發(fā)布時(shí)間：2020-07-24 05:38

【摘要】：人參(Panax ginseng C.A.Mey)、西洋參(P.quinquefolius Linn.)、三七(P.notoginseng(Burk.)F.H.Chen)為五加科人參屬代表藥用植物,具有頗高的藥用和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。本試驗(yàn)首先以裂口人參種子、西洋參愈傷組織和三七愈傷組織為試材,通過探討裝載時(shí)間、脫水時(shí)間、冷凍保護(hù)劑種類等對(duì)其超低溫保存成活率的影響,建立起三者的超低溫保存體系;再以凍存過程中的西洋參愈傷組織為試材,通過生理生化指標(biāo)測定和超微結(jié)構(gòu)觀察,初步探討其超低溫保存存活機(jī)制,主要研究結(jié)果如下:1.人參裂口種子最佳超低溫保存方法為:將含水量為10%的裂口種子裝入凍存管密封后,迅速投入液氮,一周后取出,40℃水浴解凍,土播。30d后,統(tǒng)計(jì)出苗率可達(dá)85.80%。SSR分子標(biāo)記,未發(fā)現(xiàn)差異條帶。2.西洋參愈傷組織最佳超低溫保存程序?yàn)?將快速生長期的西洋參愈傷組織放入凍存管,加入60%PVS2溶液(MS+30%甘油+15%乙二醇+15%DMSO+0.4MSuc)室溫處理20min,隨后將溶液更換成100%PVS2,0℃處理40min后,迅速投入液氮,48h后取出,40℃水浴解凍,洗滌。恢復(fù)培養(yǎng)60d后統(tǒng)計(jì)存活率為45%。SSR分子標(biāo)記,未發(fā)現(xiàn)差異條帶。3.三七愈傷組織最佳超低溫保存過程為:將快速生長期的三七胚性愈傷組織轉(zhuǎn)入凍存管后,加入冷凍保護(hù)劑PVS3溶液(MS+40%甘油+40%蔗糖),室溫下處理30min后更換新鮮冷凍保護(hù)劑,置于程序降溫儀,放入-80℃冰箱12h后,投入液氮,保持48h。取出,40℃水浴解凍,洗滌�；謴�(fù)培養(yǎng)30d后統(tǒng)計(jì)存活率為80%。SSR分子標(biāo)記,未發(fā)現(xiàn)差異條帶。4.對(duì)西洋參愈傷組織超低溫保存過程中可溶性蛋白質(zhì)、丙二醛(MDA)和過氧化物酶(POD)的測定結(jié)果表明:蛋白質(zhì)含量在裝載和脫水過程中增加,MDA含量下降,POD酶活性上升,解凍后細(xì)胞的蛋白質(zhì)含量開始下降,MDA含量劇增,POD酶活性有所下降。透射電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察發(fā)現(xiàn),西洋參愈傷組織細(xì)胞在經(jīng)過玻璃化液脫水處理后發(fā)生質(zhì)壁分離,隨著液氮凍存和解凍加深了質(zhì)壁分離的程度,部分細(xì)胞受到不可逆的傷害,部分細(xì)胞經(jīng)過恢復(fù)培養(yǎng)恢復(fù)正常生長。綜上,本試驗(yàn)建立起人參、西洋參和三七組培材料的超低溫保存體系,可為其種質(zhì)資源的保存提供材料基礎(chǔ)和理論依據(jù);對(duì)其超低溫保存過程中的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行研究,以期為西洋參愈傷組織凍存機(jī)制的探討以及超低溫保存技術(shù)的優(yōu)化提供理論參考依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S567.51;S567.53;S567.236
【圖文】：

含水量對(duì)超低溫保存前后人參裂口種子生活力的影響

注：a 為人參對(duì)照組，b 為人參樣品組。圖 1.2 超低溫保存再生材料和與對(duì)照組Fig.2.1 Cryopreservation of recycled materials and control1.3.1.5 SSR 分子標(biāo)記結(jié)果參考楊成君等[11]關(guān)于人參 EST-SSR 的報(bào)道，以 pg668 為引物（上游序列CTGGCATCGAAGTTTCTCCATTC；下游序列 TGCATAGCACAGAGAGGAGG），對(duì)超低溫保存前后的人參裂口種子遺傳穩(wěn)定性進(jìn)行分析，見圖 1.3，結(jié)果表明：對(duì)照組與處理組相比均無差異條帶，人參超低溫保存材料具有較高的遺傳穩(wěn)定性。

注：a 為人參對(duì)照組，b 為人參樣品組。圖 1.2 超低溫保存再生材料和與對(duì)照組Fig.2.1 Cryopreservation of recycled materials and controlSR 分子標(biāo)記結(jié)果楊成君等[11]關(guān)于人參 EST-SSR 的報(bào)道，以 pg668 為引物（上游ATCGAAGTTTCTCCATTC；下游序列 TGCATAGCACAGAGAGGA保存前后的人參裂口種子遺傳穩(wěn)定性進(jìn)行分析，見圖 1.3，結(jié)果表處理組相比均無差異條帶，人參超低溫保存材料具有較高的遺傳

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2768401