培育楊樹(shù)耐鹽新品種對(duì)于加強(qiáng)我國(guó)鹽堿地的綜合開(kāi)發(fā)與利用,以及滿(mǎn)足我國(guó)對(duì)楊樹(shù)用材的需求具有重要意義。利用基因工程技術(shù)進(jìn)行育種,能夠克服傳統(tǒng)育種方法周期較長(zhǎng)、針對(duì)性不強(qiáng)的缺點(diǎn)。已有研究表明,異源轉(zhuǎn)化AhDREB1轉(zhuǎn)錄因子在一定程度上可提高楊樹(shù)的耐鹽能力,但外源基因是否會(huì)造成非預(yù)期效應(yīng)及轉(zhuǎn)基因植株是否具備田間的長(zhǎng)期穩(wěn)定性和安全性尚不確定,能否進(jìn)一步提高AhDREB1轉(zhuǎn)基因毛白楊的耐鹽能力也有待深入研究。為此,本研究以AhDREB1轉(zhuǎn)基因毛白楊組培苗、大田種植苗為材料,通過(guò)盆栽鹽脅迫試驗(yàn)分析轉(zhuǎn)基因植株和非轉(zhuǎn)基因植株在不同程度鹽脅迫下的生理生化指標(biāo),并篩選出在非鹽脅迫和鹽脅迫下的轉(zhuǎn)基因毛白楊和非轉(zhuǎn)基因?qū)φ盏牟町惐磉_(dá)基因,分析這些差異基因可能對(duì)受體植株的影響以及受外源基因調(diào)控的耐鹽基因的功能,研究AhDREB1的耐鹽機(jī)理;為了進(jìn)一步提高受體植株的耐鹽能力,以84K楊為受體植株,在AhDREB1轉(zhuǎn)錄因子的基礎(chǔ)上,克隆了檉柳TaMnSOD、TaLea、擬南芥AtNHX3個(gè)不同耐鹽途徑的功能基因,構(gòu)建多基因共表達(dá)載體,進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化;對(duì)比分析田間種植10年的AhDREB1轉(zhuǎn)基因毛白楊的外源基因存在情況、表達(dá)... 

【文章頁(yè)數(shù)】：154 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
本文縮略詞(Abbreviation)
引言
1. 國(guó)內(nèi)外耐鹽轉(zhuǎn)基因育種相關(guān)研究進(jìn)展
    1.1 植物的耐鹽機(jī)理研究
        1.1.1 植物的耐鹽機(jī)制
        1.1.2 不同耐鹽機(jī)制的相關(guān)基因
    1.2 楊樹(shù)耐鹽堿相關(guān)轉(zhuǎn)基因育種研究
        1.2.1 Na~+/H~+逆向蛋白運(yùn)轉(zhuǎn)基因
        1.2.2 活性氧清除的酶類(lèi)基因
        1.2.3 胚胎發(fā)育晚期豐富蛋白
        1.2.4 DREB轉(zhuǎn)錄因子
        1.2.5 多基因轉(zhuǎn)化育種
    1.3 外源基因的非預(yù)期效應(yīng)
        1.3.1 外源基因非預(yù)期效應(yīng)的類(lèi)型
        1.3.2 外源基因非預(yù)期效應(yīng)的評(píng)估內(nèi)容及檢測(cè)方法
    1.4 轉(zhuǎn)基因植株田間穩(wěn)定性及安全性
        1.4.1 轉(zhuǎn)基因林木田間外源基因表達(dá)穩(wěn)定性
        1.4.2 轉(zhuǎn)基因植株的安全性監(jiān)測(cè)
    1.5 研究?jī)?nèi)容、技術(shù)路線與擬解決的主要問(wèn)題
        1.5.1 研究?jī)?nèi)容
        1.5.2 技術(shù)路線圖
        1.5.3 擬解決問(wèn)題
2. AhDREB1轉(zhuǎn)基因毛白楊耐鹽機(jī)理及非預(yù)期效應(yīng)的分析
    2.1 材料和方法
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 盆栽鹽脅迫試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        2.1.3 基質(zhì)鹽分的測(cè)定
        2.1.4 植株增長(zhǎng)量的測(cè)定
        2.1.5 葉綠素含量和光合參數(shù)測(cè)定
        2.1.6 電解質(zhì)滲透率(RCE)和丙二醛(MDA)的測(cè)定
        2.1.7 脯氨酸、超氧物歧化酶、過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定
        2.1.8 AhDREB1轉(zhuǎn)基因毛白楊cDNA文庫(kù)建立和轉(zhuǎn)錄組測(cè)序
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 不同鹽脅迫處理下的轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因毛白楊生長(zhǎng)量
