水稻功能基因組學(xué)的快速發(fā)展,不但為水稻遺傳研究提供有力的工具,也為育種者通過(guò)分子標(biāo)記定向改良水稻品種提供了可靠的信息支持。可行高效的基因定向改良需要全面地了解目標(biāo)性狀的遺傳基礎(chǔ),開(kāi)發(fā)DNA分子標(biāo)記,篩選驗(yàn)證與目標(biāo)性狀關(guān)聯(lián)的分子位點(diǎn),從而精確地設(shè)計(jì)育種方案。然而,兼具高密度、高準(zhǔn)確率、檢測(cè)簡(jiǎn)便并低成本的分子標(biāo)記技術(shù)體系的缺乏,阻礙了分子標(biāo)記在育種中的實(shí)踐應(yīng)用。隨著水稻基因組計(jì)劃的不斷深入,以SNP（單核苷酸多態(tài)性）為核心的新一代分子標(biāo)記將大幅度提高分子標(biāo)記育種效率。在SNP分型技術(shù)中,KASP（競(jìng)爭(zhēng)性等位基因PCR）檢測(cè)方法支持低、中、高通量SNP檢測(cè),且成本低、準(zhǔn)確性高,具有良好的應(yīng)用前景。本研究針對(duì)性地檢索國(guó)際水稻基因組數(shù)據(jù)庫(kù)和文獻(xiàn)資源,獲得批量的有用SNP位點(diǎn),以481份廣泛分布于國(guó)內(nèi)外的水稻種質(zhì)為材料,設(shè)計(jì)開(kāi)發(fā)覆蓋水稻全基因組的基于KASP基因分型技術(shù)的SNP標(biāo)記體系。以與水稻產(chǎn)量及品質(zhì)高度相關(guān)的籽粒為目標(biāo)性狀,展開(kāi)分子標(biāo)記與性狀的關(guān)聯(lián)研究。主要研究結(jié)果如下:1、利用Wx_Intron1_K、Badh2-E7、ALK和Pita標(biāo)記的Sang... 

【文章來(lái)源】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：123 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

KASP原理示意圖

綠色數(shù)據(jù)點(diǎn)）；為確保結(jié)果的可靠性，必須包括沒(méi)有任何模板 DNA 的 KASP 反應(yīng)作為陰性對(duì)照，這通常被稱為空白對(duì)照或 NTC，NTC 將不產(chǎn)生任何熒光，因此數(shù)據(jù)點(diǎn)將繪制在原點(diǎn)（圖 2 中的黑色數(shù)據(jù)點(diǎn)）。具有相同基因型的所有樣品將產(chǎn)生相似水平的熒光，因此在圖上所有樣品都靠近在一起。基于這些簇的相對(duì)位置，可以確定所有數(shù)據(jù)點(diǎn)的基因型。

Wx_Intron1_K 標(biāo)記針對(duì) Wxb基因的第一個(gè)內(nèi)含子+1 位點(diǎn)的 G/T SNP 設(shè)計(jì)而成，能夠區(qū)分單堿基 G/G、T/T 和 G/T 三種基因型。利用已知基因型的材料（編號(hào)為 C286、C289、C290、C291 的材料為基因型為 T/T；編號(hào)為 C279、C280、C281 的材料基因型為 G/G；編號(hào) C250、C251、C252、C253 的材料基因型為 T/G。對(duì)該標(biāo)記進(jìn)行 KASP擴(kuò)增體系的檢測(cè)，所得到的 KASP 分型結(jié)果如圖 3-a�；蛐头謩e為 T/T、G/G 和 T/G的材料顯示了不同的熒光信號(hào)并根據(jù)其熒光信號(hào)很明顯地聚集在左上角、右下角及其中間，各個(gè)基因型得到了良好的區(qū)分。為了驗(yàn)證 KASP 結(jié)果的準(zhǔn)確性，將其與 Sanger測(cè)序的結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。測(cè)序結(jié)果（圖 3-b、c、d）表明，純合基因型 T/T、G/G 的材料C286、C289、C290、C291、C279、C280、C281 顯示了對(duì)應(yīng)的單峰，而雜合基因型T/G 的材料 C250、C251、C252、C253 則顯示雙峰�？梢�(jiàn)，KASP 標(biāo)記 Wx_Intron1_K的分型結(jié)果與 Sanger 測(cè)序的結(jié)果完全一致。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]基于HRM技術(shù)的水稻全基因組SNP標(biāo)記開(kāi)發(fā)及其初步應(yīng)用[D]. 郭海洋.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]水稻粒型性狀的遺傳研究及主效QTL的精細(xì)定位[D]. 江靜.浙江師范大學(xué) 2014
[3]高分辨率熔解曲線分析技術(shù)（HRM）系統(tǒng)的建立及其在基因多態(tài)性和突變檢測(cè)方面的應(yīng)用[D]. 潘登.復(fù)旦大學(xué) 2013
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本文編號(hào)：3048253