發(fā)布時間：2020-07-24 05:38

【摘要】：人參(Panax ginseng C.A.Mey)、西洋參(P.quinquefolius Linn.)、三七(P.notoginseng(Burk.)F.H.Chen)為五加科人參屬代表藥用植物,具有頗高的藥用和經(jīng)濟(jì)價值。本試驗首先以裂口人參種子、西洋參愈傷組織和三七愈傷組織為試材,通過探討裝載時間、脫水時間、冷凍保護(hù)劑種類等對其超低溫保存成活率的影響,建立起三者的超低溫保存體系;再以凍存過程中的西洋參愈傷組織為試材,通過生理生化指標(biāo)測定和超微結(jié)構(gòu)觀察,初步探討其超低溫保存存活機(jī)制,主要研究結(jié)果如下:1.人參裂口種子最佳超低溫保存方法為:將含水量為10%的裂口種子裝入凍存管密封后,迅速投入液氮,一周后取出,40℃水浴解凍,土播。30d后,統(tǒng)計出苗率可達(dá)85.80%。SSR分子標(biāo)記,未發(fā)現(xiàn)差異條帶。2.西洋參愈傷組織最佳超低溫保存程序為:將快速生長期的西洋參愈傷組織放入凍存管,加入60%PVS2溶液(MS+30%甘油+15%乙二醇+15%DMSO+0.4MSuc)室溫處理20min,隨后將溶液更換成100%PVS2,0℃處理40min后,迅速投入液氮,48h后取出,40℃水浴解凍,洗滌�；謴�(fù)培養(yǎng)60d后統(tǒng)計存活率為45%。SSR分子標(biāo)記,未發(fā)現(xiàn)差異條帶。3.三七愈傷組織最佳超低溫保存過程為:將快速生長期的三七胚性愈傷組織轉(zhuǎn)入凍存管后,加入冷凍保護(hù)劑PVS3溶液(MS+40%甘油+40%蔗糖),室溫下處理30min后更換新鮮冷凍保護(hù)劑,置于程序降溫儀,放入-80℃冰箱12h后,投入液氮,保持48h。取出,40℃水浴解凍,洗滌�；謴�(fù)培養(yǎng)30d后統(tǒng)計存活率為80%。SSR分子標(biāo)記,未發(fā)現(xiàn)差異條帶。4.對西洋參愈傷組織超低溫保存過程中可溶性蛋白質(zhì)、丙二醛(MDA)和過氧化物酶(POD)的測定結(jié)果表明:蛋白質(zhì)含量在裝載和脫水過程中增加,MDA含量下降,POD酶活性上升,解凍后細(xì)胞的蛋白質(zhì)含量開始下降,MDA含量劇增,POD酶活性有所下降。透射電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察發(fā)現(xiàn),西洋參愈傷組織細(xì)胞在經(jīng)過玻璃化液脫水處理后發(fā)生質(zhì)壁分離,隨著液氮凍存和解凍加深了質(zhì)壁分離的程度,部分細(xì)胞受到不可逆的傷害,部分細(xì)胞經(jīng)過恢復(fù)培養(yǎng)恢復(fù)正常生長。綜上,本試驗建立起人參、西洋參和三七組培材料的超低溫保存體系,可為其種質(zhì)資源的保存提供材料基礎(chǔ)和理論依據(jù);對其超低溫保存過程中的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行研究,以期為西洋參愈傷組織凍存機(jī)制的探討以及超低溫保存技術(shù)的優(yōu)化提供理論參考依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S567.51;S567.53;S567.236
【圖文】：

含水量對超低溫保存前后人參裂口種子生活力的影響

注：a 為人參對照組，b 為人參樣品組。圖 1.2 超低溫保存再生材料和與對照組Fig.2.1 Cryopreservation of recycled materials and control1.3.1.5 SSR 分子標(biāo)記結(jié)果參考楊成君等[11]關(guān)于人參 EST-SSR 的報道，以 pg668 為引物（上游序列CTGGCATCGAAGTTTCTCCATTC；下游序列 TGCATAGCACAGAGAGGAGG），對超低溫保存前后的人參裂口種子遺傳穩(wěn)定性進(jìn)行分析，見圖 1.3，結(jié)果表明：對照組與處理組相比均無差異條帶，人參超低溫保存材料具有較高的遺傳穩(wěn)定性。

注：a 為人參對照組，b 為人參樣品組。圖 1.2 超低溫保存再生材料和與對照組Fig.2.1 Cryopreservation of recycled materials and controlSR 分子標(biāo)記結(jié)果楊成君等[11]關(guān)于人參 EST-SSR 的報道，以 pg668 為引物（上游ATCGAAGTTTCTCCATTC；下游序列 TGCATAGCACAGAGAGGA保存前后的人參裂口種子遺傳穩(wěn)定性進(jìn)行分析，見圖 1.3，結(jié)果表處理組相比均無差異條帶，人參超低溫保存材料具有較高的遺傳

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陳加利;姜喜;肖巍;劉建亮;王琳;李志軍;;扁桃莖尖包埋玻璃化超低溫保存條件研究[J];塔里木大學(xué)學(xué)報;2014年02期

2 洪森榮;尹明華;王艾平;;江西鉛山紅芽芋胚性愈傷組織的玻璃化法超低溫保存及植株再生[J];廣西植物;2014年03期

3 洪森榮;尹明華;王艾平;;江西鉛山紅芽芋胚性愈傷組織的包埋玻璃化超低溫保存[J];植物科學(xué)學(xué)報;2014年01期

4 馬曉菲;張美珍;于元杰;;防風(fēng)愈傷組織的玻璃化法超低溫保存及再生[J];西北植物學(xué)報;2013年08期

5 王芳;石茹;王艦;;馬鈴薯莖尖玻璃化法超低溫保存后DNA甲基化的遺傳變異[J];分子植物育種;2013年03期

6 郭強(qiáng)梨;李忠愛;邵麗;王子成;;留蘭香莖尖超低溫保存及遺傳變異分析[J];河南農(nóng)業(yè)科學(xué);2012年06期

7 王躍華;劉益麗;林抗雪;馬良良;代勇;徐世軍;王曉蓉;;卷葉貝母愈傷組織超低溫保存關(guān)鍵技術(shù)研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年23期

8 耿興敏;黃蓓麗;羅鳳霞;吳祝華;裘建宇;;唐菖蒲花粉低溫保存過程中的生理生化特征[J];西北植物學(xué)報;2011年07期

9 趙喜亭;宋萍萍;王苗;趙月麗;郭婧;李明軍;;玻璃化超低溫保存對懷菊花再生苗形態(tài)及生理的影響[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年03期

10 白建明;陳曉玲;盧新雄;郭華春;辛霞;張志娥;辛萍萍;;馬鈴薯莖尖小滴玻璃化法超低溫保存及其再生植株的遺傳穩(wěn)定性[J];園藝學(xué)報;2010年09期

本文編號：2768401