白樺（Betula Platyphylla Suk）的樹皮中含有三帖類化合物白樺脂醇、白樺脂酸、齊墩果酸等,具有抗腫瘤、抗炎、抗HIV、抗瘧疾等藥物活性。純天然白樺次生代謝產(chǎn)物含量低,化學(xué)合成成本高,制約其在生產(chǎn)實(shí)踐中的應(yīng)用。細(xì)胞色素P450單加氧酶（cytochrome P450 monooxygenase,CYP450）是參與植物代謝的最大酶家族,催化三萜骨架形成具有各種功能的官能團(tuán),如羥基、羰基和羧基等,在三萜骨架結(jié)構(gòu)多樣化及功能化修飾中具有關(guān)鍵作用。本研究擬克隆響應(yīng)SA和MeJA信號(hào)的白樺BpCYP450基因,結(jié)合MeJA、SA、ABA等誘導(dǎo),明確BpCYP450基因與三萜合成關(guān)鍵基因的表達(dá)特征,探究5個(gè)BpCYP450基因在煙草和白樺中的表達(dá)特性及三萜合成中的功能。研究結(jié)果如下:1.以白樺cDNA為模板,應(yīng)用特異性引物結(jié)合RT-PCR技術(shù),克隆獲得5個(gè)白樺BpCYP450基因cDNA全長,分別命名為CYP94B89、CYP8S1、CYP97B2、CYP86B54和CYP86A182。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明,5個(gè)基因的開放讀碼框（open reading frame,ORF）長... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２?２，３氧化角鯊烯環(huán)化為三萜的合成路線??白樺三萜的生物合成主要通過ＭＶＡ途徑完成，ＭＶＡ途徑中的ＩＰＰ經(jīng)過催化形成??ＦＰＰ，兩分子ＦＰＰ在鳘燦合成酶（ｓｑｕａｌｅｎｅ?ｓｙｎｔｈａｓｅ，?ＳＳ）催化下生成一分子的角鳘烯

ＣＹＰ４５０也由此得名。??１．２．２．２細(xì)胞色素Ｐ４５０的功能及催化機(jī)制??ＣＹＰ４５０是末端加氧酶，從ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ獲得電子后，催化單加氧反應(yīng)（圖１－３）。??ＣＹＰ４５０催化的反應(yīng)包括兩步：電子由ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ傳遞至黃素蛋白及鐵硫蛋白（或ＮＡＤＰＨ－??ＣＹＰ４５０還原酶），然后再傳遞至ＣＹＰ４５０氧化酶，催化的總反應(yīng)為：??ＲＨ＋ＮＡＤＰＨ＋Ｈ＋＋０２—Ｒ０Ｈ＋ＮＡＤＰ＋＋Ｈ２０，反應(yīng)中ＲＨ是底物，Ｒ０Ｈ是氧化產(chǎn)物�？傮w??來說，ＣＹＰ４５０催化的反應(yīng)是激活一個(gè)氧分子，并將其中的一個(gè)氧分子插入到底物中，??同時(shí)還原另一個(gè)氧分子而形成水分子，所以又稱為單加氧酶。??ＡＢＣ??Ｎ－ＡＤＰＨ?＞?ＮＡＤＰＨ?，?、？哪Ｈ?光?，￡、??內(nèi)？ｒ?＾?類囊體控??圖１－３?ＣＹＰ４５０驅(qū)動(dòng)反應(yīng)的主要天然和工程電子來源??注：參考Ｒｅｎａｕｌｔ等人構(gòu)建的模型（２０１４）并略有修改［２８１。Ａ：?ＣＹＰ４５０反應(yīng)所需的兩個(gè)電子從Ｎ－??末端膜錨定的ＣＹＰ４５０—氧化還原酶（Ｐ０Ｒ）轉(zhuǎn)移；Ｂ：?Ｃ－末端膜錨定的細(xì)胞色素ｂ５（Ｃｙｔｂ５）來提供第二??個(gè)電子，Ｃｙｔｂ５本身被細(xì)胞色素ｂ５還原酶（ｂ５Ｒ）還原；Ｃ：使用光系統(tǒng)Ｉ（ＰＳＩ）衍生的電子通過體外和??體內(nèi)鐵氧還蛋白（Ｆｄ）至ＣＹＰ４５０還原酶。??－５?－??

