【摘要】：MAPK是真核生物中普遍存在的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,主要行使細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的功能,植物中的MAPKKK是MAPK級(jí)聯(lián)途徑的最上游。本研究利用前期表達(dá)差異分析所獲得的抗旱基因ZmMKKK18,通過(guò)轉(zhuǎn)染擬南芥進(jìn)行亞細(xì)胞定位、農(nóng)桿菌侵染轉(zhuǎn)化玉米幼胚獲得轉(zhuǎn)基因抗旱植株、分析轉(zhuǎn)基因抗旱植株的干旱指標(biāo)差異,解析ZmMKKK18基因在玉米中的生物學(xué)功能。本研究對(duì)于明確ZmMKKK18基因的抗旱生物學(xué)功能,創(chuàng)制具有重要應(yīng)用價(jià)值的抗旱玉米新種質(zhì),增強(qiáng)玉米對(duì)干旱等逆境的抵御能力,將具有非常重要的意義。主要研究結(jié)果如下:(1)運(yùn)用生物信息學(xué)技術(shù)對(duì)ZmMKKK18基因進(jìn)行了亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè),推斷目的基因有可能在植物細(xì)胞的葉綠體中表達(dá)。構(gòu)建了pE3449-ZmMKKK18的GFP表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染擬南芥原生質(zhì)體,通過(guò)共聚焦顯微鏡對(duì)原生質(zhì)體觀察,定位了ZmMKKK18基因在細(xì)胞中的表達(dá)部位。定位結(jié)果表明,目標(biāo)基因在植物細(xì)胞葉綠體中表達(dá);(2)構(gòu)建了VK011-ZmMKKK18過(guò)表達(dá)載體,通過(guò)農(nóng)桿菌侵染轉(zhuǎn)化玉米幼胚,獲得了轉(zhuǎn)基因過(guò)表達(dá)植株,創(chuàng)制了轉(zhuǎn)基因抗旱玉米新材料;(3)對(duì)獲得的轉(zhuǎn)基因T_2代植株進(jìn)行表達(dá)量分析,選擇其中表達(dá)量較高的兩個(gè)事件,以ZPM9植株作對(duì)照,進(jìn)行梯度干旱脅迫處理,鑒定抗旱相關(guān)指標(biāo)。發(fā)現(xiàn)在干旱脅迫條件下,ZmMKKK18基因能維持光合作用、減小蒸騰作用、有效提高植株的水分利用效率,從而提高了植株耐旱性。
【圖文】：

27圖3.1 ZmMKKK18目的基因PCR擴(kuò)增結(jié)果Figure3.1 The PCR amplification result of ZmMKKK18 geM為1 Kb Ladder DNA Marker；1-4為ZmMKKK18目的基因擴(kuò): M: 1 Kb Ladder DNA Marker; 1-4: the amplification product of

圖3.2 pE3449質(zhì)粒（載體）雙酶切結(jié)果igure3.2 The result of double enzyme digestion of plasmid (vector) pE31 Kb Ladder Ladder DNA Marker；1-2為pE3449質(zhì)粒酶切產(chǎn)物1 Kb Ladder Ladder DNA Marker; 1-2: the digestion product of plasmidLadder DNA Marker作參照，酶切產(chǎn)物約為4 Kb，與已知的物進(jìn)行切膠回收，，備用。49-ZmMKKK18 載體構(gòu)建物ZmMKKK18和pE3449使用SoSoo重組克隆試劑盒進(jìn)行連KKK18載體。載體圖示見(jiàn)圖3.3。
【學(xué)位授予單位】：山西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：S513

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1 趙冰兵;玉米ZmMKKK18基因的抗旱生物學(xué)功能鑒定[D];山西大學(xué);2019年

本文編號(hào)：2666914