作為人體必需微量元素的硒(Se,Selenium),對人體的健康具有重要的影響,不僅具有防癌抗癌、抗氧化的功能,還可以增強(qiáng)人體的免疫力。在自然界中,硒主要以無機(jī)硒和有機(jī)硒的形式存在。與無機(jī)硒相比,有機(jī)硒的安全性和可利用性更高。通過將無機(jī)硒施加到植物或農(nóng)作物中,可以使其中的無機(jī)硒轉(zhuǎn)化為有機(jī)硒,從而進(jìn)入到食物鏈中,使人們能夠達(dá)到安全補(bǔ)硒的目的。被稱為“長壽果”的花生是我國重要的油料作物和經(jīng)濟(jì)作物,不僅具有很好的營養(yǎng)保健功能,而且還有很強(qiáng)的富硒能力。本文以黑花生為研究對象,采用三種施硒方式(葉面施硒、土壤施硒、土壤和葉面共同施硒),探究不同施硒方式,不同施硒濃度對花生的生理特性,總硒含量,各部位的硒含量,以及花生籽粒中硒蛋白、硒多糖、蛋白中硒含量、多糖中硒含量;并采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)(HPLC-ESI-MS)對葉面施硒下花生中硒甲基硒代半胱氨酸(C_4H_9NO_2Se)、硒代蛋氨酸(C_5H_(11)NO_2Se)和硒代胱氨酸(C_6H_(12)N_2O_4Se_2)等有機(jī)硒以及無機(jī)硒進(jìn)行定性定量分析,得出了以下結(jié)論:1)出苗率:采用土壤施硒,土壤、葉面同時(shí)施硒的方法,硒濃度大小對花生出苗率有一定影響,具體表現(xiàn)為:花生的出苗率在0.1~2.0 mg·L~(-1)的施硒濃度下高于對照組,當(dāng)施硒量為2.0 mg·L~(-1)時(shí),出苗率達(dá)到最高值,但當(dāng)施硒量為2.5mg·L~(-1)時(shí),無論采用哪種施硒方式,出苗率都急劇下降。株高:在三種施硒方式下,花生的株高隨著施硒濃度的增大,均出現(xiàn)先增大后減小的趨勢。對于葉面施硒、土壤葉面共同施硒方式,富硒營養(yǎng)液濃度在0.1 mg·L~(-1)到2.0 mg·L~(-1)之間,花生株高增加顯著,在2.0 mg·L~(-1)時(shí)達(dá)到最大。并且葉面施硒效果略好于土壤葉面共同施硒的效果。當(dāng)施硒濃度大于2.0 mg·L~(-1)時(shí),隨著施硒濃度的增加,花生的株高開始下降。產(chǎn)量:施加硒肥可以明顯提高花生產(chǎn)量,相比對照組,葉面施硒、土葉施硒和土壤施硒產(chǎn)量最大分別可提高30.1%,17.5%和15.1%。施硒梯度為2.5 mg·L~(-1)時(shí),葉面施硒、土壤施硒、土壤和葉面共同施硒的花生產(chǎn)量達(dá)到最大值,可知葉面施硒提高花生產(chǎn)量的效果最好,土壤葉面共同施硒次之,土壤施硒效果相對差一些。葉綠素含量:三種施硒方式對花生葉中葉綠素含量各不相同。葉面施硒的花生葉葉綠素隨著施硒濃度的增大而降低,葉綠素最低相比對照組降低29.8%;而采用土壤施硒時(shí),花生葉的葉綠素含量大體上隨著施硒濃度的增大而升高,當(dāng)施硒濃度達(dá)到3.0 mg·L~(-1)時(shí),葉綠素含量達(dá)到最大,相比對照組提高32.4%。2)花生樣品消解條件優(yōu)化結(jié)果:a.稱取0.2 g花生粉末加入5 mL HNO_3,第一工步為120℃、5 min、10 min、6 kw;第二工步為150℃、5 min、10 min、6 kw。b.稱取0.1g花生葉或殼加入4mL HNO_3與1mL HF,消解條件為:第一工步為100℃、5 min、5 min、6 kw;第二工步為120℃、5 min、15 min、6 kw。采用氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法對花生籽粒、花生殼和花生葉進(jìn)行硒含量的測定,結(jié)果顯示:在相同的施硒濃度下,硒在花生各部位的分布情況為花生籽粒花生殼莖葉,說明花生籽粒有很強(qiáng)的富集硒的能力。花生粒中含硒量隨著施硒量的增加而增加,超過2.0 mg·L~(-1)后,含硒量反而減少。3)不同施硒濃度對鹽溶態(tài)硒相對含量的影響不明顯,而其他四種形態(tài)硒在不同施硒濃度下都有相對較大的波動。當(dāng)施硒濃度為1.5 mg·L~(-1)時(shí),Tris-HCl溶解態(tài)、堿溶態(tài)、酸溶態(tài)的硒相對含量均達(dá)到最大值,分別為13%、37%、18%;而水溶態(tài)在施硒濃度達(dá)到1.0 mg·L~(-1)時(shí),就已經(jīng)達(dá)到最大值,水溶態(tài)硒占比為25%。并且這四種形態(tài)的硒相對含量隨施硒濃度的升高顯現(xiàn)。富硒花生中五種形態(tài)的硒相對含量的分布呈如下規(guī)律:堿溶態(tài)水溶態(tài)酸溶態(tài)Tris-HCl溶解態(tài)鹽溶態(tài)。在低濃度的施硒梯度下,隨著施硒濃度的增加會提高花生中可溶性蛋白和多糖的含量�；ㄉ械鞍孜窟h(yuǎn)大于多糖硒,在施硒濃度達(dá)到1.5 mg·L~(-1)時(shí),花生中蛋白硒占總硒的比例最大可達(dá)到51.88%;在施硒濃度達(dá)到0.5 mg·L~(-1)時(shí),花生中多糖硒占總硒的比例最大可為10.21%。4)采用HPLC-ESI-MS聯(lián)用技術(shù)對富硒花生中的硒甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸、硒代胱氨酸、硒酸鈉、亞硒酸鈉進(jìn)行定性定量分析,含量關(guān)系為:硒甲基硒代半胱氨酸硒代蛋氨酸硒代胱氨酸硒酸鈉亞硒酸鈉。隨著施硒量的增加,在一定程度上促進(jìn)了硒甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸、硒代胱氨酸、硒酸鈉、亞硒酸鈉的含量,并能提高其中硒含量,在施硒梯度為2.0 mg·L~(-1)時(shí),Se-MeSeCys、Se-Met和Se-Cys_2中Se濃度含量均達(dá)到最大值,分別為分別為627.9μg·kg~(-1)、615.4μg·kg~(-1)和73.3μg·kg~(-1),Na_2SeO_4中Se含量最高為11.0μg·kg~(-1),Na_2SeO_3中Se含量最高為2.9μg·kg~(-1)。低水平的硒可以積累更多的有機(jī)硒而高水平的硒會導(dǎo)致無機(jī)硒轉(zhuǎn)化為有機(jī)硒的速率減慢,造成硒累積現(xiàn)象。
【學(xué)位單位】：遼寧大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S565.2
【部分圖文】：

