植物內(nèi)生細(xì)菌由于其對宿主植物的促生長和協(xié)助宿主植物拮抗生物或非生物逆境的作用,已經(jīng)受到廣泛研究。其主要的研究是新種挖掘、微生物肥料開發(fā)以及新藥研發(fā)等方面。而重金屬鎘污染日益嚴(yán)重,嚴(yán)重影響了人類的日常生活和生產(chǎn)。挖掘藥用野生稻內(nèi)生細(xì)菌多樣性,探索內(nèi)生細(xì)菌對重金屬鎘脅迫的耐受性,利用耐鎘內(nèi)生菌降低水污染中的鎘含量,此也已經(jīng)逐步成為當(dāng)前環(huán)境治理的熱點。本研究以廣西梧州藥用野生稻為試驗材料,采用多種培養(yǎng)基進(jìn)行內(nèi)生細(xì)菌的分離純化。運(yùn)用隨機(jī)插入序列指紋圖譜（IS-PCR指紋圖）對所分離得到內(nèi)生菌聚類,測定類群代表菌株16S rRNA基因序列,并分析內(nèi)生菌進(jìn)化系統(tǒng)發(fā)育。測定各類群菌株的生理生化特性,得到具有較強(qiáng)促生長特性內(nèi)生菌;以及篩選具有耐鎘能力菌株,應(yīng)用于不同濃度鎘樣液,分析其耐鎘以及降鎘能力。本研究以廣西梧州藥用野生稻為試驗材料,采用多種培養(yǎng)基進(jìn)行內(nèi)生細(xì)菌的分離純化,得到162株內(nèi)生細(xì)菌;并運(yùn)用隨機(jī)插入序列指紋圖對所分離得到內(nèi)生菌聚類,共分為19個類群。測定各類群代表菌株16S rRNA基因序列,并分析內(nèi)生菌進(jìn)化系統(tǒng)發(fā)育,分離得到內(nèi)生菌屬于Kosakonia sacchari、Kosakoni... 

【文章來源】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
1 前言
    1.1 內(nèi)生細(xì)菌概述
    1.2 內(nèi)生細(xì)菌分類方法
        1.2.1 經(jīng)典分類方法（傳統(tǒng)分類法）
        1.2.2 數(shù)值分類法
        1.2.3 化學(xué)分類法
        1.2.4 遺傳學(xué)分類法
    1.3 內(nèi)生菌對宿主植物的促生作用
        1.3.1 生物固氮作用
        1.3.2 溶磷解鉀
        1.3.3 鐵的利用
        1.3.4 分泌生長素類植物激素
    1.4 鎘污染概況及其危害
    1.5 降鎘方法
    1.6 論文研究目的與意義
    1.7 技術(shù)路線
2 材料與方法
    2.1 內(nèi)生菌的分離純化
        2.1.1 材料
        2.1.2 培養(yǎng)基
        2.1.3 菌株分離純化
        2.1.4 菌株形態(tài)學(xué)鑒定
            2.1.4.1 實驗所需試劑（石碳酸堿性復(fù)紅染液）
            2.1.4.2 菌種的準(zhǔn)備
            2.1.4.3 形態(tài)學(xué)觀察
        2.1.5 菌株保存
        2.1.6 IS-PCR指紋圖譜聚類分析
    2.2 菌株系統(tǒng)發(fā)育分析
        2.2.1 16S rRNA基因擴(kuò)增
            2.2.1.1 菌株DNA的提取
            2.2.1.2 16S rRNA基因擴(kuò)增
        2.2.2 16S rRNA基因測序與同源性分析
    2.3 菌株生理生化測定
        2.3.1 代表菌株生理代謝指標(biāo)測定
        2.3.2 菌株生理功能特性鑒定
    2.4 代表類群供試菌株固氮能力測定
        2.4.1 細(xì)菌固氮酶活性測定
        2.4.2 nifH基因的擴(kuò)增
    2.5 耐鎘菌株篩選與鑒定
        2.5.1 耐鎘菌株初篩
        2.5.2 可能具耐鎘菌株耐鎘能力測定
        2.5.3 耐鎘菌株對不同碳源利用情況
        2.5.4 耐鎘菌株對不同抗生素、NaCl濃度和pH耐受性
            2.5.4.1 pH值生長范圍測定
            2.5.4.2 耐鹽特性測定
            2.5.4.3 抗生素抗性鑒定
        2.5.5 耐鎘菌株巰基含量測定
            2.5.5.1 試劑配制
            2.5.5.2 BSA（牛血清白蛋白）標(biāo)準(zhǔn)曲線制作
            2.5.5.3 Bradford法蛋白含量測定
            2.5.5.4 Ellman法測定巰基含量測定
3 結(jié)果與分析
    3.1 內(nèi)生菌的分離與純化
    3.2 內(nèi)生菌的聚類分析
    3.3 各類代表菌株16S rRNA基因序列相似性分析
    3.4 各類代表菌株16S rRNA基因序列相似性分析
    3.5 生理生化特性測定
        3.5.1 各代表類群菌株生理生化特性測定
        3.5.2 固氮特性鑒定
            3.5.2.1 固氮酶活性測定
            3.5.2.2 nifH基因擴(kuò)增
    3.6 內(nèi)生菌耐鎘特性測定
        3.6.1 耐鎘初篩
        3.6.2 耐鎘定量測定
        3.6.3 耐鎘菌株對不同碳源利用情況
        3.6.4 耐鎘菌株對不同抗生素、NaCl濃度和pH耐受性
        3.6.5 耐鎘菌巰基含量測定
4 討論與結(jié)論
    4.1 梧縣藥用野生稻內(nèi)生菌多樣性
    4.2 內(nèi)生菌的促生特性分析
    4.3 內(nèi)生細(xì)菌耐鎘特性
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]藤縣藥用野生稻內(nèi)生固氮菌分離鑒定及系統(tǒng)發(fā)育分析[J]. 胡文哲,譚澤文,王勇,徐羨微,譚志遠(yuǎn).  生物技術(shù)通報. 2016(06)
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[9]番茄灰霉病拮抗芽孢桿菌LW-6-1的篩選、鑒定及抑菌活性研究[J]. 劉偉,宋雙,沈小英,安天賜,牛小義,安德榮.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2013(11)
[10]青香茅和五節(jié)芒內(nèi)生固氮菌的分離與生理生化鑒定[J]. 譚志遠(yuǎn),傅琴梅,彭桂香,原紅娟,程艷波,江院.  應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報. 2013(04)

博士論文
[1]新疆阿克蘇鹽礦嗜鹽微生物多相分類和基因組研究[D]. 張為艷.浙江大學(xué) 2015
[2]除草劑異丙隆降解菌株的篩選鑒定及降解特性和應(yīng)用研究[D]. 孫紀(jì)全.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008

碩士論文
[1]深部地下新種微生物分類學(xué)研究[D]. 滕閱文.北京化工大學(xué) 2015
[2]新疆幾種典型荒漠植物根際微生物特征及內(nèi)生固氮菌的分離、促生性能研究[D]. 王衛(wèi)霞.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[3]細(xì)胞分裂素與巨大芽孢桿菌B1301抑菌能力及其防治小麥紋枯病的關(guān)系[D]. 齊勇.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007
[4]利用地衣芽孢桿菌發(fā)酵生產(chǎn)細(xì)胞分裂素[D]. 劉偉.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005



本文編號：3144887