【摘要】：本研究旨在鑒定小金蝠蛾Thitarodes xiaojinensis血細(xì)胞類型,統(tǒng)計(jì)各類血細(xì)胞百分含量并檢測(cè)其細(xì)胞免疫能力。探究冬蟲(chóng)夏草菌Ophiocordyceps sinensis是如何耐受小金蝠蛾細(xì)胞免疫的。利用光學(xué)相差顯微鏡觀察小金蝠蛾7齡幼蟲(chóng)血細(xì)胞,并根據(jù)鱗翅目昆蟲(chóng)血細(xì)胞特有形態(tài)對(duì)小金蝠蛾血細(xì)胞進(jìn)行鑒定,利用96孔板對(duì)小金蝠蛾各類血細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)并計(jì)算各類血細(xì)胞的百分含量。利用釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae以及Congo Red染色的DEAE-Sephadex A-25凝膠珠刺激小金蝠蛾,檢驗(yàn)其細(xì)胞免疫反應(yīng)。利用掃描電子顯微鏡分別對(duì)感染7 d冬蟲(chóng)夏草菌的小金蝠蛾血細(xì)胞(HTO)以及健康的小金蝠蛾血細(xì)胞(HT)進(jìn)行觀察。對(duì)上述兩種處理的小金蝠蛾血細(xì)胞進(jìn)行GFP標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽熒光染色,并利用激光共聚焦免疫熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。進(jìn)一步利用Q-PCR對(duì)F-actins合成相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行檢測(cè)。小金蝠蛾7齡幼蟲(chóng)血細(xì)胞由粒細(xì)胞、漿細(xì)胞、珠血細(xì)胞和類絳色細(xì)胞組成,百分含量分別為62.5%,26.6%,10.1%和0.8%,未發(fā)現(xiàn)典型的原血細(xì)胞。釀酒酵母刺激結(jié)果顯示,小金蝠蛾血細(xì)胞可以發(fā)生吞噬以及結(jié)節(jié)反應(yīng)。Congo Red染色的DEAE-Sephadex A-25凝膠珠刺激結(jié)果顯示,小金蝠蛾血細(xì)胞可以發(fā)生包囊反應(yīng)。通過(guò)掃描電子顯微鏡的觀察可以發(fā)現(xiàn),健康小金蝠蛾血細(xì)胞表面具有密集的絲狀偽足,而感染冬蟲(chóng)夏草菌7 d的小金蝠蛾血細(xì)胞,其細(xì)胞表面絲狀偽足顯著減少。感染冬蟲(chóng)夏草菌7 d的小金蝠蛾血細(xì)胞中微絲束不明顯,綠色熒光信號(hào)成彌散狀,與健康小金蝠蛾血細(xì)胞中較為清晰的微絲束有明顯差異。Q-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,感染冬蟲(chóng)夏草菌7 d的小金蝠蛾血細(xì)胞DRF的表達(dá)量顯著降低;Thymosin的表達(dá)量顯著升高;Profilin的表達(dá)量顯著升高。小金蝠蛾血細(xì)胞組成及其形態(tài)與其他鱗翅目昆蟲(chóng)一致,其中粒細(xì)胞的百分含量最高。小金蝠蛾血細(xì)胞對(duì)釀酒酵母刺激敏感,可發(fā)生吞噬和結(jié)節(jié)反應(yīng),對(duì)Congo Red染色的DEAE-Sephadex A-25凝膠珠刺激敏感,可發(fā)生包囊反應(yīng)。小金蝠蛾細(xì)胞免疫功能完善。冬蟲(chóng)夏草菌可以通過(guò)對(duì)小金蝠蛾幼蟲(chóng)血細(xì)胞絲狀偽足的形成產(chǎn)生不利影響,進(jìn)而降低小金蝠蛾幼蟲(chóng)細(xì)胞免疫能力。
【學(xué)位授予單位】：河北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S567.35
【圖文】：

鱗翅目昆蟲(chóng)血細(xì)胞類型[1]

10圖 1 小金蝠蛾幼蟲(chóng)血細(xì)胞形態(tài)Fig. 1 Morphology of hemocytes of Thitarodes xiaojinensis larvae：小金蝠蛾血細(xì)胞孔板孵育初期，可見(jiàn)粒細(xì)胞(GR)、漿細(xì)胞(PL)、類絳色細(xì)細(xì)胞(Sph)。不同種類血細(xì)胞已用黑色箭頭標(biāo)出，標(biāo)尺= 40 μm。Initial incof hemocytes of T. xiaojinensis in well plates, granulocytes(GR), plasmatocytytoids(OE), and spherule cells(Sph) can be observed. Different types of hemocd out by black arrows, Scale bar = 40 μm. B：粒細(xì)胞 Granulocytes；C：atocytes; D：類絳色細(xì)胞 Oenocytoids; E:珠血細(xì)胞 Spherule cells. 標(biāo)ale bar = 20 μm. 小金蝠蛾各類血細(xì)胞百分含量統(tǒng)計(jì)結(jié)果金蝠蛾 7 齡幼蟲(chóng)各類血細(xì)胞在總血細(xì)胞中占比分別為粒細(xì)胞 62.5% ±5. 26.6% ±3.39%，珠血細(xì)胞為 10.1% ±2.56%，類絳色細(xì)胞為 0.8% ±0.7

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 張德利;涂永勤;;小金蝠蛾的生態(tài)型研究[J];環(huán)境昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2015年05期

2 張姝;張永杰;SHRESTHA Bhushan;徐建平;王成樹(shù);劉杏忠;;冬蟲(chóng)夏草菌和蛹蟲(chóng)草菌的研究現(xiàn)狀、問(wèn)題及展望[J];菌物學(xué)報(bào);2013年04期

3 涂永勤;張德利;曾緯;陳仕江;;四川小金蝠蛾生物學(xué)特性研究[J];應(yīng)用昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2011年04期

4 劉飛;伍曉麗;尹定華;陳仕江;曾緯;;冬蟲(chóng)夏草寄主昆蟲(chóng)的生物學(xué)研究概況[J];重慶中草藥研究;2005年01期

本文編號(hào)：2731932