本文關鍵詞：可疑流行碳青霉烯耐藥腸桿菌科細菌耐藥機制探索

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【摘要】：目的1.通過分析我院2013-2014年度分離得到的41株碳青霉烯耐藥腸桿菌科細菌(CRE)對臨床常用抗菌藥物的耐藥情況,為今后臨床合理選擇使用抗菌藥物提供數(shù)據(jù)支持。2.采用分子分型方法對41株碳青霉烯耐藥腸桿菌科細菌(CRE)進行同源性檢測,以便掌握菌株的同源性情況,為了解其在醫(yī)院內(nèi)流行情況,控制其流行提供科學依據(jù)。及進一步確定其醫(yī)院及科室內(nèi)流行情況。3.通過對該41株碳青霉烯耐藥腸桿菌科細菌(CRE)中碳青霉烯酶、超廣譜β內(nèi)酰胺酶(ESBLs)、Amp C酶等耐藥基因檢測及型別確定,以及分析外膜孔道蛋白基因表達情況,探求其對碳青霉烯類抗菌藥物的耐藥機制,最終為臨床合理使用抗菌藥物提供依據(jù)。方法1.采用法國梅里埃公司Vitek-2全自動細菌鑒定系統(tǒng)及配套藥敏卡片,對細菌進行菌種鑒定并確定常用抗菌藥物的敏感性。2.采用K-B法再次測定細菌對碳青霉烯類藥物(美羅培南及亞胺培南)的抑菌圈直徑,從而確認為耐碳青霉烯類菌株。3.采用ERIC-PCR方法(Enterbacterial repetitive intergenic consensus腸桿菌科基因間重復一致保守序列PCR)對41株碳青霉烯耐藥腸桿菌科細菌(CRE)進行DNA擴增,并進一步電泳,根據(jù)電泳條帶分布分析細菌的同源性。4.采用聚合酶鏈反應(PCR)對41株碳青霉烯耐藥菌株進行碳青霉烯酶、ESBLs、Amp C酶等耐藥基因以及外膜孔道蛋白Ompk35及Ompk36基因篩查,并對外膜孔道蛋白Ompk35及Ompk36基因作DNA序列分析。5.采用熒光定量PCR(RT-PCR)方法對36株克雷伯屬菌株外膜孔道蛋白Ompk35及Ompk36基因進行定量分析。結果1.41株碳青霉烯耐藥腸桿菌科細菌(CRE)對β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥高達80%,對喹諾酮類、四環(huán)素類及氨基糖苷類抗菌藥物敏感率達85%,ERIC-PCR同源性分析顯示兒科及新生兒科存在肺炎克雷伯菌及產(chǎn)酸克雷伯菌克隆流行菌株,無向其他科室。2.碳青霉烯酶表型確證示:Hodge試驗陽性菌株10例,EDTA協(xié)同試驗均陰性,碳青霉烯酶基因確證均陰性。3.高水平β內(nèi)酰胺酶(ESBLs及Amp C酶)檢測,每株菌至少存在1種β內(nèi)酰胺酶表達。4.外膜孔道蛋白PCR結果顯示41株耐藥菌無外膜孔道蛋白基因缺失,97.22%外膜蛋白測序結果與野生菌株相比無改變,外膜孔道蛋白定量PCR分析顯示,91.67%碳青霉烯耐藥肺炎克雷伯菌及產(chǎn)酸克雷伯菌外膜蛋白表達量下降。結論我院分離的41株碳青霉烯耐藥腸桿菌科細菌對臨床常見抗菌藥物耐藥情況嚴峻,四環(huán)素類、氨基糖甙類及喹諾酮類抗菌藥敏感性較好,臨床可作為用藥參考;新生兒科及兒科存在克隆流行株,需注意病區(qū)清潔衛(wèi)生、消毒隔離,醫(yī)護人員要注意手衛(wèi)生。這些耐藥菌未分離出碳青霉烯酶耐藥基因,可能的耐藥機制為高水平β內(nèi)酰胺酶表達合并外膜孔道蛋白表達下降。
【關鍵詞】：碳青霉烯耐藥 腸桿菌科細菌 同源性分析 外膜蛋白 耐藥機制
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R446.5
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-13
• 研究現(xiàn)狀、成果11-12
• 研究目的、方法12-13
• 一、碳青霉烯耐藥腸桿菌科細菌耐藥分析及同源性檢測13-24
• 1.1 對象和方法13-17
• 1.1.1 菌株來源與鑒定13-14
