本文關(guān)鍵詞：內(nèi)毒素耐受小鼠脾臟IRAK-4及TRAF3表達(dá)變化的研究

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【摘要】：目的:首先建立小鼠內(nèi)毒素耐受的模型,研究?jī)?nèi)毒素耐受后的小鼠脾臟組織TLR4/IRAK-4(Toll樣受體4)信號(hào)通路中相關(guān)正性因子白細(xì)胞介素-1受體相關(guān)激酶4(interleukin-1 receptor-associated kinase 4,IRAK-4)及相關(guān)負(fù)性因子腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子3(TNF receptor associated factors 3,TRAF3)的表達(dá)變化。方法:1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的喂養(yǎng):一共84只ICR小鼠(日齡35土2天,體重25土5g),飼養(yǎng)于相同的環(huán)境(溫度、濕度及食物等均相同)中,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周。2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組:將84只ICR小鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分配到以下三組中,即內(nèi)毒素耐受組、非內(nèi)毒素耐受組、空白對(duì)照組,每組28只小鼠。3、建立動(dòng)物模型:(1)、預(yù)先小劑量?jī)?nèi)毒素刺激:采用腹腔注射的方法,對(duì)內(nèi)毒素耐受組小鼠腹腔注射脂多糖(Lipopolysaccharides LPS)0.5mg/kg(小劑量),非內(nèi)毒素耐受組及空白對(duì)照組小鼠分別予以等體積的生理鹽水進(jìn)行腹腔注射。(2)第二次大劑量?jī)?nèi)毒素刺激:以上小劑量脂多糖腹腔注射結(jié)束24小時(shí)后,再次對(duì)內(nèi)毒素耐受組予以腹腔注射脂多糖5mg/kg(大劑量),同時(shí)非內(nèi)毒素耐受組小鼠也予以腹腔注射脂多糖5mg/kg,而空白對(duì)照組小鼠仍然予以相同體積的生理鹽水進(jìn)行腹腔注射。4、留取標(biāo)本與指標(biāo)檢測(cè):(1)、分別于第二次大劑量?jī)?nèi)毒素注射前(0小時(shí)),注射后3小時(shí)、6小時(shí)、24小時(shí)按照隨機(jī)數(shù)字表法于每組中選取7只小鼠,采用摘除眼球的方法取得小鼠血液,予以離心后取血清,采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay,ELISA)檢測(cè)各組小鼠不同時(shí)間點(diǎn)血清中細(xì)胞因子白介素-10(interleukin-10;IL-10)的表達(dá)情況。(2)、眼球取血后,立即處死小鼠,迅速取出小鼠的脾臟組織,置于多聚甲醛固定液中固定保存,采用石蠟切片,采用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)各組小鼠不同時(shí)間點(diǎn)脾臟組織中IRAK-4及TRAF3的表達(dá)情況,同時(shí)使用光鏡觀察各組小鼠脾臟組織在不同時(shí)間點(diǎn)的病理變化。結(jié)果:1、各組小鼠日常行為的觀察:內(nèi)毒素耐受組的28只小鼠于第一次小劑量?jī)?nèi)毒素(0.5mg/kg)注射后不同程度的出現(xiàn)活動(dòng)減少、吃食物減少、毛發(fā)散亂等表現(xiàn)。而注射相同體積生理鹽水的非內(nèi)毒素耐受組及空白對(duì)照組內(nèi)小鼠的行為活動(dòng)無(wú)明顯變化。第二次大劑量?jī)?nèi)毒素(5mg/kg)注射后,內(nèi)毒素耐受組及非內(nèi)毒素耐受組小鼠均出現(xiàn)明顯的少吃、少動(dòng)、離群、毛發(fā)散亂等表現(xiàn),且這些表現(xiàn)較小劑量?jī)?nèi)毒素注射后更為明顯(非內(nèi)毒素耐受組有小鼠出現(xiàn)腹瀉、口唇發(fā)紺表現(xiàn))。而第二次注射相同體積生理鹽水的空白對(duì)照組小鼠仍無(wú)明顯變化。2、小鼠血清IL-10的表達(dá)情況:(1)、第二次大劑量?jī)?nèi)毒素注射前(0小時(shí)),對(duì)小鼠血清IL-10進(jìn)行三組組間比較,內(nèi)毒素耐受組的表達(dá)量高于非內(nèi)毒素耐受組及空白對(duì)照組,這說(shuō)明經(jīng)小劑量?jī)?nèi)毒素注射后,小鼠體內(nèi)的抑炎癥細(xì)胞因子IL-10已經(jīng)開(kāi)始升高;非內(nèi)毒素耐受組與空白對(duì)照組相比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)、第二次大劑量?jī)?nèi)毒素注射后的3小時(shí)、6小時(shí)及24小時(shí),對(duì)小鼠血清IL-10進(jìn)行三組組間比較,內(nèi)毒素耐受組IL-10的表達(dá)量是大于非內(nèi)毒素耐受組及空白對(duì)照組的;非內(nèi)毒素耐受組IL-10的表達(dá)量又是大于空白對(duì)照組的;這說(shuō)明對(duì)小鼠進(jìn)行預(yù)先的小劑量?jī)?nèi)毒素注射后,再次予以大劑量?jī)?nèi)毒素刺激,小鼠血清中的抑炎癥細(xì)胞因子IL-10的表達(dá)升高更為明顯。(3)、對(duì)小鼠血清IL-10進(jìn)行三組組內(nèi)比較,內(nèi)毒素耐受組及非內(nèi)毒素耐受組的0小時(shí)分別與3小時(shí)、6小時(shí)、24小時(shí)相比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而3、6、24小時(shí)兩兩之間相比較,差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)�？