本文關(guān)鍵詞：沙門氏菌和大腸桿菌耐藥性及耐藥基因的研究

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【摘要】：沙門氏菌和致病性大腸桿菌是重要的致病菌,由于抗生素大規(guī)模不合理的使用,使沙門氏菌和大腸桿菌出現(xiàn)了嚴(yán)重的多重耐藥性,導(dǎo)致大部分現(xiàn)有藥物無(wú)效。由質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥基因可以傳遞給其他動(dòng)物和人類,不但給養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失,同時(shí)也帶來(lái)了食品安全問(wèn)題和人類健康問(wèn)題。因此,了解沙門氏菌和大腸桿菌的耐藥規(guī)律及耐藥基因,明確其耐藥機(jī)制,不但為獸醫(yī)臨床用藥、獸藥管理提供科學(xué)依據(jù),同時(shí)也為研究機(jī)構(gòu)研制新型抗菌藥物奠定理論基礎(chǔ)。本文采用國(guó)標(biāo)法對(duì)沙門氏菌和大腸桿菌進(jìn)行分離鑒定,用肉湯微量稀釋法檢測(cè)了12種抗菌藥物的耐藥性以及PCR法檢測(cè)了耐藥基因攜帶和轉(zhuǎn)移等情況,同時(shí)還對(duì)沙門氏菌和對(duì)應(yīng)樣品分離的大腸桿菌的基因型、耐藥表型和耐藥基因進(jìn)行比較。得出以下主要結(jié)論：1.從400份樣品中共分離到大腸桿菌293株,分離率為73.3%,其中豬源136株,雞源157株；從334份樣品中共檢出沙門氏菌38株,其中檢出率最高的是遼寧某地病死豬內(nèi)臟,為26.5%,其次是安徽屠宰場(chǎng)和北京農(nóng)貿(mào)市場(chǎng),分別為11.0%和7.0%。2.對(duì)38株沙門氏菌進(jìn)行血清型檢測(cè),共得到8種類型,分別為Salmonella derby (44.7%)、Salmonella enteritidis (26.3%)、Salmonella rissen(10.5%)、Salmonella typhimurium (7.9%)、Salmonella litchfield(2.6%)、Salmonella lansing (2.6%)、Salmonella daytona (2.6%)、 Salmonella tennessee (2.6%)。使用PvuⅡ酶和EcoRⅠ酶分別對(duì)沙門氏菌和對(duì)應(yīng)樣品分離的大腸桿菌酶切分型,可以看出大腸桿菌的基因型明顯多于沙門氏菌,而同種血清型的沙門氏菌存在多種高度同源的基因型,來(lái)源相同的不同血清型的沙門氏菌也會(huì)出現(xiàn)較高的基因同源性。3.本試驗(yàn)所分離的大腸桿菌和沙門氏菌對(duì)12種常用抗菌藥物的耐藥程度不同,豬源和雞源大腸桿菌對(duì)某些藥物的耐藥性也存在差異,沙門氏菌和對(duì)應(yīng)樣品分離的大腸桿菌的耐藥趨勢(shì)相同。通過(guò)與歐盟EUCAST標(biāo)準(zhǔn)比較,發(fā)現(xiàn)我國(guó)大腸桿菌和沙門氏菌對(duì)耐藥嚴(yán)重藥物的MIC分布均有明顯右移現(xiàn)象,說(shuō)明我國(guó)細(xì)菌耐藥現(xiàn)象比歐洲嚴(yán)重的多�？傮w來(lái)說(shuō),沙門氏菌和大腸桿菌對(duì)磺胺類、四環(huán)素類、氨基糖苷類和氯霉素類耐藥比較嚴(yán)重,對(duì)p-內(nèi)酰胺類和氟喹諾酮類較為敏感。多重耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重,80%以上的大腸桿菌和全部的沙門氏菌均為多重耐藥菌株,以7重、8重和9重耐藥菌株為主。4.對(duì)沙門氏菌和對(duì)應(yīng)樣品分離的大腸桿菌進(jìn)行耐藥基因的PCR檢測(cè),結(jié)果顯示：沙門氏菌和大腸桿菌中均沒有擴(kuò)增到cmy、oxa、shv和tetM基因。β-內(nèi)酰胺類耐藥的20株沙門氏菌和19株大腸桿菌對(duì)tem基因的攜帶率分別為75.0%和68.4%；磺胺類耐藥的30株沙門氏菌和32株大腸桿菌對(duì)sull、sul2、sul3基因的檢出率分別為43.3%和31.1%、33.3%和28.1%、16.7%和18.7%；四環(huán)素類耐藥的38株沙門氏菌和38株大腸桿菌對(duì)tetA基因的攜帶率分別為76.3%、81.6%；氨基糖苷類耐藥的29株沙門氏菌和27株大腸桿菌對(duì)aadA、aac(6')-Ib-cr基因攜帶率分別為34.5%和40.7%、41.4%和33.3%；氯霉素類耐藥的30株沙門氏菌和24株大腸桿菌對(duì)floR基因的攜帶率分別為83.3%和87.5%。5.DNA解旋酶和拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅳ基因突變是革蘭氏陰性菌對(duì)氟喹諾酮類抗菌藥物產(chǎn)生耐藥性的重要機(jī)制。15株沙門氏菌中有7株(46.7%)發(fā)生gyrA基因的Ser83Ala位點(diǎn)突變,2株(13.3%)為gyrA基因的Asp87Asn位點(diǎn)突變,4株(26.7%)同時(shí)存在Ser83Ala和Asp87Asn位點(diǎn)突變,2株(13.3%)同時(shí)出現(xiàn)gyrA基因的Ser83Ala突變和parC基因的Ser80Arg突變。17株大腸桿菌中有9株(52.9%)發(fā)生gyrA基因的Ser83Ala位點(diǎn)突變,5株(29.4%)為gyrA基因的Asp87Asn位點(diǎn)突變,3株(17.6%)同時(shí)存在Ser83Ala和Asp87Asn位點(diǎn)突變。6.通過(guò)floR基因的轉(zhuǎn)化接合試驗(yàn)證明,質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥基因可在沙門氏菌和大腸桿菌之間轉(zhuǎn)移,接合后的受體菌獲得了供體沙門氏菌的耐藥基因,表現(xiàn)出與供體菌相同的耐藥表型。
【關(guān)鍵詞】：沙門氏菌 大腸桿菌 血清型 耐藥性 耐藥基因
【學(xué)位授予單位】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R446.5
【目錄】：

