【摘要】：埃塞俄比亞芥(Brassicaca rinata)屬于十字花科蕓蔓屬,具有抗干旱、抗黑化病、抗銹病等多種抗逆性狀。其種子豐富的芥酸有多種工業(yè)用途。植物中芥酸生物合成主要受到脂肪酸延長(zhǎng)酶基因(FAE1)、油酸脫飽和酶(FAD2)基因和溶血性磷脂酸�；D(zhuǎn)移酶(LPAAT)基因調(diào)控。本實(shí)驗(yàn)在質(zhì)粒載體 pWatergate-napin-FAD2i-LLdLPAAT-KCS 基礎(chǔ)之上,加入海甘藍(lán)LPAAT-RNAi,構(gòu)建了四基因質(zhì)粒載體,調(diào)控埃塞俄比亞芥種子發(fā)育過程中芥酸的合成。利用標(biāo)記基因NPTII序列設(shè)計(jì)引物對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化TO代植株進(jìn)行鑒定。40個(gè)TO代陽性株系上收到的T1代種子一部分直接播種進(jìn)行NPTII引物和LdLPAAT引物PCR鑒定,一部分利用半粒法結(jié)合氣相色譜法對(duì)T1代進(jìn)行芥酸含量測(cè)定。對(duì)36個(gè)TO代株系中種子芥酸含量較高的4O個(gè)T1代株系進(jìn)行轉(zhuǎn)基因鑒定。本研究得到以下結(jié)果:(1)野生型埃塞俄比亞芥種子脂肪酸組分分析:挑取10顆野生型埃芥種子油進(jìn)行脂肪酸組分和芥酸含量分析,共檢測(cè)9種脂肪酸組分,得到其芥酸含量平均值為40.466%,油酸含量平均值為13.689%,亞油酸含量平均為16.871%,亞麻酸含量平均為13.934%;40個(gè)埃塞俄比亞芥T1代株系種子芥酸含量檢測(cè):(2)種子中芥酸含量超過48%的株系有4個(gè),分別為143-1-6、59-5-1、59-2-2、59-2-3,其對(duì)應(yīng)種子芥酸含量分別為48.582%、48.019%、48.413%、50.111%;芥酸含量最高的株系59-2-3亞麻酸含量為12.704%,亞麻酸含量為7.064%。相比野生型埃塞俄比亞芥種子,其芥酸含量提高了 23.83%,種子中油酸含量降低了 9.47%,亞油酸的含量下降了 24.69%,亞麻酸含量下降了 49.30%;(3)芥酸含量在45%-48%的株系有17個(gè)。其中株系6-3-4種子芥酸含量為46.498%,油酸含量為10.386%,亞油酸含量為17.892%,亞麻酸含量為12.905%,相比野生型種子,油酸含量降低24.13%,亞油酸含量提高6.05%,亞麻酸降低7.38%,芥酸含量提高14.90%;(4)芥酸含量在43%-45%的株系有19個(gè)。其中株系2-9-12種子芥酸含量為43.491%,油酸含量為8.485%,亞油酸含量為22.938%,亞麻酸含量為11.592%,相比野生型種子油酸含量降低了 38.01%,亞油酸含量提高了 35.96%,亞麻酸含量降低16.80%,芥酸含量提高7.47%;(5)對(duì)上述40個(gè)株系進(jìn)行轉(zhuǎn)基因鑒定,PCR結(jié)果表明芥酸含量高于48%的4個(gè)株系均能夠擴(kuò)增出NPTII和LdLPAAT目的片段。芥酸含量在45%-48%的17個(gè)株系均能鑒定出NPTII目的條帶,除株系22-1-1、22-3-2、48-1-1、59-3-6、52-1-1外,其他均能擴(kuò)增出LdLPAAT目的條帶。芥酸含量在43%-45%的19個(gè)株系中,除株系17-3-7、142-3-1外均能鑒定出NPTII目的條帶,余下17個(gè)株系中除株系176-1-4、51-1-1、6-4-2、47-1-1外,其他均能擴(kuò)增出LdLPAAT目的條帶;(6)上述40個(gè)株系中能夠鑒定出NP,TH目的片段的38個(gè)轉(zhuǎn)基因株系中,除株系59-2-3外,其余36個(gè)株系種子亞油酸含量均稍高于野生型,亞麻酸含量除株系5-2-5外,均低于野生型,這一結(jié)果表明FAD2i在這些轉(zhuǎn)基因T1代株系中并未達(dá)到預(yù)期的干擾作用。
【學(xué)位授予單位】：湖北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S565.4
【圖文】：

第１章緒論第１章緒論逡逑埃塞俄比亞芥簡(jiǎn)介逡逑比亞芥（５ｒａｓｓ／ｃ＜７？７ｒ／？ｆｌｆａ），又名非洲油菜、蕓芥，屬于十字花禹氏三角三個(gè)復(fù)合種之一，被認(rèn)為是由甘藍(lán)／ｇｒａ）雜交后，染色體在自然條件下加倍進(jìn)化而來隊(duì)埃塞俄比亞和蘇丹等國(guó)家發(fā)現(xiàn)和種植，栽培歷史悠久，在農(nóng)業(yè)方面前在許多國(guó)家和地區(qū)已有種植和研究。逡逑Ｂｒａｓｓｉｃａ邋ｎｉｇｒａ逡逑

般只連接在ｓｎ－１和ｓｎ－３位置上。逡逑１．２．邐２．邋３旱金蓮逡逑旱金蓮，旱金蓮科旱金蓮屬植物，是一種觀賞和藥用作物，起源于玻利維亞逡逑北部和哥倫比亞，目前已經(jīng)在美國(guó)的加利福尼亞、紐約、康乃迪克等地區(qū)種植［２８］。逡逑其種子中脂肪酸組成［２９］是：１０％的油酸（Ｃ１８：ｌ），邋２５％的花生烯酸（Ｃ２０：Ｏ和逡逑６５％的芥酸（Ｃ２２：ｌ），是自然界中發(fā)現(xiàn)的唯一的芥酸含量為６５％的高芥酸的植物。逡逑與十字花科甘藍(lán)型油菜相比，旱金蓮最大的不足就是種子的含油量太低，僅逡逑７％－８％，因此并不適合作為工業(yè)用高芥酸油料作物。逡逑１．２．邐２．邋４邋緞花逡逑鍛花，十字花科緞花屬植物，是一種觀賞性植物，原產(chǎn)于阿爾干以及西南。逡逑通常情況下為兩年生植物。ＥＦｅｈｌｉｎｇ等＿等對(duì)鍛花種子中三酰甘油的組分進(jìn)行逡逑了分析，種子內(nèi)脂肪酸９０％為不飽和脂肪酸，芥酸含量為４８％，二十四碳酸烯逡逑酸含量為２４％左右，種子含油量為３０－４０％，逡逑

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2732498