瞻讓�(duì)照組在實(shí)驗(yàn)的各個(gè)時(shí)刻IL-10表達(dá)量差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3、小鼠脾臟組織病理變化:內(nèi)毒素耐受組及非內(nèi)毒素耐受組小鼠脾臟組織都出現(xiàn)不同程度的病理?yè)p傷,表現(xiàn)為脾臟充血,組織結(jié)構(gòu)改變,紅髓、白髓分界不輕,而內(nèi)毒素耐受組的這種損傷變化明顯輕于非內(nèi)毒素耐受組;空白對(duì)照組則沒(méi)有上述變化。這也可以說(shuō)明在本實(shí)驗(yàn)中,內(nèi)毒素耐受的小鼠模型的建立是成功的。4、小鼠脾臟組織IRAK-4的表達(dá)情況:(1)、對(duì)小鼠脾臟組織IRAK-4的表達(dá)情況進(jìn)行三組組間比較:(1)、第二次大劑量?jī)?nèi)毒素注射前(0小時(shí)),小鼠脾臟組織IRAK-4的表達(dá)量三組間的差異均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)、第二次大劑量?jī)?nèi)毒素注射后的3小時(shí)、6小時(shí),小鼠脾臟組織IRAK4的表達(dá)量三組間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且非內(nèi)毒素耐受組的表達(dá)量高于內(nèi)毒素耐受組及空白對(duì)照組,而內(nèi)毒素耐受組的表達(dá)量又高于空白對(duì)照組。(3)、第二次大劑量?jī)?nèi)毒素注射后的24小時(shí),非內(nèi)毒素耐受組小鼠脾臟組織IRAK-4的表達(dá)量高于內(nèi)毒素耐受組及空白對(duì)照組;內(nèi)毒素耐受組與空白對(duì)照組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)、對(duì)小鼠脾臟組織IRAK-4的表達(dá)情況進(jìn)行各組的組內(nèi)比較:內(nèi)毒素耐受組及非內(nèi)毒素耐受組小鼠脾臟IRAK-4的表達(dá)在第二次大劑量?jī)?nèi)毒素注射后的3小時(shí)均已經(jīng)升高,并且可以維持至6小時(shí),于24小時(shí)已經(jīng)有所下降。空白對(duì)照組的IRAK-4表達(dá)量在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5、小鼠脾臟組織TRAF3的表達(dá)情況:(1)、對(duì)小鼠脾臟組織TRAF3的表達(dá)情況進(jìn)行三組組間比較:(1)、第二次大劑量?jī)?nèi)毒素注射前(0小時(shí)),小鼠脾臟組織TRAF3的表達(dá)量三組間的差異均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)、第二次大劑量?jī)?nèi)毒素注射后的3小時(shí)、6小時(shí),小鼠脾臟組織TRAF3的表達(dá)量三組間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且內(nèi)毒素耐受組的表達(dá)量高于非內(nèi)毒素耐受組及空白對(duì)照組,而非內(nèi)毒素耐受組的表達(dá)量又高于空白對(duì)照組。(3)、第二次大劑量?jī)?nèi)毒素注射后的24小時(shí),內(nèi)毒素耐受組小鼠脾臟組織TRAF3的表達(dá)量高于非內(nèi)毒素耐受組及空白對(duì)照組;非內(nèi)毒素耐受組與空白對(duì)照組之間的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)、對(duì)小鼠脾臟組織TRAF3的表達(dá)情況進(jìn)行各組的組內(nèi)比較:內(nèi)毒素耐受組及非內(nèi)毒素耐受組小鼠脾臟TRAF3的表達(dá)均在第二次大劑量?jī)?nèi)毒素注射后的3小時(shí)已經(jīng)出現(xiàn),并且可以維持至6小時(shí),內(nèi)毒素耐受組于24小時(shí)仍可維持6小時(shí)表達(dá)量,非內(nèi)毒素耐受組于24小時(shí)已有所下降,但仍然存在。結(jié)論:1.對(duì)小鼠預(yù)先腹腔注射0.5mg/kg的內(nèi)毒素,24小時(shí)后再次注射5mg/kg的內(nèi)毒素,可以建立內(nèi)毒素耐受的小鼠模型。2.內(nèi)毒素耐受的小鼠血清中的抑炎癥細(xì)胞因子IL-10的表達(dá)升高,且脾臟組織的病理?yè)p傷會(huì)減輕。3.內(nèi)毒素耐受時(shí)小鼠脾臟TLR4/IRAK-4信號(hào)通路中正性調(diào)節(jié)因子IRAK-4表達(dá)下調(diào),而負(fù)性調(diào)節(jié)因子TRAF3的表達(dá)上調(diào),可能參與了內(nèi)毒素耐受的形成。
【關(guān)鍵詞】：IRAK-4 TRAF3 內(nèi)毒素耐受 IL-10 小鼠
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R459.7
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-14
• 前言14-16
• 材料與方法16-26
• 結(jié)果26-38
• 討論38-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 英漢縮略詞對(duì)照表50-51
• 致謝51-52
• TRAF3在內(nèi)毒素耐受中的作用及其相關(guān)機(jī)制研究進(jìn)展 綜述52-61
• 參考文獻(xiàn)58-61

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1 李磊,王興鵬;內(nèi)毒素耐受的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊(cè));2004年03期

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