本研究利用熒光原位雜交技術(shù)和原位PCR技術(shù)對Lespinasse等構(gòu)建的巴西橡膠樹分子遺傳圖譜中2個連鎖群上的15個標記位點進行了物理定位,并將這些標記位點所在的連鎖群與橡膠樹核型圖進行對應整合,直接將分子遺傳學和染色體的細胞學特征聯(lián)系起來應用于巴西橡膠樹染色體的一些結(jié)構(gòu)功能特征與分子細胞遺傳學研究中。這不僅為構(gòu)建橡膠樹分子細胞遺傳圖譜奠定了基礎(chǔ),還為橡膠樹分子輔助育種、種質(zhì)資源鑒定、比較基因組學等研究提供了有力的科學依據(jù)。本研究所得的具體結(jié)果如下:（1）對Lespinasse等（2000）構(gòu)建的巴西橡膠樹遺傳圖譜的5號和10號兩個連鎖群上選取的14個RFLP標記位點和1個SSR標記位點設(shè)計了特異引物。其中第5號連鎖群有8個遺傳標記位點,分別為gHbCIR 637、gHbCIR240、gHbCIR486、gHbCIR208、gHbCIR495、gHbCIR657、gHbCIR461 和 gHbCIR566,第 10 號連鎖群有 7 個標記位點,分別為 gHbCIR113、gHbCIR347、gHbCIR168、M338、gHbCIR 570、gHbCIR36和gHbCIR82。共設(shè)計合... 

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1. 前言
    1.1 橡膠樹種質(zhì)資源概述
    1.2 巴西橡膠樹分子遺傳圖譜的研究進展
        1.2.1 遺傳圖譜概述
        1.2.2 分子遺傳圖譜的構(gòu)建
        1.2.3 橡膠樹分子遺傳圖譜的研究現(xiàn)狀
    1.3 細胞遺傳圖譜的研究進展
        1.3.1 細胞遺傳圖譜概述
        1.3.2 細胞遺傳圖譜的構(gòu)建
        1.3.3 細胞遺傳圖譜在植物中的研究進展
    1.4 巴西橡膠樹細胞遺傳圖譜的研究進展
    1.5 原位雜交在植物上的研究進展
        1.5.1 原位雜交的概念及原理
        1.5.2 原位雜交應用
    1.6 原位PCR在植物上的研究進展
        1.6.1 原位PCR概述
        1.6.2 原位PCR應用
    1.7 本研究的目的意義與及技術(shù)路線
        1.7.1 目的意義
        1.7.2 技術(shù)路線
2. 材料與方法
    2.1 材料與試劑
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 生化試劑
        2.1.3 主要器材
    2.2 實驗方法
        2.2.1 橡膠樹染色體標本的制備
        2.2.2 橡膠樹基因組DNA的提取及檢測
        2.2.3 特異性引物的合成和篩選
        2.2.4 特異性引物的PCR反應體系和擴增程序
        2.2.5 特異性條帶回收純化
        2.2.6 序列比對
        2.2.7 熒光原位雜交探針的制備
        2.2.8 原位PCR操作流程
        2.2.9 熒光原位雜交操作流程
        2.2.10 染色體上信號位點的位置計算
3. 結(jié)果與分析
    3.1 基因組DNA的提取
    3.2 遺傳標記特異DNA序列的PCR擴增與測序比對結(jié)果
    3.3 巴西橡膠樹5號連鎖群的8個遺傳標記的物理定位分析
        3.3.1 gHbCIR637遺傳標記的物理定位結(jié)果
        3.3.2 gHbCIR486遺傳標記的物理定位結(jié)果
        3.3.3 gHbCIR208遺傳標記的物理定位結(jié)果
        3.3.4 gHbCIR495遺傳標記的物理定位結(jié)果
        3.3.5 gHbCIR657遺傳標記的物理定位結(jié)果
        3.3.6 gHbCIR566遺傳標記的物理定位結(jié)果
        3.3.7 gHbCIR461遺傳標記的物理定位結(jié)果
        3.3.8 gHbCIR240遺傳標記的物理定位結(jié)果
    3.4 巴西橡膠樹10號連鎖群4個遺傳標記的物理定位分析
        3.4.1 gHbCIR113遺傳標記的物理定位結(jié)果
        3.4.2 gHbCIR347遺傳標記的物理定位結(jié)果
        3.4.3 gHbCIR570遺傳標記的物理定位結(jié)果
        3.4.4 M338遺傳標記的物理定位結(jié)果
    3.5 巴西橡膠樹部分遺傳標記的雙探針原位雜交結(jié)果與分析
        3.5.1 第5連鎖群的gHbCIR240和第10連鎖群的gHbCIR82遺傳標記的雙探針原位雜交結(jié)果
        3.5.2 第10連鎖群的gHbCIR347和gHbCIR168遺傳標記的雙探針原位雜交結(jié)果
        3.5.3 第10連鎖群的gHbCIR36和gHbCIR82遺傳標記的雙探針原位雜交結(jié)果
    3.6 巴西橡膠樹連鎖群的物理定位與其對應染色體的整合
4. 討論
    4.1 染色體標本制備過程中的優(yōu)化
    4.2 原位PCR和原位雜交中信號檢出率和信號點個數(shù)
    4.3 關(guān)于遺傳標記與已定位的基因之間的連鎖關(guān)系的討論
    4.4 關(guān)于含有已定位遺傳標記的基因組scaffold的染色體歸屬
5. 結(jié)論
參考文獻
附圖1
附圖2
附圖3
附圖4
附圖5
附圖6
附圖7
附圖8
附圖9
附圖10
附圖11
附圖12
附圖13
附圖14
附圖15
附錄1:試劑的配制
附錄2:縮略語
本研究資金來源
碩士期間發(fā)表論文
致謝



本文編號：3728052