【摘要】：7S球蛋白(β-conglycinin)是大豆最主要的過敏原蛋白之一;大豆種子脂氧酶的存在是大豆腥臭味產(chǎn)生的根源,它參與氧化種子不飽和脂肪酸形成小分子的己烯醛、醇、酮等具有腥臭味的物質(zhì),二者都是大豆深加工過程中必須去除的成分。因此,去除或降低7S球蛋白及脂氧酶含量,已成為大豆品質(zhì)改良育種研究目標(biāo)之一。本研究以7S球蛋白α′-、α-、β-亞基完全缺失材料“1003-44”為母本,以脂氧酶完全缺失材料“SI0162”為父本,通過人工雜交技術(shù),收獲F_1種子21粒,收獲F_2種子500粒。利用本實驗室先前創(chuàng)立的ISDS-PAGE技術(shù),分別對F_1、F_2代種子進行7S球蛋白α′-、α-、β-亞基缺失表型性狀進行鑒定。通過對脂氧酶缺失檢測方法的改良,確立了基于視覺比較分析的F_2雜交后代脂氧酶同工酶缺失鑒定新方法,利用該方法對F_1、F_2雜交后代脂氧酶同工酶缺失表型性狀進行了鑒定。得到以下研究結(jié)果:(1)通過本實驗室改良的ISDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠技術(shù),對新開發(fā)的視覺分析法鑒定脂氧酶同工酶進行輔助驗證,表明新開發(fā)的視覺分析法在鑒定F_2種子脂氧酶同工酶中,具有痕量取樣,快速、簡捷、準(zhǔn)確鑒定的優(yōu)點,對F_2雜交后代脂氧酶同工酶缺失性狀的鑒定是有效可行的,對培育食品加工專用型高附加值大豆新品種具有重要意義。(2)F_1代21個個體均為7S球蛋白α′-、α-、β-亞基缺失型,而脂氧酶均不缺失型。在F_2分離世代,只觀測到了7S球蛋白的α′-、α-、β-亞基完全缺失型(377)與野生型(121)兩種表型性狀,通過卡平方檢測,結(jié)果顯示在95%置信度范圍內(nèi)接近理論數(shù)的缺失型:野生型=3:1的比例�？梢酝贫�7S球蛋白亞基完全缺失性狀,與受單一隱性cgdef基因調(diào)控的7S球蛋白亞基缺失誘變突變體不同,7S球蛋白亞基缺失性狀是受1對顯性等位基因調(diào)控的質(zhì)量性狀,并可以穩(wěn)定遺傳給后代。(3)對F_2種子的脂氧酶(Lox-1,2,3)缺失檢測中,共觀測到4種表型,分別為Lox-1,2,3野生型(282),Lox-3缺失型(96),Lox-1,2缺失型(93),Lox-1,2,3缺失型(27),并對觀測到的4個表型性狀的分離比進行卡平方測試,結(jié)果顯示在95%置信度范圍內(nèi)接近理論數(shù)的Lox-1,2,3野生型:Lox-3缺失型:Lox-1,2缺失型:Lox-1,2,3缺失型=9:3:3:1的比例。表明脂氧酶完全缺失性狀是受2個隱性等位基因位點控制的質(zhì)量性狀。說明脂氧酶完全缺失與7S球蛋白亞基缺失,在基因聚合后的雜交后代中,各自缺失的遺傳機制并沒改變,這種雙缺失性狀基因的聚合不影響大豆的正常生長發(fā)育。
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S565.1
【圖文】：

圖 2-1 技術(shù)路線圖Figure 2-1 Technical approaches for the research2.4 數(shù)據(jù)分析實驗采用卡平方測驗（χ2test，Chi-squared test）方法，統(tǒng)計樣本的實際觀測值與理論推斷值之間的偏離程度，對實測數(shù)值與理論數(shù)值進行差異顯著性分析。

3 結(jié)果與分析3.1 7S 球蛋白亞基與脂氧酶雙缺失同步檢測方法的改良如圖 3-1 所示，是改良前的 SDS-PAGE 電泳獲得的圖譜，7S(α′、α、β-亞基)的條帶清晰可辨，但是脂氧酶三種同工酶的 Lox-1,Lox-2,Lox-3 由于分子量十分接近，在傳統(tǒng)凝膠中難以明顯區(qū)分鑒別。如圖 3-2 所示，是經(jīng)過改良后的 ISDS-PAGE 膠圖，其中泳道 1 顯示脂氧酶和7S 球蛋白亞基都不缺失，而且脂氧酶三個同工酶條帶 Lox-1,Lox-2,Lox-3 所對應(yīng)的條帶清晰可辨；泳道 2 和泳道 10 顯示脂氧酶（Lox-1,2,3）和 7S 球蛋白 α′、α、β-亞基全部缺失，這兩條條帶中的被檢測樣品所對應(yīng)的種子就是本研究首先需要篩選出來的實驗材料；泳道 3 顯示脂氧酶的 Lox-1 和 Lox-2 缺失，Lox-3 和 α′、α、β-亞基不缺失；泳道 4、7、11、12 顯示脂氧酶的 Lox-3 和 7S 球蛋白 α′、α、β-亞基缺失，Lox-1 和 Lox-2 不缺失；泳道 5、6、8、9 顯示脂氧酶（Lox-1,2,3）都不缺失，而 7S 球蛋白 α′、α、β-亞基全部缺失。

