S-期激酶相關蛋白2A （S-phase kinase-associated protein 2A, SKP2A）是一個F-box蛋白,參與植物細胞分裂的調(diào)控,并能增加擬南芥（Arabidopsis thaliana）對滲透脅迫的抗性。為探究小麥（Triticum aestivum） SKP2A基因在響應非生物逆境及病原菌侵染中的功能,本研究在克隆到小麥TaSKP2A基因的基礎上,對其編碼的蛋白進行了分析。結(jié)果表明,TaSKP2A編碼一條381個氨基酸組成的多肽,預測其等電點和分子量分別為6.83和40.87 kD;TaSKP2A為非分泌型蛋白質(zhì),定位于細胞核上,屬于富含亮氨酸重復（leucine-rich repeat, LRR）型F-box蛋白。qRT-PCR結(jié)果顯示,TaSKP2A在雌蕊和旗葉中的表達量較高,在幼莖和雄蕊中較低;經(jīng)水楊酸（salicylic acid, SA）和NaCl處理后TaSKP2A分別在24和48 h出現(xiàn)上調(diào)表達;在H₂O₂脅迫下,TaSKP2A基因整體呈現(xiàn)下調(diào)表達;在葉銹菌（Puccinia triticina... 

【文章來源】：農(nóng)業(yè)生物技術學報. 2020,28(04)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

小麥Ta SKP2A序列特征分析

為了解TaSKP2A基因響應激素及生物/非生物逆境的表達情況，分別對小麥進行鹽、干旱、H2O2、SA、MeJA、ABA和葉銹菌侵染等處理。結(jié)果表明，在不同處理下TaSKP2A基因的表達模式不同(圖3)。NaCl處理后，TaSKP2A基因僅在48 h時出現(xiàn)明顯地上調(diào)表達，為0 h的2.4倍(P<0.05)，其他時間的表達與0 h樣品差異均不明顯；在H2O2脅迫下，TaSKP2A基因整體呈現(xiàn)下調(diào)表達，至48 h，表達量僅為對照的1/4；在PEG6000模擬的干旱脅迫條件下，TaSKP2A基因表達量變化不大(圖3A)。

根據(jù)文庫篩選獲得的靶蛋白編碼基因序列結(jié)合NCBI數(shù)據(jù)庫檢索，獲得小麥及其近緣種屬中基因全長序列，以此為模板，設計合成引物，以Tc Lr15接種葉銹菌株05-19-43(2)的cDNA為模板，獲得基因完整ORF區(qū)。將完整讀碼框序列構(gòu)建AD-prey載體，與BD-TaSKP2A共轉(zhuǎn)化酵母菌株AH109。在含有X-α-Gal的四缺固體培養(yǎng)基上進行回復驗證。如圖5所示，發(fā)現(xiàn)TaCHI和TaSKP1與TaSKP2A的組合在含有X-α-Gal的培養(yǎng)基上均能正常生長，且菌落呈現(xiàn)藍色，表明存在相互作用。圖4 TaSKP2A篩選酵母cDNA文庫

【參考文獻】：
期刊論文
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