橡膠樹(shù)是天然橡膠的主要來(lái)源。巴西橡膠樹(shù)（Heveabrasiliensis）是目前國(guó)內(nèi)外產(chǎn)生膠乳的重要物種。對(duì)巴西橡膠樹(shù)進(jìn)行深入的分子細(xì)胞學(xué)研究在橡膠樹(shù)的育種上具有重要意義。近年來(lái),研究者們先后在2013、2016和2017年采用高通量測(cè)序技術(shù)完成了 RRIM600、熱研7-33-97、BPM24等巴西橡膠樹(shù)品種的全基因組測(cè)序,但拼接水平僅達(dá)到scaffold水平。其遺傳圖譜、連鎖群等信息并沒(méi)有與染色體進(jìn)行對(duì)應(yīng),功能基因在染色體組上位置和連鎖關(guān)系尚未完全確定。目前的研究結(jié)果直接應(yīng)用于橡膠樹(shù)育種的難度較大,本研究構(gòu)建了巴西橡膠樹(shù)單染色體文庫(kù),可在一定程度上解決此問(wèn)題。本課題組成員在國(guó)內(nèi)從2013年率先開(kāi)啟了巴西橡膠樹(shù)單染色體文庫(kù)的構(gòu)建工作,其他有關(guān)此方面的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。故本研究從其單染色體入手,運(yùn)用單染色體顯微分離、LA-PCR法擴(kuò)增單條染色體技術(shù),構(gòu)建了 4條巴西橡膠樹(shù)單染色體文庫(kù),旨在為橡膠樹(shù)的分子輔助育種提供理論基礎(chǔ)。研究結(jié)果如下:（1）本研究采用微細(xì)玻璃針?lè)ǔ晒Φ貜陌臀飨鹉z樹(shù)熱研7-33-97多個(gè)中期分裂相細(xì)胞中分離出31條單染色體。挑選出其中4條,用LA-PCR法對(duì)單染色體進(jìn)... 

【文章來(lái)源】：海南大學(xué)海南省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：94 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２不同預(yù)處理時(shí)間的染色體形態(tài)??Ａ：預(yù)處理１．５ｈ；?Ｂ：預(yù)處理２ｈ；?Ｃ：預(yù)處理２．５ｈ??

３．４．１基因組ＤＮＡ提取和酶切??采用改良后的ＣＴＡＢ法提取熱研７－３３－９７基因組ＤＮＡ。將提取的基因組ＤＮＡ取??４…點(diǎn)樣于１．０％的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測(cè)，結(jié)果如圖５Ａ。從圖５Ａ可以看出：橡??膠樹(shù)基因組ＤＮＡ電泳條帶清晰明亮、條帶單一、無(wú)明顯降解現(xiàn)象，基因組ＤＮＡ分??子量略高于２３１３０?６卩。用８３￡｜＜〇１３１１－０１］７３０核酸分析儀檢測(cè)濃度及純度，通過(guò)檢測(cè)結(jié)??果計(jì)算出ＤＮＡ濃度為３０６?ｎｇ／）ｎｌ，且純度較高。說(shuō)明提取的基因組ＤＮＡ質(zhì)量良好，??純度高，可以用于后續(xù)試驗(yàn)。??取適量巴西橡膠樹(shù)熱研７－３３－９７基因組ＤＮＡ經(jīng)ＱｕｉｃｋＣｕｔ？?￡ｃｏＭ酶切丨２?ｍｉｎ后，??點(diǎn)樣于Ｌ０％瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測(cè)，結(jié)果如圖５Ｂ，第１￣５泳道為酶切ＤＮＡ，第６??泳道為陰性對(duì)照。從圖５Ｂ中可見(jiàn)：第１￣５泳道條帶呈彌散性，大小介于０．８？６ｋｂ之??間

