油菜素類固醇（BRs）是上世紀70年代在植物中發(fā)現(xiàn)的類固醇激素。研究發(fā)現(xiàn),BR參與調(diào)控植物生長發(fā)育的各個方面,包括細胞伸長及分裂、光形態(tài)建成、葉和根的發(fā)育、植物育性、果實成熟、種子休眠和萌發(fā)、維管組織分化、衰老及生物和非生物脅迫適應等。DWF4是BR合成的關(guān)鍵酶基因,該酶催化的反應是BR生物合成的限速步驟。為了探討B(tài)R調(diào)節(jié)植物非生物脅迫適應的分子機制,以及通過轉(zhuǎn)基因手段促進植物生長發(fā)育和提高植物抗逆境脅迫能力的可能性,本研究1)將胡楊DWF4基因（PeDWF4）轉(zhuǎn)入新疆楊基因組中,建立了PeDWF4-新疆楊轉(zhuǎn)基因系,分析了它們的表型變化;2)以PeDWF4-新疆楊轉(zhuǎn)基因系、新疆楊野生型（WT）和胡楊葉片為外植體誘導產(chǎn)生愈傷組織,比較了三者對外源激素的反應;3)分析了三種愈傷組織的耐鹽（NaCl）性及在鹽脅迫條件下BR生物合成酶基因DWF4、BR信號轉(zhuǎn)導基因BZR1、Na+/H+轉(zhuǎn)運蛋白基因NHX1和Ca2+結(jié)合蛋白基因CBL10的表達水平變化。主要結(jié)果如下:1)以新疆楊無菌苗葉片為受體,通過農(nóng)桿菌介導法將PeDWF4導入新疆楊基因組中,經(jīng)Hyg篩選及PCR鑒定,共獲得4個PeDWF4-... 

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【學位級別】：碩士

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第一章 前言
    1.1 油菜素類固醇（BRs）是植物激素
    1.2 BRs與植物生長發(fā)育調(diào)控
        1.2.1 BRs與細胞伸長和分裂
        1.2.2 BRs與植物光形態(tài)建成
        1.2.3 BRs與光合作用
        1.2.4 BRs與葉發(fā)育
        1.2.5 BRs與根發(fā)育
        1.2.6 BRs與植物育性
        1.2.7 BRs與植物維管組織發(fā)育
        1.2.8 BRs與種子發(fā)育、萌發(fā)和休眠
        1.2.9 BRs與果實成熟
        1.2.10 BRs與植物衰老
    1.3 BRs與植物抗逆性
        1.3.1 BRs與植物抗鹽和干旱脅迫
        1.3.2 BRs與植物抗低溫和高溫脅迫
        1.3.3 BRs與植物抗生物脅迫
        1.3.4 BRs與植物抗重金屬脅迫
        1.3.5 BRs與植物抗氧化脅迫
    1.4 BRs的合成與代謝
    1.5 BRs信號轉(zhuǎn)導
    1.6 DWF4
    1.7 研究的目的和意義
第二章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株
        2.1.3 培養(yǎng)基
        2.1.4 引物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 新疆楊再生
        2.2.2 再生植株生根優(yōu)化
        2.2.3 抗性芽潮霉素篩選濃度的確定
        2.2.4 農(nóng)桿菌活化
        2.2.5 農(nóng)桿菌介導的新疆楊轉(zhuǎn)化
        2.2.6 新疆楊總DNA提取
        2.2.7 新疆楊總RNA提取與cDNA合成
        2.2.8 抗性植株P(guān)CR鑒定
        2.2.9 再生植株移栽
        2.2.10 PeDWF4轉(zhuǎn)基因系表型統(tǒng)計
        2.2.11 愈傷組織的獲得
        2.2.12 愈傷組織NaCl處理
        2.2.13 愈傷組織總RNA提取及目的基因RT-PCR
        2.2.14 數(shù)據(jù)分析
第三章 實驗結(jié)果
    3.1 新疆楊再生體系的建立
    3.2 Hyg抗性芽篩選濃度的確定
    3.3 Hyg抗性植株的獲得
    3.4 Hyg抗性植株目的基因PCR檢測
    3.5 PeDWF4轉(zhuǎn)基因植株的移栽
    3.6 轉(zhuǎn)基因植株轉(zhuǎn)錄水平鑒定
    3.7 PeDWF4-新疆楊轉(zhuǎn)基因系表型分析
    3.8 胡楊、新疆楊WT和轉(zhuǎn)基因系TL6愈傷組織培養(yǎng)
    3.9 NaCl處理對三種愈傷生長的影響
    3.10 NaCl處理下DWF4表達分析
    3.11 NaCl處理下其他相關(guān)基因的表達分析
第四章 討論
    4.1 PeDWF4-新疆楊轉(zhuǎn)基因系的獲得
    4.2 PeDWF4可促進新疆楊生長發(fā)育和愈傷組織生長分化
    4.3 PeDWF4可增強新疆楊愈傷組織耐鹽性
    4.4 DWF4參與調(diào)控胡楊和新疆楊抗鹽脅迫的機制
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]TCP1 Modulates DWF4 Expression via Directly Interacting with the GGNCCC Motifs in the Promoter Region of DWF4 in Arabidopsis thaliana[J]. Yahu Gao,Dongzhi Zhang,Jia Li.  Journal of Genetics and Genomics. 2015(07)
[2]Regulation of Brassinosteroid Biosynthesis and Inactivation[J]. Baolin Zhao and Jia Li Key Laboratory of Cell Activities and Stress Adaptations,Ministry of Education,School of Life Sciences,Lanzhou University,Lanzhou 730000,China.  Journal of Integrative Plant Biology. 2012(10)
[3]The brassinosteroid signal transduction pathway[J]. Zhi-Yong Wang~(1,2) Qiaomei Wang~3 Kang Chong~2 Fengru Wang~2 Lei Wang~2 Mingyi Bai~2 Chengguo Jia~3 ~1Department of Plant Biology,Carnegie Institution,Stanford,CA 94305,USA;~2Key Laboratory of Photosynthesis and Environmental Molecular Physiology,Institute of Botany,Chinese Academy of Sciences,Beijing 100093,China:~3Department of Horticulture,Zheijang University,Hangzhou 310029,China.  Cell Research. 2006(05)
[4]表油菜素內(nèi)酯對綠豆幼葉衰老的促進作用[J]. 何宇炯，徐如涓，趙毓橘.  植物生理學報. 1996(01)

碩士論文
[1]新疆楊轉(zhuǎn)抗蟲基因研究[D]. 王婕琛.南京林業(yè)大學 2003



本文編號：3659229