橡膠樹(shù)白粉病在我國(guó)各主要植膠區(qū)均有發(fā)生,對(duì)橡膠樹(shù)的生長(zhǎng)和天然橡膠產(chǎn)量造成嚴(yán)重?fù)p失。Oidium heveae B.A.Steinmn是引起橡膠樹(shù)白粉病的一類(lèi)專(zhuān)性寄生菌。目前,對(duì)橡膠樹(shù)白粉菌的檢測(cè)鑒定主要是依據(jù)其癥狀、形態(tài)、生理生化反應(yīng),分子檢測(cè)技術(shù)報(bào)道甚少。本研究建立了關(guān)于橡膠樹(shù)白粉菌PCR、nested-PCR、LAMP分子檢測(cè)技術(shù),并對(duì)其檢測(cè)效果做了初步評(píng)價(jià),目的在于能夠檢測(cè)葉片組織中處于潛育期的橡膠樹(shù)白粉病菌,為該病害的早期診斷、防治方案的制定以及預(yù)測(cè)預(yù)報(bào)模型的搭建提供科學(xué)依據(jù)。具體結(jié)果如下:在ITS序列上設(shè)計(jì)了數(shù)對(duì)橡膠樹(shù)白粉菌引物,經(jīng)篩選驗(yàn)證特異性均不強(qiáng)。在橡膠樹(shù)白粉病菌全基因組測(cè)序的基礎(chǔ)上,經(jīng)比對(duì)分析找到一條橡膠樹(shù)白粉菌特異性保守序列(專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?201510577343.9),根據(jù)該條特異序列,設(shè)計(jì)特異性引物,對(duì)不同檢測(cè)方法的反應(yīng)體系均做了優(yōu)化試驗(yàn)。PCR的最適退火溫度為57℃;nested-PCR的最適退火溫度也為57℃;LAMP的最適退火溫度為63℃,最適反應(yīng)時(shí)間為50min。并且嘗試使用PCR來(lái)篩選LAMP的最適引物,也將引物的純化方式從HPLC降低到PAGE,引物純度...

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１４凝膠電泳檢測(cè)不同溫度對(duì)ＬＡＭＰ反應(yīng)體系的影響??

同的溫度梯度，分別放置于不同溫度的水浴鍋中進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，采??用兩種檢測(cè)方法檢測(cè)。??凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果表明（圖１４）：當(dāng)溫度設(shè)置為６ＰＣ時(shí)有非常微弱的梯狀??條帶出現(xiàn)，隨著溫度逐漸升高，條帶的的亮度也越來(lái)越亮，當(dāng)溫度達(dá)到６３°Ｃ時(shí)，??出現(xiàn)的條帶最亮，隨后再升高溫度....

圖１７?ＳＹＢＲ?Ｇｒｅｅｎ?Ｉ檢測(cè)不同時(shí)間對(duì)ＬＡＭＰ反應(yīng)體系的影響??

??紫外熒光檢測(cè)，結(jié)果表明（圖１７）?：３？７號(hào)ＰＣＲ管的綠色熒光亮度逐漸増強(qiáng)，??６號(hào)管與７號(hào)管亮度相同均達(dá)到最強(qiáng)，說(shuō)明反應(yīng)時(shí)間為５０?ｍｉｎ、６０?ｍｉｎ時(shí)，反應(yīng)??體系均達(dá)到最佳反應(yīng)狀態(tài)

圖２７橡膠樹(shù)葉片在白粉菌不同接種量下使用常規(guī)ＰＣＲ、ｎｅｄｔｅｄ?ＰＣＲ及ＬＡＭＰ在接種后不??同天數(shù)時(shí)測(cè)得的平均檢出率的比較??Ｆｉｇ．２７?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ?ｉｎ?ａｖｅｒａｇｅ?ｄｅｔ?

圖２７橡膠樹(shù)葉片在白粉菌不同接種量下使用常規(guī)ＰＣＲ、ｎｅｄｔｅｄ?ＰＣＲ及ＬＡＭＰ在接種后不??同天數(shù)時(shí)測(cè)得的平均檢出率的比較??

圖２８不同接種量與病情指數(shù)之間的關(guān)系??

圖２８不同接種量與病情指數(shù)之間的關(guān)系??Ｆｉｇ．?２８?Ｔｈｅ?ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ａｍｏｕｎｔ?ｏｆ?ｉｎｏｃｕｌｕｍ?ａｎｄ?ｄｉｓｅａｓｅ?ｉｎｄｅｘ??３．?６便攜式孢子捕捉器玻片上ＤＮＡ的提取??

本文編號(hào)：4012883