羅漢果學(xué)名Siraitia grosvenorii（Swingle）C.Jeffery ex lu et Z.Y.Zhang,為主要分布于中國廣西北部的葫蘆科多年生草質(zhì)藤本植物。羅漢果以果實入藥,味甘性涼,歸肺、大腸經(jīng),有潤肺止咳,生津止渴的成效,適用于肺熱或肺燥咳嗽,百日咳及暑熱傷津口渴等,此外還有潤腸通便的作用。羅漢果的主要藥用成分為羅漢果苷化合物,其中羅漢果甜苷V是低熱量、純天然的甜味劑,還具有抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、抗癌、降血糖等作用。但羅漢果苷目前還不能化學(xué)合成,主要依靠從植物中提取獲得,產(chǎn)量受到羅漢果種植環(huán)境及條件的制約。因此研究羅漢果苷生物合成途徑關(guān)鍵酶的異源表達(dá),可為提高羅漢果苷類在植物中生物合成產(chǎn)量,為利用植物基因工程、細(xì)胞工程工業(yè)化生產(chǎn)羅漢果苷奠定理論基礎(chǔ)。其次對羅漢果鯊烯合酶結(jié)構(gòu)的分析,研究影響酶活性的關(guān)鍵基團,促進羅漢果苷化合物的生物合成研究。第一章羅漢果鯊烯合酶基因的克隆及酶分子結(jié)構(gòu)分析目的:克隆羅漢果鯊烯合酶基因,獲完整的鯊烯合酶開放閱讀框架序列,推衍出相應(yīng)的氨基酸序列,利用生物信息學(xué)技術(shù)分析羅漢果鯊烯合酶的酶結(jié)構(gòu),研究鯊烯合酶蛋白中與酶活性相關(guān)的氨基酸位點。方法... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：108 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

羅漢果葉組織的總RNA電泳圖

圖 1-1 羅漢果葉組織的總 RNA 電泳圖re 1-1 Electrophoresis results of the total RNA extracted from the leaf of Siraitia grosveR 擴增羅漢果鯊烯合酶基因片段及 cDNA 3′末端序列結(jié)果漢果鯊烯合酶基因片段擴增良好，無非物異性擴增，擴增產(chǎn)期結(jié)果相符（圖 1-2A）。3′ race 第二輪 PCR 結(jié)果如圖 1-2B，為與預(yù)期結(jié)果相符，無非物異性擴增。將擴增產(chǎn)物送上海生司測序，測序結(jié)果經(jīng) NCBI 上的 BLAST 比對之后證實獲得羅基因序列。A B

igure 1-2 Electrophoresis results of amplicaton from SS gene of Siraitia grosvenoriiA. the fragment of SS gene amplicated by PCR; B. the results of 3′race羅漢果鯊烯合酶 cDNA 結(jié)果CR 擴增的羅漢果葉片鯊烯合酶基因 ORF 序列特異性擴增良好增不強，擴增產(chǎn)物長度在 1000 bp 與 2000 bp 之間，約 1200 b果一致（圖 1-3A）。產(chǎn)物回收之后取 2μL 電泳，回收效率達(dá)接要求（圖 1-3B）。與 pGEM-T Easy Vector 連接，轉(zhuǎn)化大腸桿高（圖 1-3C），隨機挑取 5 個白色菌落進行的 PCR 檢測均呈陽D）。送上海生物工程有限公司測序，測序結(jié)果如圖 1-3A，經(jīng) NAST 比對（圖 1-4B 和圖 1-4C）之后證實獲得羅漢果鯊烯合酶基。A B

【參考文獻】：
期刊論文
[1]佛手瓜鯊烯合酶基因克隆及酶分子結(jié)構(gòu)分析[J]. 蘇何玲,肖雅倫,譚燕蓮,梁斌,谷云艷,劉永明,吳耀生.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(32)
[2]甜瓜鯊烯合酶基因克隆及酶分子結(jié)構(gòu)分析[J]. 黃海霞,蘇何玲,史云龍,肖雅倫,譚燕蓮,梁楊浩,劉永明,吳耀生.  廣西植物. 2017(03)
[3]桑黃鯊烯環(huán)氧酶基因克隆與序列分析[J]. 孫婷婷,鄒莉,張林芳,張國權(quán),楊苑藝,李晶瑩.  中草藥. 2015(18)
[4]接骨草HMGR基因cDNA克隆、不同器官中的差異表達(dá)及生物信息學(xué)分析[J]. 姚元枝,黎曉英,郭文博,劉宇,魏麟.  中草藥. 2015(16)
[5]三七鯊烯環(huán)氧酶基因（SE）啟動子的瞬時表達(dá)分析[J]. 盧榮江,劉迪秋,葛鋒,陳朝銀.  植物生理學(xué)報. 2015(04)
[6]白花丹參鯊烯合酶SQS2的克隆與原核表達(dá)分析[J]. 榮齊仙,姜丹,查良平,申業(yè),張燕,黃璐琦.  中國中藥雜志. 2015(07)
[7]羅漢果實時熒光定量PCR內(nèi)參基因的選擇[J]. 涂冬萍,莫長明,馬小軍,趙歡,唐其,黃杰,潘麗梅,韋榮昌.  中國中藥雜志. 2015(02)
[8]羅漢果SgHMGR基因的克隆、分析及原核表達(dá)[J]. 趙歡,莫長明,唐其,白隆華,馬小軍.  廣西植物. 2015(06)
[9]基于轉(zhuǎn)錄組測序?qū)τ筒杞酋徬┖厦富虻目寺〖胺治鯷J]. 周長富,姚小華,林萍,王開良,常君.  廣西植物. 2013(06)
[10]鐵皮石斛鯊烯合酶基因的克隆及其組織表達(dá)模式分析[J]. 張崗,唐志書,周莉英,劉清,李依民,張小飛,呂欣.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2013(09)

博士論文
[1]羅漢果轉(zhuǎn)錄組、表達(dá)譜的高通量測序及甜苷V生物合成關(guān)鍵酶的克隆[D]. 唐其.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2010

碩士論文
[1]丹參酮生物合成相關(guān)基因的克隆及其代謝調(diào)控[D]. 廖攀.上海師范大學(xué) 2010
[2]環(huán)境因子對三萜含量影響的正交分析及羥甲基戊二酰輔酶A還原酶基因的克隆、分析[D]. 李娜.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號：3122651