ZTL、LKP2以及FKF1作為一種藍(lán)光受體被發(fā)現(xiàn)。它們編碼的蛋白質(zhì)具有LOV結(jié)構(gòu)域、F-box結(jié)構(gòu)域及Kelch repeat結(jié)構(gòu)域,因此被稱為L(zhǎng)FKs家族。在擬南芥中,LFKs作為SCF復(fù)合體的組分,通過(guò)多泛素化介導(dǎo)的26S蛋白酶體降解途徑參與開(kāi)花期和生物鐘的調(diào)控過(guò)程。OsZTL1和OsZTL2是水稻中LFKs基因家族的成員,分別是擬南芥ZTL和LKP2的同源基因。但是,水稻中的OsZTL1和OsZTL2的功能未知。為了研究它們的功能,我們利用RNA干涉技術(shù),構(gòu)建了OsZTL1和OsZTL2表達(dá)水平下調(diào)的轉(zhuǎn)基因材料,深入研究了OsZTL1和OsZTL2的功能及其作用的分子機(jī)制。主要的研究結(jié)果如下:1.水稻中OsLFKs家族與擬南芥LFKs高度保守。通過(guò)生物信息學(xué)的方法,找到水稻中的LFK基因,即OsZTL1、OsZTL2和OsFKF1。通過(guò)氨基酸序列比對(duì)發(fā)現(xiàn),OsLFKs與擬南芥LFKs具有高度的保守性,它們都具有LOV,F-box以及Kelch repeat結(jié)構(gòu)域。2.水稻OsZTL1和OsZTL2與擬南芥LFKs功能存在差異。為確定OsZTL1和OsZTL2是否與擬南芥LFKs... 

【文章來(lái)源】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：100 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

高等植物中GA的主要合成和代謝途徑(Olszewskietal.,2002)

1.3 LFKs 基因家族2000 年，Nelson 等人在擬南芥中發(fā)現(xiàn)了一類具有藍(lán)光受體結(jié)構(gòu)域，同時(shí)還具 有 E3 泛 素 連 接 酶 活 性 的 蛋 白 家 族 —ZEITLUPE (ZTL)/LOV KELCHPROTEIN2 (LKP2)/FLAVIN-BINGING KELCH REOEAT F-BOX 1 (FKF1)，在生物鐘和開(kāi)花期調(diào)控中具有重要作用 (Kiyosue and Wada, 2000; Nelson et al., 2000;Somers et al., 2000)。LFK 家族具有三個(gè)保守的結(jié)構(gòu)域，包括靠近 N 端的 LOV 結(jié)構(gòu)域，F(xiàn)-box 結(jié)構(gòu)域以及 C 端的 Kelch repeat 結(jié)構(gòu)域 (Zoltowski and Imaizumi,2014)。LOV 結(jié)構(gòu)域?qū)儆?Per-ARNT-Sim（PAS）家族，通常作為藍(lán)光受體行駛功能 (Christie et al., 1999; Demarsy and Fankhauser, 2009)。F-box 結(jié)構(gòu)域是SKP-Cullin-Rbx-F-box (SCF) E3 泛素連接酶復(fù)合體的組份 (Takahashi et al.,圖 1-3 67 種陸地植物中的 171 個(gè) LFKs 基因的進(jìn)化樹(shù) (Liu et al., 2018b)Figure 1-3 A Bayesian tree inferred from the full-length protein sequencesof 171 LFKs in 67land plants (Liu et al., 2018b)

試驗(yàn)中所用試劑試驗(yàn)中，PCR 擴(kuò)增需要的酶，訂購(gòu)于 TaKaRa 公司的常規(guī) Taq 酶、北京全式司的高保真酶 FastPfu；載體構(gòu)建過(guò)程中所使用的試劑有常規(guī)的限制性內(nèi)切酶接酶 Solution I、T-載體 pMD18-T，購(gòu)買于 TaKaRa 公司；試驗(yàn)中瓊脂糖凝膠需要的瓊脂糖、DNA Marker III 購(gòu)買于天根生物科技有限公司；瓊脂糖凝膠回在 OMEGA 公司購(gòu)買（貨號(hào)：D2500）；植物總 RNA 提取試劑 RNAisoPlus To自 TaKaRa 公司（貨號(hào)：D9108A）；RNase-Free Dnase 來(lái)自 Promega 公司（6101）；反轉(zhuǎn)錄試劑盒來(lái)自 Fermentas 公司（貨號(hào)：K1622）；Real-time PCR劑 SYBR Premix EX Taq 購(gòu)買于 TaKaRa 公司（貨號(hào)為：RR041A）；潮霉素試德國(guó) Roche；其余試驗(yàn)中的一些常規(guī)試劑領(lǐng)取于沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)設(shè)備科。圖 2-3 水稻 RNAi 載體 pTCK303 結(jié)構(gòu)圖Figure 2-3 Plasmid profile of pTCK303


本文編號(hào)：2907347