【摘要】：目的:基于23種紅樹植物的藥用記載,分別對(duì)所采集紅樹類藥用植物及其相近緣植物進(jìn)行了葉形態(tài)解剖、分子水平DNA條形碼鑒別研究,為紅樹植物的資源開發(fā)與進(jìn)一步的藥用研究提供科學(xué)依據(jù)。方法:調(diào)查并采集了不同種的藥用紅樹植物,采用生藥學(xué)的方法,分別在光學(xué)顯微鏡與掃描電鏡下對(duì)紅樹植物葉組織特征進(jìn)行觀察比較;根據(jù)分子系統(tǒng)發(fā)育學(xué)理論,利用DNA條形碼鑒別技術(shù),提取植物基因組DNA、選取核基因ITS2和葉綠體psbA-trnH片段,PCR擴(kuò)增和雙向測(cè)序,利用軟件MEGA6.0計(jì)算種間和種內(nèi)遺傳距離,構(gòu)建鄰接法(NJ)系統(tǒng)發(fā)育樹,對(duì)所得各種植物的序列結(jié)果進(jìn)行比對(duì)分析。結(jié)果:從葉組織結(jié)構(gòu)橫切面特征分析,紅樹植物表皮上均被有角質(zhì)層,表皮細(xì)胞在層數(shù)、大小及細(xì)胞內(nèi)所含物質(zhì)等方面存在較大差異,葉肉發(fā)達(dá),主脈維管束較為發(fā)達(dá)。葉表皮形態(tài)特征差異主要集中在表皮細(xì)胞的形態(tài),垂周壁的類型,氣孔器的類型等。葉掃描電鏡下的區(qū)別主要是角質(zhì)層、蠟質(zhì)、以及氣孔器的形狀等方面。在分子水平上獲得的DNA條形碼的鑒定結(jié)果與宏觀植物學(xué)分類結(jié)果一致,表明了以ITS2序列為主,psbA-trnH序列作為輔助序列可做為紅樹植物物種間鑒別的有效方法。結(jié)論:本論文為紅樹植物物種間的顯微鑒別、分子鑒別研究提供了新資料,為紅樹類藥用植物進(jìn)一步的資源開發(fā)與更準(zhǔn)確的入藥提供了參考。
【圖文】：

3.3 測(cè)序與序列的拼接經(jīng)電泳檢測(cè)后的 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物，送樣測(cè)序。測(cè)序的原理參照參考文獻(xiàn) 90。主要測(cè)序技術(shù)是 Sanger 等的雙脫氧末端終止法（酶法）。本研究使用 ABI3730XL測(cè)序儀雙向測(cè)序獲得序列文件。3.4 數(shù)據(jù)處理測(cè)序獲得的峰圖使用 CodonCode Aligner V 2.06（CodonCode Co.,USA）儀器校對(duì)拼接，去除質(zhì)量較低以及引物區(qū)序列。ITS2 序列使用基于隱馬爾科夫模型的 HMMer 注釋方法去除兩端的 5.8S 和 28S 區(qū)段以獲得 ITS2 間隔區(qū)序列，圖 2-1 紅樹 ITS2PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物電泳 圖 2-2 紅樹 psbA-trnHPCR 擴(kuò)增產(chǎn)物電1.白骨壤 2.桐花樹 3.紅欖李 4.欖李 5.杯萼海桑 1.秋茄 2.白骨壤 3.桐花樹 4.杯萼海桑 5.海6.海桑 7.海南海桑 8.卵葉海桑 9.紅樹 10.紅茄傮 6.海南海桑 7.卵葉海桑 8.無(wú)瓣海桑 9.擬海11.紅海欖 12.木欖 13 海蓮 14.尖瓣海蓮 15.角果木16.秋茄 17.無(wú)瓣海桑 18.擬海桑

3.3 測(cè)序與序列的拼接經(jīng)電泳檢測(cè)后的 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物，送樣測(cè)序。測(cè)序的原理參照參考文獻(xiàn) 90。主要測(cè)序技術(shù)是 Sanger 等的雙脫氧末端終止法（酶法）。本研究使用 ABI3730XL測(cè)序儀雙向測(cè)序獲得序列文件。3.4 數(shù)據(jù)處理測(cè)序獲得的峰圖使用 CodonCode Aligner V 2.06（CodonCode Co.,USA）儀器校對(duì)拼接，去除質(zhì)量較低以及引物區(qū)序列。ITS2 序列使用基于隱馬爾科夫模型的 HMMer 注釋方法去除兩端的 5.8S 和 28S 區(qū)段以獲得 ITS2 間隔區(qū)序列，圖 2-1 紅樹 ITS2PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物電泳 圖 2-2 紅樹 psbA-trnHPCR 擴(kuò)增產(chǎn)物電1.白骨壤 2.桐花樹 3.紅欖李 4.欖李 5.杯萼海桑 1.秋茄 2.白骨壤 3.桐花樹 4.杯萼海桑 5.海6.海桑 7.海南海桑 8.卵葉海桑 9.紅樹 10.紅茄傮 6.海南海桑 7.卵葉海桑 8.無(wú)瓣海桑 9.擬海11.紅海欖 12.木欖 13 海蓮 14.尖瓣海蓮 15.角果木16.秋茄 17.無(wú)瓣海桑 18.擬海桑
【學(xué)位授予單位】：山東中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S567.19

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2706964