3 結(jié)果與分析3.1 7S 球蛋白亞基與脂氧酶雙缺失同步檢測方法的改良如圖 3-1 所示，是改良前的 SDS-PAGE 電泳獲得的圖譜，7S(α′、α、β-亞基)的條帶清晰可辨，但是脂氧酶三種同工酶的 Lox-1,Lox-2,Lox-3 由于分子量十分接近，在傳統(tǒng)凝膠中難以明顯區(qū)分鑒別。如圖 3-2 所示，是經(jīng)過改良后的 ISDS-PAGE 膠圖，其中泳道 1 顯示脂氧酶和7S 球蛋白亞基都不缺失，而且脂氧酶三個同工酶條帶 Lox-1,Lox-2,Lox-3 所對應(yīng)的條帶清晰可辨；泳道 2 和泳道 10 顯示脂氧酶（Lox-1,2,3）和 7S 球蛋白 α′、α、β-亞基全部缺失，這兩條條帶中的被檢測樣品所對應(yīng)的種子就是本研究首先需要篩選出來的實驗材料；泳道 3 顯示脂氧酶的 Lox-1 和 Lox-2 缺失，Lox-3 和 α′、α、β-亞基不缺失；泳道 4、7、11、12 顯示脂氧酶的 Lox-3 和 7S 球蛋白 α′、α、β-亞基缺失，Lox-1 和 Lox-2 不缺失；泳道 5、6、8、9 顯示脂氧酶（Lox-1,2,3）都不缺失，而 7S 球蛋白 α′、α、β-亞基全部缺失。

【參考文獻】

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1 謝雄澤;藕冉;姜妍;王紹東;王浩;;世界大豆需求與生產(chǎn)動向分析——PS&D Online50年統(tǒng)計數(shù)據(jù)[J];大豆科技;2015年02期

2 張國敏;張亞琴;舒英杰;麻浩;;三種大豆種子貯藏蛋白亞基缺失種質(zhì)的篩選與鑒定[J];大豆科學(xué);2015年01期

3 拓云;霍彩琴;田福東;宋波;申麗威;魏曉雙;國博聞;李文濱;劉珊珊;;SSR標(biāo)記輔助回交轉(zhuǎn)育大豆7S球蛋白α-亞基致敏蛋白缺失新品系[J];中國油料作物學(xué)報;2014年01期

4 宋波;藍嵐;田福東;拓云;白月;姜自芹;申麗威;李文濱;劉珊珊;;大豆7S球蛋白α'亞基缺失及(α'+α)亞基雙缺失品系的回交轉(zhuǎn)育[J];作物學(xué)報;2012年12期

5 王紹東;李遠明;劉偉;姜妍;王浩;于佳;李文濱;高橋浩司;;聚丙烯酰胺凝膠電泳快速檢測大豆過敏原蛋白Gly m Bd30K缺失方法[J];大豆科學(xué);2011年04期

6 王紹東;姜妍;王浩;劉偉;李遠明;李宏偉;李文濱;;新聚丙烯酰胺凝膠電泳快速檢測大豆脂氧酶缺失方法[J];大豆科學(xué);2011年03期

7 劉珊珊;滕衛(wèi)麗;姜自芹;張彬彬;葛玉君;刁桂珠;鄭天慧;曾蕊;吳帥;李文濱;;大豆7S球蛋白α-亞基缺失型種質(zhì)創(chuàng)新[J];作物學(xué)報;2010年08期

8 李杰;;我國大豆產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀及其發(fā)展對策研究[J];內(nèi)蒙古統(tǒng)計;2010年02期

9 譚林;武拉平;;中國大豆需求及供需平衡分析[J];農(nóng)業(yè)經(jīng)濟問題;2009年11期

10 劉淵;張孟臣;張彩英;馬峙英;;大豆脂氧酶分析鑒定技術(shù)的研究進展及在育種中的應(yīng)用[J];中國農(nóng)學(xué)通報;2007年07期

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1 謝雄澤;脂氧酶與7S球蛋白亞基雙缺失種質(zhì)資源創(chuàng)制及品質(zhì)性狀鑒定[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

2 閻彩霞;大豆脂氧酶缺失突變基因的遺傳分析與定位[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

本文編號：2799932