• 摘要10-12
• Abstract12-14
• 第一章 前言14-23
• 1.1 沙門氏菌和大腸桿菌簡(jiǎn)介14
• 1.2 沙門氏菌病和大腸桿菌病的危害14-15
• 1.3 沙門氏菌血清型15-16
• 1.4 沙門氏菌和大腸桿菌的耐藥現(xiàn)狀16-17
• 1.4.1 沙門氏菌耐藥現(xiàn)狀17
• 1.4.2 大腸桿菌耐藥現(xiàn)狀17
• 1.5 沙門氏菌和大腸桿菌的耐藥機(jī)制17-19
• 1.5.1 β-內(nèi)酰胺類耐藥機(jī)制17-18
• 1.5.2 氨基糖苷類耐藥機(jī)制18
• 1.5.3 氟喹諾酮類耐藥機(jī)制18-19
• 1.5.4 磺胺類耐藥機(jī)制19
• 1.5.5 氯霉素類耐藥機(jī)制19
• 1.5.6 四環(huán)素類耐藥機(jī)制19
• 1.6 沙門氏菌和大腸桿菌的耐藥基因19-20
• 1.6.1 沙門氏菌耐藥基因20
• 1.6.2 大腸桿菌耐藥基因20
• 1.7 沙門氏菌病和大腸桿菌病的預(yù)防措施20-21
• 1.8 研究意義與內(nèi)容21-23
• 1.8.1 研究意義21-22
• 1.8.2 研究?jī)?nèi)容22-23
• 第二章 沙門氏菌和大腸桿菌的分離鑒定23-29
• 2.1 材料23
• 2.1.1 樣品23
• 2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)菌株23
• 2.1.3 培養(yǎng)基和試劑23
• 2.1.4 主要儀器23
• 2.2 方法23-26
• 2.2.1 樣品采集23-24
• 2.2.2 大腸桿菌分離鑒定24-25
• 2.2.3 沙門氏菌分離鑒定25-26
• 2.2.4 菌株保存26
• 2.3 結(jié)果與分析26-28
• 2.3.1 大腸桿菌分離率26-27
• 2.3.2 沙門氏菌分離率27
• 2.3.3 生化鑒定及PCR鑒定結(jié)果27-28
• 2.4 討論28-29
• 第三章 沙門氏菌和大腸桿菌血清型與基因型分析29-35
• 3.1 材料29
• 3.1.1 培養(yǎng)基和試劑29
• 3.1.2 主要儀器29
• 3.2 方法29-31
• 3.2.1 沙門氏菌血清型鑒定29-30
• 3.2.2 沙門氏菌和大腸桿菌基因型及進(jìn)化樹分析30-31
• 3.3 結(jié)果與分析31-32
• 3.3.1 沙門氏菌血清型鑒定結(jié)果31
• 3.3.2 沙門氏菌和大腸桿菌基因型及進(jìn)化樹結(jié)果31-32
• 3.4 討論32-35
• 第四章 沙門氏菌和大腸桿菌的藥敏分析35-42
• 4.1 材料35
• 4.1.1 培養(yǎng)基和試劑35
• 4.1.2 主要儀器35
• 4.2 方法35
• 4.3 結(jié)果與分析35-41
• 4.3.1 大腸桿菌的耐藥表型35-37
• 4.3.2 沙門氏菌的耐藥表型37-38
• 4.3.3 沙門氏菌和大腸桿菌的MIC分布38-40
• 4.3.4 多重耐藥性40-41
• 4.4 討論41-42
• 第五章 沙門氏菌和大腸桿菌耐藥基因的研究42-55
• 5.1 材料42
• 5.1.1 主要試劑42
• 5.1.2 主要儀器42
• 5.2 方法42-46
• 5.2.1 耐藥基因檢測(cè)42-44
• 5.2.2 氟喹諾酮類基因突變分析44-46
• 5.2.3 轉(zhuǎn)化接合試驗(yàn)46
• 5.3 結(jié)果與分析46-54
• 5.3.1 耐藥基因攜帶率46-50
• 5.3.2 氟喹諾酮類基因突變結(jié)果50-53
• 5.3.3 轉(zhuǎn)化接合結(jié)果53-54
• 5.4 討論54-55
• 第六章 結(jié)論55-57
• 參考文獻(xiàn)57-61
• 附錄61-63
• 致謝63-64
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文64

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