MicroRNAs（miRNAs）是目前研究較多的一類存在于真核生物體內(nèi)的長20²4nt的內(nèi)源性的單鏈小分子RNA。主要在轉(zhuǎn)錄后水平對基因進行表達調(diào)控,廣泛參與植物生長發(fā)育過程。已有研究顯示,一些特定的miRNA參與植物花藥發(fā)育過程,是導(dǎo)致花藥發(fā)育異常、產(chǎn)生雄性不育的重要原因之一。目前有關(guān)miRNA在植物花藥發(fā)育中的研究報道主要集中于水稻、玉米、棉花、油菜等作物,在小麥上的研究報道不多,研究小麥花藥發(fā)育過程中起作用的特定miRNA對小麥雄性不育與雜種優(yōu)勢利用研究有重要意義。本實驗室前期以小麥光溫敏雄性不育系337S在短日低溫不育和正�？捎龡l件下的花藥為材料,通過RNA測序分析鑒定出了一些在小麥337S花藥發(fā)育中差異表達顯著的miRNAs。本研究以miR1127b、miR9652、miR2275為候選基因,構(gòu)建出過表達載體在不同小麥愈傷中進行遺傳轉(zhuǎn)化。由于前期降解組測序時沒有找到miR1127b、miR9652的靶基因,僅miR2275找到了其靶基因CAF1,故對CAF1基因進行了同源克隆,對miR2275基因進行了遺傳轉(zhuǎn)化研究,以期初步了解miR2275與靶基因C... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 前言
    1.1 課題研究背景
    1.2 植物雄性不育研究進展
        1.2.1 細胞質(zhì)雄性不育
        1.2.2 細胞核雄性不育
        1.2.3 光溫敏雄性不育
    1.3 植物miRNA的研究進展
        1.3.1 植物miRNA的生物合成和作用機制
        1.3.2 植物miRNA的靶標鑒定方法
        1.3.3 植物miRNA的功能研究
        1.3.4 植物育性相關(guān)miRNA的研究進展
    1.4 CAF1蛋白研究進展
        1.4.1 CAF1蛋白結(jié)構(gòu)
        1.4.2 CAF1蛋白功能
        1.4.3 CAF1蛋白亞細胞定位研究
    1.5 小麥轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究進展
        1.5.1 小麥遺傳轉(zhuǎn)化方法
        1.5.2 小麥轉(zhuǎn)基因技術(shù)的應(yīng)用
    1.6 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物體材料
        2.1.2 質(zhì)粒與菌株
        2.1.3 實驗試劑
        2.1.4 儀器設(shè)備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 基因組DNA的提�。–TAB法）
        2.2.2 電泳檢測
        2.2.3 小麥miRNA前體序列的擴增
        2.2.4 miRNA超表達載體的構(gòu)建
        2.2.5 小麥幼胚愈傷的遺傳轉(zhuǎn)化
        2.2.6 小麥轉(zhuǎn)基因植株的檢測
        2.2.7 miR2275靶基因CAF1的克隆
        2.2.8 融合蛋白表達載體的構(gòu)建
        2.2.9 CAF1蛋白亞細胞定位
        2.2.10 CAF1蛋白的原核表達
        2.2.11 啟動子-GUS融合表達載體的構(gòu)建
        2.2.12 擬南芥的轉(zhuǎn)化篩選
3 結(jié)果與分析
    3.1 小麥候選miRNA的克隆
        3.1.1 miR2275的系統(tǒng)進化分析
    3.2 小麥幼胚愈傷的遺傳轉(zhuǎn)化
        3.2.1 不同小麥品種幼胚出愈率情況統(tǒng)計分析
        3.2.2 基因槍介導(dǎo)的小麥轉(zhuǎn)基因植株的獲得
        3.2.3 基因槍介導(dǎo)的miR2275的遺傳轉(zhuǎn)化
        3.2.4 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的小麥轉(zhuǎn)基因植株的獲得
        3.2.5 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的miRNA的遺傳轉(zhuǎn)化
    3.3 轉(zhuǎn)基因抗性苗初步的PCR鑒定
    3.4 miR2275靶基因CAF1的克隆
    3.5 小麥CAF1同源基因的生物信息學(xué)分析
        3.5.1 CAF1基因的序列分析
        3.5.2 CAF1蛋白基本理化性質(zhì)分析
        3.5.3 CAF1蛋白的跨膜區(qū)域和信號肽預(yù)測
        3.5.4 CAF1蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測
        3.5.5 CAF1蛋白同源比對與系統(tǒng)進化
    3.6 CAF1蛋白的亞細胞定位
    3.7 CAF1蛋白的原核表達
        3.7.1 原核表達載體的構(gòu)建
        3.7.2 目的蛋白的誘導(dǎo)表達
    3.8 啟動子-GUS融合表達載體的構(gòu)建及擬南芥轉(zhuǎn)化篩選
1代植株檢測">    3.9 擬南芥T₁代植株檢測
    3.10 轉(zhuǎn)基因小麥后代表型差異
4 討論
    4.1 小麥轉(zhuǎn)化效率的影響因素
    4.2 miR2275可能調(diào)控小麥337S的育性
    4.3 小麥CAF1功能的初步分析
參考文獻
附錄
致謝



本文編號：3150876