由于干旱、鹽堿等非生物脅迫因子已經成為影響當前農作物種植的重要因素,提高農作物本身的抗逆能力變得尤為重要。作為水稻的變種,旱稻在某些逆境中有著自己獨特的優(yōu)勢,因此優(yōu)化旱稻性狀也越來越成為熱門的研究方向。本課題是對前期獲得的轉小立碗蘚胚胎發(fā)育晚期豐富蛋白家族LEA₃亞家族樣蛋白基因（Gene ID:112289949,將該基因命名為LEA8981）的旱稻轉基因株系后代進行篩選和分析,主要結果如下:將篩選得到的候選純合轉基因株系進行Southern雜交分析,以鑒定外源基因（LEA8981）拷貝數(shù)。獲得了2個單拷貝株系、10個2拷貝株系和9個多拷貝株系,并將其中12個含有1-2拷貝數(shù)的株系進行了RT-PCR分析,以分析各個低拷貝株系中LEA8981基因的相對表達水平,結果顯示,有7個株系中LEA8981的轉錄水平較高,為后續(xù)篩選具有優(yōu)良抗逆性的旱稻新品系奠定了基礎。研究中發(fā)現(xiàn),與野生型相比,單拷貝轉基因純合株系3-28明顯矮化,且能穩(wěn)定遺傳。對其進行Tail-PCR檢測,證明LEA8981基因已經穩(wěn)定整合到基因組10號染色體中,并確定了具體的插入位點。為進一步明確該株系... 

【文章來源】：河北科技大學河北省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

轉基因植株實驗室除草劑篩選注：A和B分別是株系3-20噴除草劑和噴除草劑5天后的對比圖；C和D分別是株系3-54噴除草劑和噴除草劑5天后的對比圖

圖 2-2 轉 LEA8981 基因質粒電泳結果注：M 為 Marker，1、2、3、4 分別為所提的四管質粒系的 PCR 檢測結果及分析結果為純合的株系每個株系提取 18 個以上的單株檢測，其中以質粒為模板作為陽性對照，簡寫為號野生型為模板作為陰性對照，簡寫為“-”；無菌株提取的 DNA 作為模板進行 PCR 擴增，產物分3 所示，陽性對照有特異條帶，陰性對照和空白對照，并且和質粒擴增的條帶大小一致，因此可以初有目的基因，即為候選純合株系。圖 2-4 所示，陽白對照沒有條帶，1-21 號大部分樣品有條帶，但 只是后代部分單株含有目的基因，即該株系為雜選出的 44 個株系全部進行 PCR 檢測，共篩選出 個。

圖 2-2 轉 LEA8981 基因質粒電泳結果注：M 為 Marker，1、2、3、4 分別為所提的四管質粒2.4.3 轉基因株系的 PCR 檢測結果及分析將除草劑鑒定結果為純合的株系每個株系提取 18 個以上的單株的 DNA 進行目的基因的 PCR 擴增檢測，其中以質粒為模板作為陽性對照，簡寫為“+”；未轉入目的基因的鯤旱 1 號野生型為模板作為陰性對照，簡寫為“-”；無菌水為空白對照，簡寫為“水”；待測單株提取的 DNA 作為模板進行 PCR 擴增，產物分別編號為 1~21，檢測結果如下圖 2-3 所示，陽性對照有特異條帶，陰性對照和空白對照均無條帶，1~21號全部有特異條帶，并且和質粒擴增的條帶大小一致，因此可以初步認定為該株系的各個單株全部含有目的基因，即為候選純合株系。圖 2-4 所示，陽性對照有特異條帶，陰性對照和空白對照沒有條帶，1-21 號大部分樣品有條帶，但 4、13、14 沒有條帶，說明該株系只是后代部分單株含有目的基因，即該株系為雜合株系。以此為標準，將除草劑篩選出的 44 個株系全部進行 PCR 檢測，共篩選出了候選純合株系42 個，雜合株系 2 個。

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3061939