【摘要】：微生物降解是環(huán)境介質中獸用抗生素消除的重要途徑。本文選擇兩株具有高效降解強力霉素能力的微生物,研究其對蛋雞糞+鋸末堆肥中強力霉素的降解效果,并采用實時熒光定量PCR技術研究此過程中四環(huán)素類耐藥基因的擴散情況,初步分析獸用抗生素降解菌環(huán)境應用時耐藥性傳播風險。本文可為蛋雞糞堆肥中強力霉素的去除提供參考,也可為獸用抗生素環(huán)境污染的修復提供理論依據(jù)。以蛋雞糞為原料、鋸末為調理劑,采用自行設計的小型模擬堆肥裝置進行堆肥試驗,堆體C/N和含水率分別調至15:1和65%。堆肥試驗分4組,包括空白對照組、強力霉素組、假絲酵母組和蒼白桿菌組�？瞻讓φ战M不添加強力霉素及強力霉素降解菌,強力霉素組添加85 mg/kg(DW)的強力霉素,其余2個處理組除添加85 mg/kg的強力霉素外,還分別添加0.5%(DW)的假絲酵母、蒼白桿菌,所有試驗組均設3個重復。堆肥試驗周期25 d,定期采樣測定強力霉素及其主要代謝產物6-差向強力霉素濃度、四環(huán)素類耐藥基因含量以及堆肥理化和微生物指標。本文所得主要結果如下:1、在蛋雞糞堆肥中分別接種強力霉素降解菌假絲酵母和蒼白桿菌,均可以在堆肥前期顯著促進強力霉素的降解。堆肥第7 d時,假絲酵母組和蒼白桿菌組堆體中強力霉素已分別降解至初始濃度的68±0.02%和69±0.00%,均顯著低于未添加降解菌的強力霉素組(P0.05),兩種降解菌組間無顯著差異(P0.05)。堆肥后期,兩種強力霉素降解菌對強力霉素的去除作用減弱,堆肥結束時各試驗組間強力霉素降解率沒有顯著差異(P0.05)。2、經(jīng)過25 d堆肥,各試驗組四環(huán)素類耐藥基因的含量均有所降低,其中tet M完全被去除。添加假絲酵母、蒼白桿菌均未顯著影響四環(huán)素類耐藥基因tetA、tetM、tetW和tetX的含量(P0.05);但堆肥結束時,空白對照組和強力霉素組均未檢測到耐藥基因tetG,而假絲酵母組和和蒼白桿菌組耐藥基因tetG拷貝數(shù)的對數(shù)值仍維持在4.19~3.91之間。3、添加強力霉素及其降解菌未顯著影響堆肥中細菌、真菌、放線菌總數(shù)(P0.05),不過添加強力霉素降解菌可顯著提高相應試驗組中降解菌的數(shù)量(P0.05)。添加強力霉素及其降解菌均可影響堆肥微生物結構,強力霉素可降低Tepidimicrobium(八疊球菌屬)和Penicillium(青霉菌屬)的豐度,添加蒼白桿菌可影響Tepidimicrobium和Virgibacillus(枝芽孢菌屬)的豐度,添加假絲酵母可影響Penicillium和Aspergillus(曲霉屬)的豐度。4、添加強力霉素及強力霉素降解菌未對堆溫、pH、EC、含水率、總氮、C/N、水溶性碳、腐殖質等理化指標造成顯著影響(P0.05),但能促進有機質的分解、提高堆肥發(fā)芽指數(shù)GI、使銨態(tài)氮向硝態(tài)氮轉化。綜上所述,本試驗條件下添加假絲酵母、蒼白桿菌能顯著促進蛋雞糞堆肥前期強力霉素的去除,且除tetG外未顯著影響堆體中四環(huán)素類耐藥基因含量,同時未顯著影響蛋雞糞堆肥進程。但在將假絲酵母、蒼白桿菌作為強力霉素降解菌應用于蛋雞糞堆肥前,仍需提高其對堆肥降溫期強力霉素的降解效果。
【圖文】：

樣品色譜圖

（i） （j）圖 2 微生物和四環(huán)素類耐藥基因的擴增曲線注：a、b、c、d、e、f、g、h、i、j 分別為細菌、真菌、放線菌、假絲酵母、蒼白桿菌、tetA、tetG、tetM、tetW、tetX 的擴增曲線圖。
【學位授予單位】：華南農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：X713;S141.4
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本文編號：2677048