本文關(guān)鍵詞：內(nèi)毒素耐受小鼠脾臟IRAK-4及TRAF3表達變化的研究

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【摘要】：目的:首先建立小鼠內(nèi)毒素耐受的模型,研究內(nèi)毒素耐受后的小鼠脾臟組織TLR4/IRAK-4(Toll樣受體4)信號通路中相關(guān)正性因子白細胞介素-1受體相關(guān)激酶4(interleukin-1 receptor-associated kinase 4,IRAK-4)及相關(guān)負性因子腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子3(TNF receptor associated factors 3,TRAF3)的表達變化。方法:1、實驗動物的喂養(yǎng):一共84只ICR小鼠(日齡35土2天,體重25土5g),飼養(yǎng)于相同的環(huán)境(溫度、濕度及食物等均相同)中,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周。2、實驗動物分組:將84只ICR小鼠采用隨機數(shù)字表法隨機分配到以下三組中,即內(nèi)毒素耐受組、非內(nèi)毒素耐受組、空白對照組,每組28只小鼠。3、建立動物模型:(1)、預(yù)先小劑量內(nèi)毒素刺激:采用腹腔注射的方法,對內(nèi)毒素耐受組小鼠腹腔注射脂多糖(Lipopolysaccharides LPS)0.5mg/kg(小劑量),非內(nèi)毒素耐受組及空白對照組小鼠分別予以等體積的生理鹽水進行腹腔注射。(2)第二次大劑量內(nèi)毒素刺激:以上小劑量脂多糖腹腔注射結(jié)束24小時后,再次對內(nèi)毒素耐受組予以腹腔注射脂多糖5mg/kg(大劑量),同時非內(nèi)毒素耐受組小鼠也予以腹腔注射脂多糖5mg/kg,而空白對照組小鼠仍然予以相同體積的生理鹽水進行腹腔注射。4、留取標(biāo)本與指標(biāo)檢測:(1)、分別于第二次大劑量內(nèi)毒素注射前(0小時),注射后3小時、6小時、24小時按照隨機數(shù)字表法于每組中選取7只小鼠,采用摘除眼球的方法取得小鼠血液,予以離心后取血清,采用酶聯(lián)免疫吸附測定法(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay,ELISA)檢測各組小鼠不同時間點血清中細胞因子白介素-10(interleukin-10;IL-10)的表達情況。(2)、眼球取血后,立即處死小鼠,迅速取出小鼠的脾臟組織,置于多聚甲醛固定液中固定保存,采用石蠟切片,采用免疫組織化學(xué)的方法檢測各組小鼠不同時間點脾臟組織中IRAK-4及TRAF3的表達情況,同時使用光鏡觀察各組小鼠脾臟組織在不同時間點的病理變化。結(jié)果:1、各組小鼠日常行為的觀察:內(nèi)毒素耐受組的28只小鼠于第一次小劑量內(nèi)毒素(0.5mg/kg)注射后不同程度的出現(xiàn)活動減少、吃食物減少、毛發(fā)散亂等表現(xiàn)。而注射相同體積生理鹽水的非內(nèi)毒素耐受組及空白對照組內(nèi)小鼠的行為活動無明顯變化。第二次大劑量內(nèi)毒素(5mg/kg)注射后,內(nèi)毒素耐受組及非內(nèi)毒素耐受組小鼠均出現(xiàn)明顯的少吃、少動、離群、毛發(fā)散亂等表現(xiàn),且這些表現(xiàn)較小劑量內(nèi)毒素注射后更為明顯(非內(nèi)毒素耐受組有小鼠出現(xiàn)腹瀉、口唇發(fā)紺表現(xiàn))。而第二次注射相同體積生理鹽水的空白對照組小鼠仍無明顯變化。2、小鼠血清IL-10的表達情況:(1)、第二次大劑量內(nèi)毒素注射前(0小時),對小鼠血清IL-10進行三組組間比較,內(nèi)毒素耐受組的表達量高于非內(nèi)毒素耐受組及空白對照組,這說明經(jīng)小劑量內(nèi)毒素注射后,小鼠體內(nèi)的抑炎癥細胞因子IL-10已經(jīng)開始升高;非內(nèi)毒素耐受組與空白對照組相比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。(2)、第二次大劑量內(nèi)毒素注射后的3小時、6小時及24小時,對小鼠血清IL-10進行三組組間比較,內(nèi)毒素耐受組IL-10的表達量是大于非內(nèi)毒素耐受組及空白對照組的;非內(nèi)毒素耐受組IL-10的表達量又是大于空白對照組的;這說明對小鼠進行預(yù)先的小劑量內(nèi)毒素注射后,再次予以大劑量內(nèi)毒素刺激,小鼠血清中的抑炎癥細胞因子IL-10的表達升高更為明顯。(3)、對小鼠血清IL-10進行三組組內(nèi)比較,內(nèi)毒素耐受組及非內(nèi)毒素耐受組的0小時分別與3小時、6小時、24小時相比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而3、6、24小時兩兩之間相比較,差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)�？瞻讓φ战M在實驗的各個時刻IL-10表達量差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3、小鼠脾臟組織病理變化:內(nèi)毒素耐受組及非內(nèi)毒素耐受組小鼠脾臟組織都出現(xiàn)不同程度的病理損傷,表現(xiàn)為脾臟充血,組織結(jié)構(gòu)改變,紅髓、白髓分界不輕,而內(nèi)毒素耐受組的這種損傷變化明顯輕于非內(nèi)毒素耐受組;空白對照組則沒有上述變化。