【摘要】：大豆是世界上重要的油料作物,我國又是大豆油消費大國。但由于我國大豆種子含油量較低,不能自給自足,很大程度上依賴進(jìn)口。因此,培育高油大豆新品種成為解決問題的主要途徑。傳統(tǒng)育種手段由于工作量大、周期長、效率低等缺點不能滿足農(nóng)業(yè)生產(chǎn)對于高油大豆的需求。隨著近些年基因工程與分子育種水平的飛速發(fā)展,通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得高油大豆種質(zhì)資源成為最主要的研究方式。擬南芥中研究發(fā)現(xiàn),WRI1轉(zhuǎn)錄因子可以調(diào)控種子脂肪酸合成,是油脂合成路徑中的重要調(diào)節(jié)因子。而且,本實驗前期從大豆中分離了大豆GmWRI1基因,并將其轉(zhuǎn)入受體DN50中,結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因大豆種子的油分含量顯著提高。為了進(jìn)一步篩選目標(biāo)性狀突出,且具有重要育種應(yīng)用價值的高油轉(zhuǎn)基因大豆株系,本研究以本實驗室已獲得的T3代轉(zhuǎn)GmWRI1a基因大豆6個株系的植株為試驗材料,在基因水平和蛋白水平,對轉(zhuǎn)基因大豆進(jìn)行了分子水平檢測。并對轉(zhuǎn)基因大豆植株進(jìn)行了種子含油量、蛋白質(zhì)含量等品質(zhì)性狀、農(nóng)藝性狀和對非靶標(biāo)生物的抗性以及基因漂移等進(jìn)行了分析。研究結(jié)果主要如下:(1)利用130mg/L的草銨膦涂抹、RCR擴增和Southern blot檢測方法對轉(zhuǎn)GmWRI1a基因大豆株系進(jìn)行篩選鑒定,證明轉(zhuǎn)GmWRI1a基因的大豆株系能夠穩(wěn)定遺傳并且Bar基因以寡拷貝和多拷貝的形式插入到受體基因組中。(2)利用Western blot技術(shù)檢測外源Bar蛋白在轉(zhuǎn)基因大豆中的表達(dá),結(jié)果證明Bar蛋白在轉(zhuǎn)基因大豆中得到了表達(dá)。(3)對過表達(dá)GmWRI1a基因大豆種子的油分和蛋白質(zhì)含量進(jìn)行測定,證明高油性狀可以穩(wěn)定遺傳,但蛋白質(zhì)含量降低。(4)對過表達(dá)GmWRI1a基因大豆農(nóng)藝性狀進(jìn)行調(diào)查,結(jié)果表明過表達(dá)GmWRI1a基因大豆株系和對照DN50相比,出苗率、生育期以及其他農(nóng)藝性狀指標(biāo)未發(fā)現(xiàn)顯著差異,但部分株系的株高、主莖節(jié)數(shù)和分枝數(shù)發(fā)生顯著變化,說明GmWRI1a基因過量表達(dá)可能對轉(zhuǎn)基因植株的株高、節(jié)數(shù)和分枝數(shù)造成影響。(5)對轉(zhuǎn)GmWRI1a基因大豆植株進(jìn)行基因漂移鑒定,檢測結(jié)果顯示,在距離種植區(qū)域50m以內(nèi)未發(fā)現(xiàn)基因漂移現(xiàn)象。(6)對過表達(dá)GmWRI1a基因大豆植株的菌核病、小菜蛾、食心蟲非靶標(biāo)病蟲害抗性進(jìn)行鑒定,結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因大豆植株與對照DN50植株一致,對非靶標(biāo)病蟲害不具有抗性。(7)對過表達(dá)GmWRI1a基因大豆種子的品質(zhì)性狀進(jìn)行測定。結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因大豆種子的可溶性還原糖、淀粉、纖維素、水分、灰分含量和對照DN50之間不具有明顯差異,但部分株系的脂肪酸組成差異性顯著,表現(xiàn)為硬脂酸的含量升高。
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S565.1
【圖文】：

