NO是介導(dǎo)植物細(xì)胞次生代謝物合成的一種必需信號分子,蛋白質(zhì)巰基亞硝基化是NO介導(dǎo)的蛋白翻譯后修飾之一,也是NO發(fā)揮其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)作用的重要途徑。NO介導(dǎo)的蛋白巰基亞硝基化是否參與了白樺三萜的積累還未見報道。為此,本研究一方面以白樺懸浮細(xì)胞為材料,研究NO與H2S互作對白樺三萜積累的影響;另一方面,通過白樺GSNOR基因沉默轉(zhuǎn)基因植株的轉(zhuǎn)錄組分析進(jìn)一步揭示NO介導(dǎo)的蛋白質(zhì)巰基亞硝基化對白樺三萜代謝的影響。主要結(jié)果如下:1.內(nèi)源NO/H2S介導(dǎo)H2S/NO促進(jìn)三萜積累的研究將H2S供體NaHS及其抑制劑羥胺（NH2OH）、NO供體硝普鈉（SNP）及一氧化氮合酶抑制劑（L-NAME）分別添加到培養(yǎng)8d的白樺懸浮培養(yǎng)體系中處理2d,分析H2S含量,H2S合成關(guān)鍵酶活性,NO含量,NO合成關(guān)鍵酶活性及白樺酯醇含量的變化。研究發(fā)現(xiàn),外源H2S促進(jìn)內(nèi)源NO與白樺酯醇的積累,其中NO含量比對照增加了60.84%,白樺酯醇含量比對照增加了 71.03%;外源NO同樣促進(jìn)了內(nèi)源H2S與白樺酯醇的積累,H2S含量比對照增加了 28.23%,白樺酯醇含量比對照增加了 234.41%;SNP與NH2OH處理相比于S... 

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 白樺三萜的研究進(jìn)展
    1.2 硫化氫(H2S)的研究進(jìn)展
    1.3 NO與蛋白質(zhì)翻譯后修飾的研究進(jìn)展
        1.3.1 NO的研究進(jìn)展
        1.3.2 NO參與蛋白質(zhì)亞硝基化的研究進(jìn)展
    1.4 亞硝基化谷胱甘肽還原酶(GSNOR)在植物中的研究進(jìn)展
    1.5 轉(zhuǎn)錄組測序研究進(jìn)展
    1.6 本研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 材料的獲得與培養(yǎng)
        2.1.1 白樺組培苗及白樺懸浮細(xì)胞的獲得與培養(yǎng)
        2.1.2 GSNOR轉(zhuǎn)基因植株的來源
    2.2 外源物質(zhì)的添加
    2.3 H_2S含量的測定
    2.4 半胱氨酸脫巰基酶活性的測定
    2.5 NO含量的測定
    2.6 NOS酶活性的測定
    2.7 NR酶活性的測定
        2.7.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
        2.7.2 NR酶活性的測定
    2.8 白樺酯醇的提取與測定
        2.8.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
        2.8.2 測試樣品的制備
    2.9 轉(zhuǎn)錄組測序
        2.9.1 植物材料
        2.9.2 轉(zhuǎn)錄組測序流程
        2.9.3 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析流程
    2.10 實時熒光定量PCR檢測
        2.10.1 總RNA的提取
        2.10.2 實時熒光定量PCR檢測
3 結(jié)果與分析
    3.1 內(nèi)源NO/H_2S介導(dǎo)H_2S/NO促進(jìn)三萜積累的研究
        3.1.1 外源H_2S對白樺懸浮細(xì)胞干重與三萜累積的影響
        3.1.2 外源H_2S對白樺懸浮細(xì)胞中內(nèi)源H_2S與NO含量的影響
        3.1.3 內(nèi)源NO/H_2S介導(dǎo)H_2S/NO對白樺酯醇積累的影響
        3.1.4 討論
    3.2 白樺GSNOR轉(zhuǎn)基因植株差異表達(dá)基因分析
        3.2.1 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的質(zhì)量監(jiān)控
        3.2.2 白樺Unigene基本注釋
        3.2.3 差異表達(dá)基因概況
        3.2.4 討論
    3.3 GSNOR與Unigene相關(guān)性分析
        3.3.1 GSNOR與Unigene相關(guān)性分析
        3.3.2 GSNOR與三萜合成相關(guān)性分析
        3.3.3 差異表達(dá)基因的相關(guān)性分析
        3.3.4 白樺轉(zhuǎn)錄因子家族分析
        3.3.5 討論
    3.4 差異表達(dá)基因分析
        3.4.1 差異倍數(shù)大于10的Unigene分析
        3.4.2 谷胱甘肽代謝相關(guān)基因的差異表達(dá)
        3.4.3 硫代謝相關(guān)基因的差異表達(dá)
        3.4.4 氮代謝相關(guān)基因的差異表達(dá)
        3.4.5 差異表達(dá)基因的驗證
        3.4.6 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]氣體信號分子H2S和NO對冷脅迫下大白菜幼苗光合作用的影響[J]. 裴雁曦,賀烽,解夢潔,邵琦,金竹萍.  山西大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2017(03)
[2]硫化氫對1型糖尿病大鼠腎誘導(dǎo)型一氧化氮合酶的影響[J]. 楊銳,賈強,馬善峰,崔淑俊,劉小粉,王元元,高琴.  中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2017(04)
[3]SNP與K+、Ca2+互作促進(jìn)白樺懸浮細(xì)胞中白樺酯醇累積的初步研究[J]. 黃雅婷,詹亞光,馬明媚,范桂枝.  林業(yè)科學(xué)研究. 2016(06)
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碩士論文
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[2]H2S誘導(dǎo)白樺懸浮細(xì)胞中次生代謝物累積的激素生理機制的初步研究[D]. 周文洋.東北林業(yè)大學(xué) 2015
[3]番茄硫化氫合成酶基因OASTL/LCD的克隆及硫化氫介導(dǎo)一氧化氮誘導(dǎo)番茄幼苗側(cè)根發(fā)育研究[D]. 李艷軍.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[4]硫化氫誘導(dǎo)桑黃菌絲體中白樺酯醇合成機制的初步研究[D]. 孫美玲.東北林業(yè)大學(xué) 2014
[5]番茄S-亞硝基谷胱甘肽還原酶基因（SlGSNOR）沉默對番茄高溫抗性的影響[D]. 張揚.浙江大學(xué) 2013
[6]硫化氫提高紫花苜蓿種子萌發(fā)過程中的耐鹽性及其與一氧化氮的關(guān)系[D]. 王燕琴.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011



本文編號：3729833