青杄（Picea wilsonii Mast.）是我國特有的針葉樹種,被廣泛用于造林和園林綠化,青杄耐蔭喜濕,抗寒性較強,具備優(yōu)質(zhì)的抗寒基因資源。然而,其耐旱能力卻相對較弱,隨著全球氣候變暖和干旱脅迫的頻繁發(fā)生,青杄的生長范圍在進一步縮小,但是青杄在應對干旱脅迫時的潛在分子機制尚不清楚。NAC轉錄因子是植物特有的轉錄因子家族之一,被廣泛報道參與了植物的多種生命活動,尤其是在植物應對非生物脅迫的過程中發(fā)揮了重要的作用。通過分子生物學手段研究青杄NAC轉錄因子的功能及相關調(diào)控機制,對提高青杄的耐旱性具有重要意義。本實驗室前期通過轉錄組數(shù)據(jù)篩選克隆了兩個響應干旱的NAC轉錄因子PwNAC30和PwNAC31,并初步研究了這兩個轉錄因子在轉錄水平對非生物脅迫的響應。在本研究中,進一步分析了這兩個基因的特性,并通過將目的基因轉化擬南芥,研究了這兩個NAC轉錄因子的生物學功能,獲得的具體結果有:1、煙草亞細胞定位實驗顯示,PwNAC30和PwNAC31均定位于細胞核中。2、PwNAC30啟動子瞬時轉化煙草并進行GUS染色結果顯示,PwNAC30的啟動子對脫落酸（ABA）、赤霉素（GA）、茉莉酸甲酯... 

【文章來源】：北京林業(yè)大學北京市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

NAC結構模型(Ookaetal.,2003)

技術路線圖

青杄NAC轉錄因子PwNAC30/PwNAC31的功能研究與驗證263.結果與分析3.1.PwNAC30的啟動子活性與功能分析3.1.1.PwNAC30啟動子活性分析通過瞬時轉化煙草實驗，對PwNAC30的啟動子進行了活性分析。以注射空pBI121載體的煙草葉片為陽性對照，以注射煙草緩沖液的煙草葉片為陰性對照，實驗組用PwNAC30啟動子代替pBI121載體本身的CaMV35S啟動子來驅(qū)動GUS基因的表達。結果顯示，PwNAC30的啟動子能夠驅(qū)動GUS基因表達（圖3-1C），但相對于陽性對照組（圖3-1A），其驅(qū)動的GUS表達強度明顯較低，陰性對照組中則沒有GUS基因表達（圖3-1B）。為了檢測不同激素和非生物脅迫對PwNAC30啟動子活性的影響，將實驗組分別用清水、ABA（圖3-1D）、GA（圖3-1E）、MeJA（圖3-1F）、鹽（圖3-1G）、干旱（圖3-1H）和冷脅迫（圖3-1I）處理。結果如圖所示，相比于清水處理組，在激素和非生物脅迫處理下，GUS染色更深，表明PwNAC30的啟動子活性更強。為了進一步定量證明實驗結果，我們將PwNAC30啟動子構建到了pGreenII-0800-LUC載體上，以上述相同的處理方法處理后，用Promega化學發(fā)光儀測量Luc/Ren比率（圖3-1J），得到的結果與GUS染色結果一致。以上實驗結果表明，PwNAC30的啟動子對ABA、GA、MeJA、鹽、干旱和低溫處理有明顯的響應。圖3-1PwNAC30啟動子活性分析Fig.3-1ActivityanalysisofPwNAC30promoter注a：A為pBI121空載體（陽性對照）；B為煙草緩沖液（陰性對照）；C~I：PwNAC30啟動子驅(qū)動的pBI121載體，C為清水處理；D為ABA處理；E為GA處理；F為MeJA處理；G為鹽處理；H為干旱處理；I為冷處理。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3374670