• 1.1.2 主要實驗儀器與試劑耗材14
• 1.1.3 實驗方法14-17
• 1.2 結果17-21
• 1.2.1 藥物敏感試驗17-18
• 1.2.2 41株碳青霉烯耐藥腸桿菌科細菌ERIC - PCR結果18-19
• 1.2.3 41株CR腸桿菌科細菌不同型別在病區(qū)分布情況19-21
• 1.3 討論21-23
• 1.3.1 41株CRE病原菌、科室分布及標本來源情況21-22
• 1.3.2 41株CRE藥敏結果分析22
• 1.3.3 41株CRE同源性檢測結果分析22-23
• 1.4 小結23-24
• 二、碳青霉烯耐藥腸桿菌科細菌碳青霉烯酶及β內(nèi)酰胺酶檢測24-37
• 2.1 對象和方法24-28
• 2.1.1 菌株來源與試劑耗材24-25
• 2.1.2 實驗方法25-28
• 2.2 結果28-33
• 2.2.1 改良Hodge實驗28-29
• 2.2.2 EDTA協(xié)同實驗29
• 2.2.3 碳青霉烯酶耐藥基因檢測結果29-30
• 2.2.4 超廣譜β內(nèi)酰胺酶及AmpC酶耐藥基因檢測結果30-32
• 2.2.5 41株CRE菌株表型確證及耐藥基因存在情況32-33
• 2.3 討論33-35
• 2.3.1 碳青霉烯酶表型確證及基因篩查結果分析34-35
• 2.3.2 ESBLs與AmpC酶耐藥基因篩查35
• 2.4 小結35-37
• 三、碳青霉烯耐藥腸桿菌科細菌外膜孔道蛋白分析37-55
• 3.1 對象和方法37-43
• 3.1.1 菌株來源與鑒定37-38
• 3.1.2 主要儀器與試劑耗材38
• 3.1.3 實驗流程38-39
• 3.1.4 實驗方法39-43
• 3.2 結果43-52
• 3.2.1 外膜蛋白Ompk35及Ompk36基因PCR結果43-44
• 3.2.2 外膜蛋白Ompk35及Ompk36基因DNA序列比對結果44-48
• 3.2.3 外膜蛋白Ompk35及Ompk36基因熒定量PCR結果48-52
• 3.3 討論52-54
• 3.3.1 外膜蛋白OmpK35及OmpK36 PCR結果分析53
• 3.3.2 外膜蛋白OmpK35及OmpK36 PCR產(chǎn)物測序結果分析53
• 3.3.3 外膜蛋白OmpK35及OmpK36 RT-PCR結果分析53-54
• 3.4 小結54-55
• 結論55-56
• 參考文獻56-59
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明59-60
• 綜述 碳青霉烯耐藥腸桿菌科細菌耐藥機制研究60-68
• 綜述參考文獻65-68
• 致謝68-69
• 個人簡歷69

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 劉婧嫻;俞靜;劉瑛;;產(chǎn)碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐藥基因及流行病學研究進展[J];中國感染與化療雜志;2015年01期

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3 徐英春;肖永紅;卓超;鄭波;王輝;楊啟文;;中國碳青霉烯類耐藥腸桿菌科細菌的流行病學和防控策略[J];中國執(zhí)業(yè)藥師;2013年04期

4 王芳;高夢;孫杰;馮潔;倫永志;;應用ERIC-PCR技術分析多藥耐藥肺炎克雷伯菌的基因分型[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2013年06期

5 李靜;胡志東;;IMP-4型金屬β內(nèi)酰胺酶致肺炎克雷伯菌對碳青霉烯類抗生素耐藥[J];中華檢驗醫(yī)學雜志;2010年11期

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本文編號：975279