【摘要】：水曲柳(Fraxinus mandshurica)屬木犀科白蠟樹屬,是我國東北地區(qū)重要的珍貴闊葉樹種。直接體細胞胚胎發(fā)生體系的建立為解決其無性繁殖提供了新途徑,但存在同步化效果差、畸形胚發(fā)生率高、優(yōu)良遺傳材料難長期保存的問題。本研究以水曲柳成熟和未成熟合子胚子葉為材料,建立水曲柳間接體細胞胚胎發(fā)生體系和優(yōu)良遺傳資源的超低溫保存技術(shù)體系,并分析超低溫保存前后保存材料的相對存活率和生理生化差異。主要結(jié)果如下:(1)水曲柳胚性愈傷組織誘導培養(yǎng)基為添加5.0 mg L-1 NAA和2.0 mg·L-1 6-BA的MS1/2培養(yǎng)基,成熟合子胚子葉的胚性愈傷組織誘導率為11.7%,未成熟合子胚子葉的胚性愈傷組織誘導率為9.7%。胚性愈傷組織繼代增殖培養(yǎng)基為添加0.1 mg·L-1 6-BA和0.15 mg L-1 2,4-D的WPM培養(yǎng)基,愈傷組織增殖系數(shù)為1.54。體胚發(fā)育培養(yǎng)基為添加1.0 mg.L-1 ABA的MS1/2培養(yǎng)基,體胚誘導率為55%。萌發(fā)生根培養(yǎng)基為添加0.01 mg·L-1NAA的1/3MS培養(yǎng)基,體胚生根率為37.5%,萌芽率26.39%,最終馴化移栽形成完整植株。(2)選取繼代增殖培養(yǎng)7～10 d生長旺盛的胚性愈傷組織,在0.4 mol L-1蔗糖溶液中室溫下預(yù)培養(yǎng)20 h,后添加7.5%的DMSO溶液在0℃C下脫水60 min,置于-80℃C超低溫冰箱中以-1℃C/nmin降溫速度冷凍4 h,迅速投入液氮中保存。保存24 h后的材料在40 ℃C水中化凍2 min,相對存活率為44.95%。(3)脫水時間和冷凍方式以及二者的交互作用對超低溫保存前后水曲柳合子胚的活力和生理生化指標具有顯著影響。隨著脫水時間的延長,未經(jīng)冷凍保存合子胚的脫氫酶活性逐漸減低,MDA含量、脯氨酸含量、可溶性蛋白含量和抗氧化酶活性逐漸上升;經(jīng)不同冷凍方式保存后合子胚的MDA含量逐漸降低,而脫氫酶活性、脯氨酸含量、可溶性蛋白含量和抗氧化酶活性逐漸升高。當脫水時間為120 min,利用快凍法保存后的合子胚活力最高,其生理生化指標與其他處理相比達到差異顯著水平。因此,水曲柳合子胚適宜的超低溫保存方法為干燥脫水120 min后的合子胚利用快凍法進行超低溫保存,保存后的相對存活率為62.26%。此方法也適用于水曲柳體細胞胚胎的超低溫保存,保存后的相對存活率為51.68%。
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３．２．１預(yù)培養(yǎng)液種類對細胞存活的影響逡逑不同預(yù)培養(yǎng)液處理對水曲柳胚性愈傷組織超低ｆｆｉ保存后的相對存活率Q囅災(zāi)跋戾義希ㄍ跡常保４ǎ裕裕梅ú舛ǔ臀鹵４婧笏咝雜俗櫓南嘍源婊盥�，，蔗虄S芤哄義洗硨笙嘍源婊盥首罡擼婊盥飾叮梗常玻ィ黃浯問歉事洞既芤�，存活嘛棯．４ＡPィ歡義嫌寐笱刻僑芤捍硨蟮南嘍源婊盥首畹停慊盥飾矗保罰矗�；蔗虄S芤河肼笱刻僑芤捍﹀義俠碇蟮南嘍源婊盥什鉅煜災(zāi)ǎ穡

本文編號：2628367