我國(guó)是玉米種植大國(guó),玉米質(zhì)量問(wèn)題至關(guān)重要,為保證其質(zhì)量,除了良好的品種之外,品種的真實(shí)性、純度等問(wèn)題也是不可忽略的。近年來(lái),隨著分子標(biāo)記的廣泛應(yīng)用,玉米的真實(shí)性和純度鑒定變得更為簡(jiǎn)單和準(zhǔn)確。本研究以玉米全基因組重測(cè)序數(shù)據(jù)開(kāi)發(fā)出的新的核基因組SSR標(biāo)記以及葉綠體的InDel標(biāo)記為基礎(chǔ),利用新的SSR標(biāo)記建立多重PCR和電泳體系、構(gòu)建DNA指紋數(shù)據(jù)庫(kù),便于高通量玉米的真實(shí)性和純度鑒定,采用葉綠體InDel標(biāo)記對(duì)玉米核基因組上無(wú)法鑒定的信息,比如玉米正反交的快速鑒定進(jìn)行進(jìn)一步補(bǔ)充。第一部分:Perfect SSR多重PCR體系建立及數(shù)據(jù)庫(kù)的構(gòu)建。本研究以玉米的重測(cè)序數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)并設(shè)計(jì)了一批SSR標(biāo)記,根據(jù)染色體位置、擴(kuò)增片段大下、熒光顏色等信息從111對(duì)新的SSR引物中挑選出適合組成多重PCR的40對(duì)新SSR引物。通過(guò)熒光定量PCR和瓊脂糖凝膠電泳確定了多重PCR的最適DNA濃度及最適擴(kuò)增條件,以24個(gè)代表性玉米品種為研究材料,其中包括目前推廣面積較廣的4套三聯(lián)體材料和12個(gè)玉米骨干自交系,對(duì)40對(duì)新引物進(jìn)行篩選和優(yōu)化并從中最終挑選出32對(duì)引物,組建了4組8重PCR擴(kuò)增,2組16重電泳,以... 

【文章來(lái)源】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖124個(gè)DNA（200ng/μL）瓊脂糖凝膠電泳圖

圖 2 不同 DNA 濃度對(duì)引物的影響Figure 2 Impact of different DNA concentration on primer(ng/μL)

圖 3 不同 DNA 濃度下達(dá)到平臺(tái)期的所需循環(huán)數(shù)及擴(kuò)增產(chǎn)物量Figure 3 Cycles and amplification product amount of different DNA concentration以上四個(gè)濃度的基礎(chǔ)上又進(jìn)行了 DNA 濃度為 5 ng/μL 的擴(kuò)增效果對(duì)比，并對(duì) DNA 濃度進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，比較它們和擴(kuò)增達(dá)到平臺(tái)期的所需循環(huán)數(shù)和產(chǎn)物趨勢(shì)和關(guān)系（圖 3）�？梢钥闯鲭S著 DNA 濃度的不斷增加，所需循環(huán)數(shù)逐漸降A(chǔ) 濃度在 12.5 ng/μL 時(shí)，擴(kuò)增產(chǎn)物量達(dá)到頂峰，高于或者是低于此值擴(kuò)增產(chǎn)物所降低，因此后續(xù)的試驗(yàn)樣品濃度均采用 12.5 ng/μL。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：2985690