圖中２？９即表示探針稀釋的濃度梯度，２代表的濃度最高，為ｌＯｐｇ／ｕｌ，?９代表的??濃度最低，為０。??圖６中可見(jiàn)，Ｂ、Ｃ兩種探針均在６號(hào)點(diǎn)有明顯陽(yáng)性反應(yīng)，說(shuō)明這兩種探針效力??達(dá)到０．丨ｐｇ級(jí)，標(biāo)記成功可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；Ｄ探針僅在４號(hào)點(diǎn)之前有陽(yáng)性反應(yīng)，標(biāo)記??效力為ｌｐｇ級(jí)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]四個(gè)橡膠樹(shù)主要栽培品種的核型分析[J]. 馬夢(mèng)茹,王英,莊南生,高和瓊.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2017(01)
[2]葎草單染色體的顯微分離及DOP-PCR技術(shù)體系建立[J]. 秦瑞云,李雙雙,李書(shū)粉,袁金紅,高武軍,鄧傳良.  河南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2016(06)
[3]巴西橡膠樹(shù)HbNAM基因克隆和表達(dá)分析[J]. 康桂娟,黎瑜,曾日中.  南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2016(01)
[4]巴西橡膠樹(shù)單染色體顯微分離及其兩種體外擴(kuò)增方法比較[J]. 殷卉,王英,高和瓊,莊南生.  分子植物育種. 2015(11)
[5]世界橡膠(樹(shù))發(fā)展傳播史初論[J]. 張箭.  中國(guó)農(nóng)史. 2015(03)
[6]經(jīng)濟(jì)樹(shù)種全基因組測(cè)序成果要報(bào)[J]. 冉洪,張瑩,胡陶,馮云,廉超,郭起榮.  經(jīng)濟(jì)林研究. 2015(02)
[7]巴西橡膠樹(shù)HbMKK4基因的克隆及表達(dá)分析[J]. 吳紹華,張世鑫,楊署光,田維敏.  西北植物學(xué)報(bào). 2015(03)
[8]單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 董燕,宋程程,黃鶴.  化學(xué)工業(yè)與工程. 2015(01)
[9]巴西橡膠樹(shù)膠乳轉(zhuǎn)化酶HbNIN基因家族物理定位的研究[J]. 高佳佳,王英,高和瓊,朱穩(wěn),莊南生.  熱帶作物學(xué)報(bào). 2014(09)
[10]一個(gè)巴西橡膠樹(shù)過(guò)氧化物酶基因克隆與生物信息學(xué)分析[J]. 鄧玉杰,余海洋,張宇,王萌.  熱帶農(nóng)業(yè)工程. 2014(04)

博士論文
[1]海南橡膠樹(shù)種質(zhì)資源經(jīng)濟(jì)價(jià)值研究[D]. 王芳.海南大學(xué) 2012
[2]棉花單染色體分離和DNA纖維FISH及其應(yīng)用研究[D]. 彭仁海.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2009
[3]利用熒光原位雜交技術(shù)（FISH）對(duì)中國(guó)明對(duì)蝦和櫛孔扇貝若干重要基因定位的研究[D]. 郇聘.中國(guó)科學(xué)院研究生院（海洋研究所） 2009
[4]橡膠樹(shù)分子遺傳圖譜的構(gòu)建及相關(guān)性狀的初步定位[D]. 和麗崗.華南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007

碩士論文
[1]巴西橡膠樹(shù)熱研7-33-97三條染色體文庫(kù)的構(gòu)建及第4號(hào)染色體高通量測(cè)序初步分析[D]. 殷卉.海南大學(xué) 2016
[2]巴西橡膠樹(shù)遺傳圖譜15個(gè)標(biāo)記的物理定位[D]. 彭寶豐.海南大學(xué) 2016
[3]巴西橡膠樹(shù)單染色體顯微分離及其8號(hào)染色體高通量測(cè)序的初步研究[D]. 姚宇飛.海南大學(xué) 2015
[4]巴西橡膠樹(shù)SUT和RZF基因家族物理定位的研究[D]. 官錦燕.海南大學(xué) 2014
[5]巴西橡膠樹(shù)熱研7-33-97第1，5和9號(hào)染色體的分離及文庫(kù)的構(gòu)建[D]. 陳學(xué)俊.海南大學(xué) 2014
[6]雷蒙德氏棉和黃褐棉部分單染色體的鑒定[D]. 覃琴.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2013
[7]銀杏單染色體文庫(kù)的建立與鑒定[D]. 肖青蘋(píng).福建農(nóng)林大學(xué) 2012
[8]琯溪蜜柚BAC文庫(kù)末端序列測(cè)序及Blast2GO分析[D]. 郭金鵬.福建農(nóng)林大學(xué) 2012
[9]亞洲棉7號(hào)染色體文庫(kù)構(gòu)建及RGA克隆[D]. 劉玉玲.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2010
[10]巴西橡膠樹(shù)REF、RT和SRPP基因物理定位的研究[D]. 邱海燕.海南大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3383204