本文關(guān)鍵詞：聚合物納米粒子構(gòu)建的信號(hào)放大新方法及其在分子診斷中的應(yīng)用研究

  更多相關(guān)文章： 分子診斷 復(fù)合納米粒子 信號(hào)放大 葡萄糖氧化酶 氧化還原聚合

【摘要】：本論文針對分子檢測的靈敏性及可操作的關(guān)鍵問題,將復(fù)合納米粒子和葡萄糖(GOx)巧妙結(jié)合構(gòu)建信號(hào)放大新方法。利用復(fù)合納米粒子高表面積特性,使表面局部富集高濃度的引發(fā)劑,從而快速引發(fā)氧化還原聚合產(chǎn)生信號(hào)放大,實(shí)現(xiàn)裸眼可視化檢測生物分子及提高檢測靈敏性；GOx在葡萄糖分子存在下,消耗空氣中的氧,產(chǎn)生的過氧化氫與富含維生素C表面的復(fù)合納米粒子形成氧化還原引發(fā)體系引發(fā)單體原位聚合,達(dá)到可視化放大效果。復(fù)合納米粒子和GOx的連鎖放大實(shí)現(xiàn)了空氣中的操作和提高檢測靈敏性的多重目的,具體工作如下：1、復(fù)合納米粒子的構(gòu)建：通過可逆加成-斷裂鏈轉(zhuǎn)移聚合(RAFT)合成兩親性嵌段聚合物聚維生素C丙烯酸酯-嵌-聚苯乙烯(PAAA-b-PS)和維生素H封端的聚乙二醇-嵌-聚苯乙烯(biotin-PEG4ooo-b-PS),并采用動(dòng)態(tài)光散射(DLS)和透射電鏡(TEM)等對兩種聚合物的共自組裝行為進(jìn)行了研究,最終制備了以聚苯乙烯為疏水內(nèi)核,以聚維生素C丙烯酸酯和維生素H封端的聚乙二醇為親水外殼的復(fù)合納米粒子。利用納米粒子比表面積大的特點(diǎn),在親水外殼富集具有還原性的維生素C,可與雙氧水組成氧化還原對,復(fù)合納米粒子表面的維生素H作為分子識(shí)別的連接紐帶。2、構(gòu)建雙氧水-復(fù)合納米粒子(H2O2-NP)氧化還原聚合信號(hào)放大方法,并對模型DNA和人體p53基因片段進(jìn)行檢測,實(shí)現(xiàn)對模型DNA的檢測濃度達(dá)100fM(0.3amol)及p53基因的檢測濃度10pM(30amol),表面聚合產(chǎn)生信號(hào)放大的時(shí)間為30 min。3、將復(fù)合納米粒子與GOx相結(jié)合,利用近紅外優(yōu)化GOx和葡萄糖等聚合條件。在GOx為1.0 mg/mL,葡萄糖為250 mg/mL的條件下,對模型DNA的檢測靈敏度達(dá)10fM(0.15amol)及p53的檢測靈敏度5pM(15amol),表面聚合產(chǎn)生信號(hào)放大的時(shí)間為40 min。
【關(guān)鍵詞】：分子診斷 復(fù)合納米粒子 信號(hào)放大 葡萄糖氧化酶 氧化還原聚合
【學(xué)位授予單位】：北京化工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R440
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-15
• 第一章 緒論15-31
• 1.1 DNA診斷15-19
• 1.1.1 DNA突變與疾病15-16
• 1.1.2 DNA突變的檢測16-18
• 1.1.3 DNA探針18-19
• 1.2 信號(hào)放大在DNA檢測中的應(yīng)用19-30
• 1.2.1 Biotin-SA體系在DNA檢測中的應(yīng)用20
• 1.2.2 PCR在DNA檢測中的應(yīng)用20-21
• 1.2.3 電化學(xué)在DNA檢測中的應(yīng)用21-22
• 1.2.4 熒光在DNA檢測中的應(yīng)用22
• 1.2.5 納米粒子在DNA檢測中的應(yīng)用22-24
• 1.2.6 酶在分子檢測中的應(yīng)用24-26
• 1.2.7 聚合物輔助信號(hào)放大26-30
• 1.3 課題的研究意義及研究內(nèi)容30-31
• 1.3.1 課題研究的意義30
• 1.3.2 研究內(nèi)容30-31
• 第二章 復(fù)合納米粒子的制備及其性質(zhì)研究31-49
• 2.1 引言31
• 2.2 主要試劑及儀器31-32
• 2.2.1 試劑31-32
• 2.2.2 儀器32
• 2.3 實(shí)驗(yàn)部分32-39
• 2.3.1 聚合物聚維生素C丙烯酸酯-嵌-聚苯乙烯(PAAA-b-PS)的合成32-35
• 2.3.2 維生素H封端的聚乙二醇-嵌-聚苯乙烯(biotin-PEG_(4000)-b-PS)的合成35-38
• 2.3.3 復(fù)合納米粒子的制備及共自組裝條件的優(yōu)化38-39
• 2.4 結(jié)果與討論39-47
• 2.4.1 聚合物PAAA-b-PS的合成39-41
• 2.4.2 聚合物biotin-PEG_(4000)-b-PS的合成41-44
• 2.4.3 復(fù)合納米粒子組裝條件的優(yōu)化44-47
• 2.5 本章小結(jié)47-49
• 第三章 H_2O_2-NP體系用于突變p53基因的檢測49-63
• 3.1 引言49
• 3.2 主要試劑及儀器49-50
• 3.2.1 試劑49
• 3.2.2 儀器49-50
• 3.3 實(shí)驗(yàn)部分50-51
• 3.3.1 H_2O_2-NP體系對模型DNA的檢測50
• 3.3.2 pH對H_2O_2-NP聚合體系的影響50
• 3.3.3 H_2O_2-NP體系聚合時(shí)間的優(yōu)化50
• 3.3.4 H_2O_2-NP體系對突變p53基因的檢測50-51
• 3.3.5 H_2O_2-NP體系抗干擾能力的研究51
• 3.4 結(jié)果與討論51-61
• 3.4.1 H_2O_2-NP體系對模型DNA的診斷51-57
• 3.4.2 H_2O_2-NP體系對突變p53基因的檢測57-61
• 3.5 本章小結(jié)61-63
• 第四章 GO_x-NP體系用于突變p53基因的檢測63-77
• 4.1 引言63
• 4.2 主要試劑及儀器63-64
• 4.2.1 試劑63
• 4.2.2 儀器63-64
• 4.3 實(shí)驗(yàn)部分64-66
• 4.3.1 GO_x-NP體系動(dòng)力學(xué)研究64
• 4.3.2 GO_x-NP體系對模型DNA的檢測64-65
• 4.3.3 GO_x-NP體系聚合時(shí)間的優(yōu)化65
• 4.3.4 GO_x-NP體系對突變p53基因的檢測65
• 4.3.5 GO_x-NP體系抗干擾能力的考查65-66
• 4.4 結(jié)果與討論66-75
• 4.4.1 GOx-NP體系對模型DNA的檢測66-72
• 4.4.2 GOx-NP體系對突變p53基因的檢測72-75
• 4.5 小結(jié)75-77
• 第五章 全文總結(jié)與展望77-79
• 5.1 全文總結(jié)77
• 5.2 展望77-79
• 參考文獻(xiàn)79-83
• 附錄83-93
• 致謝93-95
• 研究成果及發(fā)表的學(xué)術(shù)論文95-97
• 作者簡介97-99
• 導(dǎo)師簡介99-100
• 附件100-101

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