圖 0-1 測定痕量元素硒的主要方法Fig.0-1 Main method for determination of trace element selenium0.3.2 可溶性蛋白質(zhì)的測定方法目前，凱氏法，F(xiàn)olin-酚試劑法，紫外吸收法，縮二脲法，考馬斯藍(lán)染色等[13]是測定可溶性蛋白質(zhì)的常用方法。 然而，這些用于測定可溶性蛋白質(zhì)的方法具有其自身的不同限制，優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)，并且不是通用的。因此，鑒于某些干擾物質(zhì)會對測量結(jié)果產(chǎn)生一定的影響，而蛋白質(zhì)的性質(zhì)或多或少受到外界環(huán)境和化學(xué)因素等的影響， 研究者們優(yōu)化和篩選了可溶性蛋白質(zhì)不同的測定方法進(jìn)行條件，借此來測定可溶性蛋白質(zhì)，使得結(jié)果更加具有精確性和準(zhǔn)確性[14]。用于蛋白質(zhì)測量的考馬斯亮藍(lán)法（G-250）方法由 Bradford 于 1976 年發(fā)明。 因其具有靈敏、方便、精準(zhǔn)等測定的優(yōu)勢，所以得到了快速的推廣和廣泛的應(yīng)用。在自由狀態(tài)下，考馬斯亮藍(lán)染料的顏色為棕紅色，但與蛋白質(zhì)結(jié)合時(shí)，顏色為藍(lán)藍(lán)色;當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)含量在 0-1000μg 范圍內(nèi)時(shí)，蛋白質(zhì)-色素結(jié)合物的吸光度與 595 nm 處的蛋白質(zhì)

圖 0-2 微量元素硒的有機(jī)化途徑Fig.0-2 Organic path way of trace element selenium作為生物有機(jī)載體，植物，微生物，動物等可以富集硒[40]。其中植物作、大米、黃豆、西瓜等，是在作物生長過程中通過在其生長部位或生長施加一定量的外源硒肥，通常為無機(jī)硒，而作物在生長過程中將外源無為有機(jī)硒存儲在生命體中[41]，稱之為植物富集法。 在植物富集法的前，動物富集法是培育出讓動物食用的富硒飼料、牧草，通過動物自身消轉(zhuǎn)化，提高動物體內(nèi)的硒含量，主要是增加有機(jī)硒的含量。 市場上的，富硒豬肉以及富硒雞蛋即是通過該原理富集有機(jī)硒。微生物富集主要養(yǎng)基中添加某些外源硒，以及通過微生物代謝富集硒。如富硒藻類，富富硒蘑菇等[42,43]。通過吸收外源硒，植物、動物和微生物經(jīng)過體內(nèi)消陳代謝將外源硒轉(zhuǎn)化成為安全性高、生物可利用性強(qiáng)的有機(jī)硒。 由于硒產(chǎn)品開發(fā)利用方面尚處于初級階段，無論是富硒產(chǎn)品開發(fā)的深度性

圖 1-1 花生種植方式及梯度分布示意圖Fig.1-1 Diagram of peanut planting mode and gradient distribution

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2818675