丹參（SalviamiltiorrhizaBunge）屬于唇形科鼠尾草屬植物,因其干燥的根和根莖中的活性成分而常被作為一種藥用植物來研究,在醫(yī)治心腦血管類疾病、抗氧化及抗腫瘤等問題上有顯著療效�，F(xiàn)今研究人員大多關(guān)注于對(duì)丹參次生代謝中二萜類化合物丹參酮的研究,而對(duì)丹參中三萜類化合物的相關(guān)代謝研究甚少,但是丹參中也含有許多具有藥用活性的三萜類化合物,所以對(duì)三萜類化合物代謝途徑的解析還有待研究。本文在前期建立的丹參轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)的基礎(chǔ)上,對(duì)轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行深度挖掘,獲得了一個(gè)2,3-環(huán)氧角鯊烯環(huán)化酶的unigene序列,進(jìn)一步通過RACE技術(shù)得到2,3-環(huán)氧角鳘烯環(huán)化酶的cDNA全長(zhǎng)序列,并對(duì)這條2,3-環(huán)氧角鯊烯環(huán)化酶進(jìn)行克隆及功能鑒定。主要結(jié)果如下:1.從丹參中克隆得到了一個(gè)2,3-環(huán)氧角鯊烯環(huán)化酶基因SmOSC,全長(zhǎng)為2298bp,編碼765個(gè)氨基酸殘基,經(jīng)序列比對(duì)和進(jìn)化樹分析,推測(cè)這條基因可能在三萜類化合物的生物合成中編碼2,3-環(huán)氧角鯊烯環(huán)化酶。進(jìn)一步進(jìn)行生物信息學(xué)分析,通過PSORT在線服務(wù)器對(duì)SmOSC進(jìn)行了亞細(xì)胞定位分析,應(yīng)用ExPASy Proteomics Server中Prot... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：48 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１萜類化合物的生物合成途徑［１４］??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ?ｐａｔｈｗａｙ?ｏｆ?ｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ??

脂肪指數(shù)為２４．８９，親水性平均值（ＧＲＡＶＹ）為０．８１８。利用ｐｒｅｄｉｃｔｐｒｏｔｅｉｎ在線預(yù)測(cè)基因??編碼蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)，使用生物學(xué)軟件Ｓｗｉｓｓ－ｍｏｄｅｌ對(duì)其三維結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)并建立模型??（圖２－２），結(jié)果顯示螺旋結(jié)構(gòu)（Ｈｅｌｉｘ）占總氨基酸的４３．９８％，其他結(jié)構(gòu)占５６．０２％。??－１５－??

?小在１６００?ｂｐ左右，通過ＰＣＲ擴(kuò)增獲得的ＳｗａＳＣ的ｃＤＮＡ全長(zhǎng)在２３００?ｂｐ左右。??丨ＩＬ．Ｌ』??圖２－ｉ５＞？ａｓｃ基因的獲得??Ａ：細(xì)ＯＳＣ的ＶＲＡＣＥ的瓊脂糖凝膠電泳圖Ｂ：?ＳｍＯＳＣ全長(zhǎng)ｃＤＮＡ擴(kuò)增的瓊脂糖凝膠電??泳圖??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ?ｏｆ?ＳｍＯＳＣ?ｇｅｎｅ??Ａ：?Ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ＳｍＯＳＣ?５，ＲＡＣＥ?Ｂ：?ＳｍＯＳＣ?Ｆｕｌｌ－ｌｅｎｇｔｈ?ｃＤＮＡ?ｂｙ?Ａｇａｒｏｓｅ??Ｇｅｌ?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ??２．原核表達(dá)篩選陽(yáng)性單克隆，再經(jīng)測(cè)序后獲得其序列。將測(cè)序結(jié)果利用Ｖｅｃｔｏｒ?ＮＴＩ??軟件進(jìn)行拼接，對(duì)序列進(jìn)行ＯＲＦ查找后得到完整的編碼序列命名為辦７〇ＳＣ，對(duì)其ｃＤＮＡ??序列進(jìn)行預(yù)測(cè)分析，結(jié)果如下：??５ＶｗＯＳＣ基因經(jīng)序列比對(duì)后，發(fā)現(xiàn)它的全長(zhǎng)為２２９８?ｂｐ，一共編碼７６５個(gè)氨基酸殘基，??可能是一個(gè)皂苷三萜類環(huán)化酶基因。通過ＰＳＯＲＴ服務(wù)器亞細(xì)胞定位的分析，初步判斷??ＳｍＯＳＣ蛋白定位在細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)中。通過ＥｘＰＡＳｙ?Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ?Ｓｅｒｖｅｒ的在線軟件??Ｐｒｏｔｐａｒａｍ對(duì)蛋白的理化性質(zhì)進(jìn)行預(yù)測(cè)分析，分子量為１８．６３?ＫＤ，等電點(diǎn)Ｅ［為４．８７，消??光系數(shù)為３６１２５


本文編號(hào)：3112250