        2.2.2 不同鹽脅迫處理下的轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因毛白楊REC和MDA的含量
        2.2.3 不同鹽脅迫處理下的轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因毛白楊葉片的Pro含量,SOD活性,POD活性、葉綠素含量變化的測(cè)定結(jié)果
        2.2.4 不同鹽脅迫處理下的轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因光合參數(shù)測(cè)定
        2.2.5 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果
        2.2.6 差異基因的篩選及注釋
    2.3 小結(jié)
3 多耐鹽堿基因共轉(zhuǎn)化載體構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化銀腺楊84K
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌種與載體
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 溶液、培養(yǎng)基配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 檉柳TaMnSOD等耐鹽堿基因及擬南芥RD29A基因啟動(dòng)子克隆
        3.2.2 多基因共轉(zhuǎn)化載體構(gòu)建
        3.2.3 多基因共表達(dá)載體遺傳轉(zhuǎn)化銀腺楊84K
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 TaMnSOD,TaLEA,AtNHX基因及RD29A啟動(dòng)子片段的克隆
        3.3.2 克隆片段測(cè)序結(jié)果與公布序列結(jié)果對(duì)比
        3.3.3 多基因共轉(zhuǎn)化載體3452A-SDLN的PCR驗(yàn)證
        3.3.4 多基因共轉(zhuǎn)化載體3452A-SDLN的測(cè)序驗(yàn)證
        3.3.5 多耐鹽堿基因遺傳共轉(zhuǎn)化銀腺楊84K
    3.4 小結(jié)
4. AhDREB1轉(zhuǎn)基因植株多年田間穩(wěn)定性及安全性監(jiān)測(cè)試驗(yàn)
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試驗(yàn)材料與試驗(yàn)地信息
        4.1.2 轉(zhuǎn)基因毛白楊外源基因穩(wěn)定性的檢測(cè)
        4.1.3 轉(zhuǎn)基因毛白楊化感作用分析
        4.1.4 轉(zhuǎn)基因毛白楊林下土壤微生物多樣性檢測(cè)
        4.1.5 外源基因水平轉(zhuǎn)移監(jiān)測(cè)
        4.1.6 外源基因在葉片中的降解速度檢測(cè)
        4.1.7 轉(zhuǎn)基因毛白楊花粉可育性分析
        4.1.8 數(shù)據(jù)分析
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 田間多年種植后外源基因穩(wěn)定性檢測(cè)結(jié)果
        4.2.2 轉(zhuǎn)基因楊樹(shù)葉片化感作用檢測(cè)結(jié)果
        4.2.3 對(duì)轉(zhuǎn)基因楊樹(shù)外源基因水平轉(zhuǎn)移情況分析
        4.2.4 轉(zhuǎn)基因楊樹(shù)林下土壤微生物多樣性檢測(cè)
        4.2.5 轉(zhuǎn)基因楊樹(shù)葉片降解葉片中外源基因殘留情況監(jiān)測(cè)
        4.2.6 對(duì)成熟轉(zhuǎn)基因毛白楊花粉可育性分析
    4.3 小結(jié)
5 討論
    5.1 AhDREB1轉(zhuǎn)基因毛白楊的耐鹽機(jī)制及非預(yù)期效應(yīng)分析
    5.2 多耐鹽基因共轉(zhuǎn)化對(duì)受體植株耐鹽能力的改良的效果
    5.3 田間多年種植的轉(zhuǎn)基因毛白楊外源基因表達(dá)量下降
    5.4 田間多年種植的AhDREB1轉(zhuǎn)基因毛白楊沒(méi)有發(fā)現(xiàn)潛在危害
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄Ⅰ
附錄Ⅱ
個(gè)人簡(jiǎn)介
導(dǎo)師簡(jiǎn)介
獲得成果目錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
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