期望獲得抗旱突變體,為高粱在抗旱育種方面創(chuàng)制全新的種質(zhì)資源。1、突變體庫的構(gòu)建及表型分析對高粱植株的M1代突變體的形態(tài)變異進(jìn)行了田間農(nóng)藝性狀... 

【文章來源】：貴州大學(xué)貴州省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 赤霉素的研究進(jìn)展
    1.2 赤霉素的信號通路
    1.3 GID1的研究進(jìn)展
    1.4 TILLING技術(shù)
        1.4.1 TILLING技術(shù)研究近況
        1.4.2 TILLING技術(shù)的基本原理
        1.4.3 TILLING技術(shù)的操作流程
    1.5 本論文的研究目的和意義
    1.6 技術(shù)路線
2 材料與方法
    2.1 試驗材料及儀器
        2.1.1 供試材料
        2.1.2 試驗儀器
        2.1.3 試驗試劑
    2.2 試驗方法
        2.2.1 高粱植株生物學(xué)性狀的測定及突變體庫的構(gòu)建
        2.2.2 生理指標(biāo)測定項目及方法
    2.3 釀酒高粱赤霉素受體基因GID1的TILLING分析
        2.3.1 DNA提取
        2.3.2 目的片段引物設(shè)計
        2.3.3 PCR擴(kuò)增及引物篩選技術(shù)
        2.3.4 CEL-I酶切
        2.3.5 CEL-Ⅰ酶的提取及PCR產(chǎn)物的酶切
    2.4 M2代植株的表型驗證
    2.5 突變?nèi)后wM1、M2代表型突變頻率計算方法
    2.6 數(shù)據(jù)分析
    2.7 生物學(xué)分析網(wǎng)站
3 結(jié)果與分析
    3.1 釀酒高粱EMS突變體庫的構(gòu)建
        3.1.1 M1植株突變表型的鑒定
        3.1.2 M2植株突變表型的鑒定
    3.2 M2代釀酒高粱抗旱生理指標(biāo)與農(nóng)藝性狀指標(biāo)
        3.2.1 M2代釀酒高粱農(nóng)藝性狀指標(biāo)分析
        3.2.2 M2代釀酒高粱抗旱生理指標(biāo)
    3.3 釀酒高粱突變植株GID1基因克隆及生物信息學(xué)分析
        3.3.1 氨基酸家族分析
        3.3.2 GID1氨基酸多重序列比對分析
        3.3.3 氨基酸序列組成分析
        3.3.4 遺傳結(jié)構(gòu)樹分析
        3.3.5 GID1基因編碼蛋白二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
        3.3.6 結(jié)構(gòu)域的三級結(jié)構(gòu)預(yù)測
    3.4 釀酒高粱GID1 基因的TILLING分析
        3.4.1 GID1基因點突變檢測
        3.4.2 GID1基因點突變檢測分析
4 討論與結(jié)論
    4.1 釀酒高粱農(nóng)藝性狀與抗旱生理指標(biāo)
        4.1.1 農(nóng)藝性狀與抗旱性
        4.1.2 釀酒高粱抗旱生理指標(biāo)
    4.2 EMS誘變及TILLING群體構(gòu)建
        4.2.1 EMS誘變方法及適宜濃度
        4.2.2 植株突變表型
        4.2.3 TILLING技術(shù)突變體的篩選及影響檢測效率的因素
    4.3 突變體TILLING分析及生物信息學(xué)分析
5 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄



本文編號：3159452