這也可以說明在本實驗中,內(nèi)毒素耐受的小鼠模型的建立是成功的。4、小鼠脾臟組織IRAK-4的表達情況:(1)、對小鼠脾臟組織IRAK-4的表達情況進行三組組間比較:(1)、第二次大劑量內(nèi)毒素注射前(0小時),小鼠脾臟組織IRAK-4的表達量三組間的差異均不具有統(tǒng)計學(xué)意義。(2)、第二次大劑量內(nèi)毒素注射后的3小時、6小時,小鼠脾臟組織IRAK4的表達量三組間的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,且非內(nèi)毒素耐受組的表達量高于內(nèi)毒素耐受組及空白對照組,而內(nèi)毒素耐受組的表達量又高于空白對照組。(3)、第二次大劑量內(nèi)毒素注射后的24小時,非內(nèi)毒素耐受組小鼠脾臟組織IRAK-4的表達量高于內(nèi)毒素耐受組及空白對照組;內(nèi)毒素耐受組與空白對照組之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)、對小鼠脾臟組織IRAK-4的表達情況進行各組的組內(nèi)比較:內(nèi)毒素耐受組及非內(nèi)毒素耐受組小鼠脾臟IRAK-4的表達在第二次大劑量內(nèi)毒素注射后的3小時均已經(jīng)升高,并且可以維持至6小時,于24小時已經(jīng)有所下降�？瞻讓φ战M的IRAK-4表達量在各個時間點之間的比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。5、小鼠脾臟組織TRAF3的表達情況:(1)、對小鼠脾臟組織TRAF3的表達情況進行三組組間比較:(1)、第二次大劑量內(nèi)毒素注射前(0小時),小鼠脾臟組織TRAF3的表達量三組間的差異均不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)、第二次大劑量內(nèi)毒素注射后的3小時、6小時,小鼠脾臟組織TRAF3的表達量三組間的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),且內(nèi)毒素耐受組的表達量高于非內(nèi)毒素耐受組及空白對照組,而非內(nèi)毒素耐受組的表達量又高于空白對照組。(3)、第二次大劑量內(nèi)毒素注射后的24小時,內(nèi)毒素耐受組小鼠脾臟組織TRAF3的表達量高于非內(nèi)毒素耐受組及空白對照組;非內(nèi)毒素耐受組與空白對照組之間的差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)、對小鼠脾臟組織TRAF3的表達情況進行各組的組內(nèi)比較:內(nèi)毒素耐受組及非內(nèi)毒素耐受組小鼠脾臟TRAF3的表達均在第二次大劑量內(nèi)毒素注射后的3小時已經(jīng)出現(xiàn),并且可以維持至6小時,內(nèi)毒素耐受組于24小時仍可維持6小時表達量,非內(nèi)毒素耐受組于24小時已有所下降,但仍然存在。結(jié)論:1.對小鼠預(yù)先腹腔注射0.5mg/kg的內(nèi)毒素,24小時后再次注射5mg/kg的內(nèi)毒素,可以建立內(nèi)毒素耐受的小鼠模型。2.內(nèi)毒素耐受的小鼠血清中的抑炎癥細胞因子IL-10的表達升高,且脾臟組織的病理損傷會減輕。3.內(nèi)毒素耐受時小鼠脾臟TLR4/IRAK-4信號通路中正性調(diào)節(jié)因子IRAK-4表達下調(diào),而負性調(diào)節(jié)因子TRAF3的表達上調(diào),可能參與了內(nèi)毒素耐受的形成。
【關(guān)鍵詞】：IRAK-4 TRAF3 內(nèi)毒素耐受 IL-10 小鼠
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R459.7
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-14
• 前言14-16
• 材料與方法16-26
• 結(jié)果26-38
• 討論38-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻46-50
• 英漢縮略詞對照表50-51
• 致謝51-52
• TRAF3在內(nèi)毒素耐受中的作用及其相關(guān)機制研究進展 綜述52-61
• 參考文獻58-61

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1 李磊,王興鵬;內(nèi)毒素耐受的研究進展[J];國外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊);2004年03期

2 李生偉;劉作金;劉長安;李旭宏;游海波;陳先鋒;龔建平;;庫普弗細胞內(nèi)毒素耐受時白細胞介素-1受體相關(guān)激酶-4的表達變化[J];中華肝臟病雜志;2006年02期

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4 羅福玲;萬敬員;周岐新;;內(nèi)毒素耐受機制的研究進展[J];生理科學(xué)進展;2006年04期

5 欒潔;周炳榮;丁惠;戚中田;;細菌內(nèi)毒素耐受小鼠肝細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)分子的表達變化[J];微生物與感染;2006年04期

6 祝敏芳;瞿介明;張輝軍;周雙[，

本文編號：928847