技術(shù)路線圖

東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)碩士學(xué)位論文與分析達(dá) GmWRI1a 基因大豆植株檢測表達(dá) GmWRI1a 基因大豆植株草銨膦抗性檢測因作為篩選標(biāo)記基因，與 GmWRI1a 基因通過 T-DNA 插入同時導(dǎo)入因此使轉(zhuǎn)基因大豆同時具有草銨膦抗性。大豆幼苗期對其進(jìn)行草銨膦因大豆株系的初步篩選工作。待大豆植株第一個三出復(fù)葉長大后，銨膦對其最嫩的葉片進(jìn)行涂抹，3-5 天后觀察葉片的變化。結(jié)果顯示，，其他轉(zhuǎn)基因株系中均存在具有草銨膦抗性的植株，即葉片沒有發(fā)生3-1），可以初步認(rèn)定為是轉(zhuǎn)基因的大豆植株。

er；+：陽性質(zhì)粒；-：對照 DN50；1-6：DN50-352、DN50-356、DN50-118、DN50-351、DN50-36DN50-3 株系的轉(zhuǎn)基因陽性植株圖 3-2 35S+Bar 基因 PCR 檢測結(jié)果Fig.3-2 Detection results of 35S+Bar gene by PCR過表達(dá) GmWRI1a 基因大豆植株的 Southern blot 檢測了確定目的基因已插入到大豆基因組中，本研究利用 Bar 基因制作特異性探針進(jìn)n 雜交鑒定。利用 CTAB 高鹽法提取大量且質(zhì)量較高的 DNA，基因組經(jīng)過 HindIII 0.8%的瓊脂糖凝膠對酶切產(chǎn)物進(jìn)行分離，轉(zhuǎn)膜后利用 Bar 特異性探針雜交，并顯色示，泳道 2 和 3 植株有兩條帶，泳道 4、5 和 6 有三條帶，泳道 1 號有四條帶（圖 3-3源基因以寡拷貝和多拷貝的形式插入到了大豆 DN50 基因組中。

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3 巴國民;;論東北高油大豆的高產(chǎn)栽培[J];農(nóng)民致富之友;2016年22期

4 宣宇;;高緯高寒地區(qū)高油大豆品種生產(chǎn)田間管理注意事項[J];農(nóng)民致富之友;2017年01期

5 劉曉芳;;高油大豆栽培規(guī)程[J];農(nóng)民致富之友;2017年01期

6 趙雄偉;;高油大豆“兩早兩增 一勻一適”栽培技術(shù)[J];現(xiàn)代農(nóng)村科技;2017年09期

7 唐剛;;高油大豆高產(chǎn)栽培技術(shù)[J];北京農(nóng)業(yè);2015年34期

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9 劉鐵成;;淺談東豐縣高油大豆綜合配套栽培關(guān)鍵技術(shù)[J];農(nóng)民致富之友;2013年17期

10 張小虎;李晉花;;山西省早熟高油大豆育種目標(biāo)與育種技術(shù)[J];農(nóng)業(yè)科技通訊;2011年03期

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3 趙桂蘭;陳錦清;李望豐;胡張華;尹愛萍;;轉(zhuǎn)基因超高油大豆的獲得[A];中國植物生理學(xué)會第九次全國會議論文摘要匯編[C];2004年

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5 ;高油大豆保質(zhì)提質(zhì)技術(shù)[N];農(nóng)民日報;2004年

6 本報記者 劉偉霖;高油大豆改變種糧觀念[N];農(nóng)民日報;2004年

7 潘文博;黑龍江多措并舉大力發(fā)展高油大豆[N];農(nóng)民日報;2005年

8 記者 王國英;我區(qū)高產(chǎn)創(chuàng)建示范區(qū)糧油增產(chǎn)2.76億公斤[N];內(nèi)蒙古日報(漢);2009年

9 ;高油大豆怎樣保質(zhì)提質(zhì)[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2008年

10 喬建彬;我省育成首個早熟高油大豆新品種[N];山西經(jīng)濟(jì)日報;2008年

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2 白磊;施氮量與密度對高油大豆光合生產(chǎn)及產(chǎn)質(zhì)量的影響[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2019年

3 馮麗娟;不同基因型與環(huán)境因素對高油大豆品質(zhì)性狀的影響[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2007年

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5 畢冬梅;硫素營養(yǎng)對大豆生長及土壤微生物與酶活性影響研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

6 張鴻超;高油大豆和低油大豆油脂體對蛋黃醬品質(zhì)及穩(wěn)定性的影響[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

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