鯊烯合酶（squalene synthase,SS）是植物三萜生物合成通路中的一個(gè)關(guān)鍵酶,能催化兩分子的法呢基焦磷酸（farnesyl pyrophosphate,FPP）縮合生成鯊烯（Squalene,SQ）,SS在三萜合成通路中對(duì)后續(xù)產(chǎn)物有著至關(guān)重要的作用,其活性決定了后續(xù)產(chǎn)物的合成。近年來(lái)人們?cè)絹?lái)越重視如何提高SS的活性來(lái)增加三萜皂苷的含量。本研究采用cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)3’RACE及5’RACE的方法首次克隆得到雪膽鯊烯合酶SS基因全長(zhǎng)cDNA序列,同時(shí)對(duì)雪膽SS進(jìn)行了生物信息學(xué)和正選擇進(jìn)化分析,為探索正選擇位點(diǎn)與雪膽SS活性功能位點(diǎn)的潛在關(guān)系的奠定了基礎(chǔ),在氨基酸的進(jìn)化水平上探討三萜皂苷生物合成機(jī)制,希望能為增加三萜類皂苷產(chǎn)量提供有價(jià)值的信息。本論文的主要研究結(jié)果如下:1、雪膽SS基因的克隆:本研究主要采用3’RACE及5’RACE基因擴(kuò)增的方法,分別得到1200bp,630bp左右的序列,拼接得到雪膽SS基因cDNA序列,序列長(zhǎng)度為1609 bp,其中ORF序列長(zhǎng)度為1254 bp,編碼417個(gè)氨基酸殘基,經(jīng)預(yù)測(cè),雪膽SS蛋白的分子量大小約為47.81kD。2、雪膽SS... 

【文章來(lái)源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：99 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

三萜合成通路反應(yīng)步驟Fig.1.Thereactionstepsintriterpenoidsbiosynthesispathway

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器表 1-1 本實(shí)驗(yàn)所需相關(guān)儀器設(shè)備Table 1-1 The related experimental equipments in our research儀器與型號(hào) 儀器廠家PCR 儀 Biometra An Analylik Jena CompanyWD-9403F 紫外儀 北京六一儀器廠微波爐 格蘭仕微波爐電器有限公司多功能攪拌器 HJ-5 常州國(guó)華電器有限公司DYY-10C 型電泳儀 北京六一儀器廠圖 1-1 雪膽植物的塊根和葉子Fig.1-1 The root and leaves of Hemsleya chinensis

用DNAMAN軟件拼接和人工校對(duì)雪膽SS基因得雪膽 SS 基因全長(zhǎng) cDNA 序列。與分析膽總 RNA 電泳檢測(cè)照 RNAiso Plus RNA 提取試劑盒的方法提取-free 水溶解雪膽總 RNA，利用蛋白核酸分析儀示雪膽 RNA 的 A260/A280 比值為 1.9，表明滿足克隆雪膽 cDNA 全長(zhǎng)的需要。經(jīng) 1.5%瓊 28S，18S，5.8S 的條帶清晰分明(圖 1-2)，可見(jiàn)的雪膽總 RNA 可用于后續(xù)的克隆實(shí)驗(yàn)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]PR8F/NS1不同位點(diǎn)突變株對(duì)小鼠致病性的比較研究[J]. 崔卓棟,柴丹,解長(zhǎng)占,溫樹波,張萍,朱羿龍,劉云霞,李一權(quán),田明堯,金寧一.  病毒學(xué)報(bào). 2017(01)
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博士論文
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碩士論文
[1]葫蘆科栝樓屬植物鯊烯合酶SS基因克隆及原核表達(dá)[D]. 馬成通.廣西醫(yī)科大學(xué) 2016
[2]Collapsin反應(yīng)調(diào)節(jié)蛋白家族在神經(jīng)系統(tǒng)中的適應(yīng)性進(jìn)化與正選擇位點(diǎn)分析[D]. 唐艷艷.廣西醫(yī)科大學(xué) 2014
[3]擬南芥WRKY基因家族的進(jìn)化研究[D]. 郝博濟(jì).天津大學(xué) 2014
[4]植物三萜合成通路關(guān)鍵酶基因的適應(yīng)性進(jìn)化研究[D]. 劉鏞.廣西醫(yī)科大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3089561