黑果枸杞（Lycium ruthenicum Murr.）為茄科（Solanaceae）枸杞屬多年生落葉灌木植物,主要分布在我國(guó)西北部地區(qū)。果實(shí)富含豐富的花青素、多糖、礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),被稱之為天然的抗氧化劑。黑果枸杞不僅具有藥用價(jià)值和保健價(jià)值,作為西北地區(qū)荒漠化治理的先鋒樹種,還具有巨大的生態(tài)價(jià)值。近年來(lái),由于黑果枸杞生長(zhǎng)環(huán)境的惡化,加之種子在自然條件下萌芽率低、人們的破壞性采摘等原因,導(dǎo)致黑果枸杞的資源在很大程度上受到了破壞。目前,黑果枸杞已開始人工栽培,但在良種選育和繁殖、定向培育技術(shù)等方面的研究尚需進(jìn)一步加強(qiáng)。本研究利用SSR分子標(biāo)記技術(shù)研究了我國(guó)西北地區(qū)黑果枸杞種質(zhì)資源的遺傳多樣性及居群間的遺傳分化,并建立了黑果枸杞離體快繁體系,為我國(guó)黑果枸杞資源的保護(hù)、利用以及新品種的選育和繁殖提供了理論依據(jù)和技術(shù)支撐。主要研究結(jié)果如下:1.利用轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)開發(fā)并篩選出多態(tài)性好、條帶清晰的20對(duì)SSR引物用于黑果枸杞種質(zhì)資源的遺傳多樣性及親緣關(guān)系分析,并對(duì)SSR-PCR擴(kuò)增體系進(jìn)行了優(yōu)化。2.所有引物在黑果枸杞的樣品中均能有效擴(kuò)增,可以用于黑果枸杞的遺傳多樣性研究。其中,基于SSR標(biāo)記黑果枸... 

【文章來(lái)源】：南京林業(yè)大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

黑果枸杞采集點(diǎn)的地理位置分布圖

203結(jié)果與分析3.1黑果枸杞SSR引物篩選及遺傳多樣性3.1.1黑果枸杞DNA提取DNA模板是PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵基礎(chǔ)，提取高純度和高濃度DNA能夠保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。因此本研究采用兩種方法對(duì)DNA質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)，只有兩種方法都符合標(biāo)準(zhǔn)才能用于后續(xù)使用。用納米滴ND2000c分光光度計(jì)（ThermoScientific,USA）對(duì)提取的DNA濃度和純度進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)OD值（260/280）的比值判斷DNA的質(zhì)量，當(dāng)OD比值＜1.60時(shí)，說明DNA溶液中含有蛋白質(zhì)、多糖等雜志，當(dāng)OD比值＞1.90時(shí)，說明DNA溶液中有RNA或者裂解的核酸片段等雜質(zhì)，只有OD比值在1.70~1.90范圍之間的DNA溶液符合標(biāo)準(zhǔn)[136]。用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA質(zhì)量，通過條帶清晰度來(lái)判斷DNA質(zhì)量的好壞，當(dāng)條帶清晰完整，無(wú)拖尾雜帶現(xiàn)象，點(diǎn)樣孔無(wú)殘留亮帶時(shí)，說明DNA的質(zhì)量較高，反之較低。通過條帶的明亮程度來(lái)判斷DNA的濃度，條帶越亮則DNA濃度越高。182份黑果枸杞材料DNA瓊脂糖電泳條帶條帶清晰、無(wú)彌散拖尾等現(xiàn)象，OD比值均在1.70~1.90之間，純度較高，可滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)需求，其中用于篩選引物的6份黑果枸杞樣品DNA瓊脂糖凝膠電泳圖見圖2。圖26份黑果枸杞植株基因組DNA瓊脂糖電泳圖Fig.2GenomicDNAsamplesdetectedonagarosegelof6LyciumruyheniumMurr.3.1.2黑果枸杞轉(zhuǎn)錄組序列拼接和功能注釋以NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)下載的黑果枸杞轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)，在去除低品質(zhì)的原始序列后，共獲得121499條高品質(zhì)干凈序列，長(zhǎng)度從201bp到23514bp不等，平均約為2053.64bp。其中GC含量約為33.95%（表4）。在對(duì)黑果枸杞轉(zhuǎn)錄組序列進(jìn)行拼接組裝后，通過與6個(gè)功能數(shù)據(jù)庫(kù)（Nr；Swiss-Prot；

22圖3黑果枸杞功能基因在基因本體（GO）中的功能分類Fig.3FunctionalclassificationofGeneOntology(GO)forassembleunigenesofLyciumruyheniumMurr.注：共有41484個(gè)unigenes被分配到48個(gè)三類功能組中。Note:atotalof41,484Unigeneswereassignedto48functionalgroupsofthreetypes

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3063803