以白樺組培苗ＲＮＡ反轉(zhuǎn)錄ｃＤＮＡ為模板，ＣＹＰ９４Ｂ８９－Ｆ／Ｒ為引物，通過ＲＴ－ＰＣＲ??獲得Ｃ７Ｐ抑５洲基因ｃＤＮＡ為１２８４ｂｐ，ＯＲＦ預(yù)測結(jié)果顯示其為完整的ＯＲＦ，編碼４２７??個(gè)氨基酸（圖２－２）。??１?ＡｒＧｃｒｃＡｊＵＡＣｃ＾ｉＴＡＣＡｃｎｃｃｃｃＡ＾ＸＭＣｉ＾＾?￥７８?ｉｒａｉｍｃｍｃｒａｒｃｔｃｋｋｒ＾ｋ＾ｋｋｏｋｏ＾??ａ?Ｌ?Ｋ?：?Ｉ?Ｉ?Ｋ?Ｆ?Ｆ?ｒ?Ｋ?￥?Ｋ?ｔ?Ｆ?Ｌ?Ｌ?Ｓ?Ｓ?Ｋ?Ｔ?Ｕ?ｌ?ｌ?Ｑ?ｌ?Ｖ?ｒ?ｌ?ｌ??妨?ＣＧＣＭＴＣＣ：ＴＣ＜級ＡＴＯＴＣＴＴＯＸＴ燈Ｃ＾ＡＴ魟ＴＣＭＴ＜＾Ｃ＊?Ｔ２ｉ?ＡＴＭＭＩＨ釘氣ＯＴ沉ＸＧＵＴＧＡＧＴＣＡＣＴＧＭＧ??ｒ?＾?Ｉ?Ｌ?＾?Ｊ?？?Ｌ?ｃ．?ｒ?０?Ｉ?Ｆ?ＩＩ?Ｖ?Ｉ?Ｅ?５?ｖ?Ｅ?＆?Ｅ?Ｅ?Ｌ?Ｈ?Ｔ?Ｅ?Ｓ?Ｌ?Ｅ??９１?ＧＡＣＧ：ｔＡＧＡＣＣ：ＡＴＯＸ＜＾ＡＯ：ＣＡ＞ＸＪ３Ｃ＾ＴＴ＾：ＣＡｔＣＣＡＣ＾１０?７ｇｇ?Ｃ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]3個(gè)白樺細(xì)胞色素P450基因生物信息學(xué)及表達(dá)分析[J]. 楊杰,孫璐,王思瑤,李影,翟睿,林香雨,詹亞光,尹靜.  南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2018(06)
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[5]植物萜類次生代謝及其調(diào)控[J]. 王凌健,方欣,楊長青,李建戌,陳曉亞.  中國科學(xué):生命科學(xué). 2013(12)
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博士論文
[1]基于基因家族序列分析研究基因的倍增、分化和多效性[D]. 曾燕舞.復(fù)旦大學(xué) 2010

碩士論文
[1]與大豆14-3-3蛋白相互作用的MYB轉(zhuǎn)錄因子的鑒定及在次生代謝中的功能分析[D]. 李瑞華.吉林大學(xué) 2018
[2]白樺BpbHLH7和BpbHLH8基因的克隆、表達(dá)特性及功能研究[D]. 王思瑤.東北林業(yè)大學(xué) 2018
[3]白樺OSC新基因的克隆、RNAi載體構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化初步研究[D]. 梁甜.東北林業(yè)大學(xué) 2015
[4]三七、西洋參中三萜皂苷合成關(guān)鍵酶基因的克隆及表達(dá)模式分析[D]. 牛云云.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2013



本文編號(hào)：2947697