MicroRNAs（miRNAs）是目前研究較多的一類(lèi)存在于真核生物體內(nèi)的長(zhǎng)20²4nt的內(nèi)源性的單鏈小分子RNA。主要在轉(zhuǎn)錄后水平對(duì)基因進(jìn)行表達(dá)調(diào)控,廣泛參與植物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程。已有研究顯示,一些特定的miRNA參與植物花藥發(fā)育過(guò)程,是導(dǎo)致花藥發(fā)育異常、產(chǎn)生雄性不育的重要原因之一。目前有關(guān)miRNA在植物花藥發(fā)育中的研究報(bào)道主要集中于水稻、玉米、棉花、油菜等作物,在小麥上的研究報(bào)道不多,研究小麥花藥發(fā)育過(guò)程中起作用的特定miRNA對(duì)小麥雄性不育與雜種優(yōu)勢(shì)利用研究有重要意義。本實(shí)驗(yàn)室前期以小麥光溫敏雄性不育系337S在短日低溫不育和正�？捎龡l件下的花藥為材料,通過(guò)RNA測(cè)序分析鑒定出了一些在小麥337S花藥發(fā)育中差異表達(dá)顯著的miRNAs。本研究以miR1127b、miR9652、miR2275為候選基因,構(gòu)建出過(guò)表達(dá)載體在不同小麥愈傷中進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化。由于前期降解組測(cè)序時(shí)沒(méi)有找到miR1127b、miR9652的靶基因,僅miR2275找到了其靶基因CAF1,故對(duì)CAF1基因進(jìn)行了同源克隆,對(duì)miR2275基因進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化研究,以期初步了解miR2275與靶基因C... 

【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語(yǔ)表
1 前言
    1.1 課題研究背景
    1.2 植物雄性不育研究進(jìn)展
        1.2.1 細(xì)胞質(zhì)雄性不育
        1.2.2 細(xì)胞核雄性不育
        1.2.3 光溫敏雄性不育
    1.3 植物miRNA的研究進(jìn)展
        1.3.1 植物miRNA的生物合成和作用機(jī)制
        1.3.2 植物miRNA的靶標(biāo)鑒定方法
        1.3.3 植物miRNA的功能研究
        1.3.4 植物育性相關(guān)miRNA的研究進(jìn)展
    1.4 CAF1蛋白研究進(jìn)展
        1.4.1 CAF1蛋白結(jié)構(gòu)
        1.4.2 CAF1蛋白功能
        1.4.3 CAF1蛋白亞細(xì)胞定位研究
    1.5 小麥轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究進(jìn)展
        1.5.1 小麥遺傳轉(zhuǎn)化方法
        1.5.2 小麥轉(zhuǎn)基因技術(shù)的應(yīng)用
    1.6 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物體材料
        2.1.2 質(zhì)粒與菌株
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.4 儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 基因組DNA的提�。–TAB法）
        2.2.2 電泳檢測(cè)
        2.2.3 小麥miRNA前體序列的擴(kuò)增
        2.2.4 miRNA超表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.5 小麥幼胚愈傷的遺傳轉(zhuǎn)化
        2.2.6 小麥轉(zhuǎn)基因植株的檢測(cè)
        2.2.7 miR2275靶基因CAF1的克隆
        2.2.8 融合蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.9 CAF1蛋白亞細(xì)胞定位
        2.2.10 CAF1蛋白的原核表達(dá)
        2.2.11 啟動(dòng)子-GUS融合表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.12 擬南芥的轉(zhuǎn)化篩選
3 結(jié)果與分析
    3.1 小麥候選miRNA的克隆
        3.1.1 miR2275的系統(tǒng)進(jìn)化分析
    3.2 小麥幼胚愈傷的遺傳轉(zhuǎn)化
        3.2.1 不同小麥品種幼胚出愈率情況統(tǒng)計(jì)分析
        3.2.2 基因槍介導(dǎo)的小麥轉(zhuǎn)基因植株的獲得
        3.2.3 基因槍介導(dǎo)的miR2275的遺傳轉(zhuǎn)化
        3.2.4 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的小麥轉(zhuǎn)基因植株的獲得
        3.2.5 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的miRNA的遺傳轉(zhuǎn)化
    3.3 轉(zhuǎn)基因抗性苗初步的PCR鑒定
    3.4 miR2275靶基因CAF1的克隆
    3.5 小麥CAF1同源基因的生物信息學(xué)分析
        3.5.1 CAF1基因的序列分析
        3.5.2 CAF1蛋白基本理化性質(zhì)分析
        3.5.3 CAF1蛋白的跨膜區(qū)域和信號(hào)肽預(yù)測(cè)
        3.5.4 CAF1蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        3.5.5 CAF1蛋白同源比對(duì)與系統(tǒng)進(jìn)化
    3.6 CAF1蛋白的亞細(xì)胞定位
    3.7 CAF1蛋白的原核表達(dá)
        3.7.1 原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.7.2 目的蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
    3.8 啟動(dòng)子-GUS融合表達(dá)載體的構(gòu)建及擬南芥轉(zhuǎn)化篩選
1代植株檢測(cè)">    3.9 擬南芥T₁代植株檢測(cè)
    3.10 轉(zhuǎn)基因小麥后代表型差異
4 討論
    4.1 小麥轉(zhuǎn)化效率的影響因素
    4.2 miR2275可能調(diào)控小麥337S的育性
    4.3 小麥CAF1功能的初步分析
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號(hào)：3150876