本文關(guān)鍵詞：基于開環(huán)反應(yīng)構(gòu)建多糖基多功能基因載體

  更多相關(guān)文章： 基因載體 開環(huán)反應(yīng) 普魯蘭 MRI 氨基糖苷類抗生素 抗菌

【摘要】：基因治療可以治療先天性遺傳和后天性基因異常引起的疾病,受到各國科研工作者的關(guān)注�；蛑委煹年P(guān)鍵之一是構(gòu)建安全、高效的基因載體。相比于病毒基因載體,陽離子基因載體具有轉(zhuǎn)染效率高,無免疫原性,結(jié)構(gòu)易于控制,可大規(guī)模制備等優(yōu)點。隨著臨床上對基因載體提出MRI/CT成像,熒光成像,抗菌,載藥,光熱治療等多元化的需求,構(gòu)建多功能基因載體具有重要意義。普魯蘭(pullulan)是由出芽短梗霉產(chǎn)生的微生物多糖,具有生物相容性好,肝細胞靶向等優(yōu)點；慶大霉素、妥布霉素和新霉素是由放線菌產(chǎn)生的氨基糖苷類抗生素,具有良好的生物相容性和抗菌性能�；谏鲜鰞�(yōu)越性,分別以普魯蘭、氨基糖苷類抗生素作為骨架,利用開環(huán)反應(yīng)構(gòu)建低毒、高效的多功能基因載體,本文的研究內(nèi)容如下：1、首先,在pullulan上接上原子轉(zhuǎn)移自由基聚合(ATRP)引發(fā)位點,得到引發(fā)劑Pullulan-Br。然后,通過ATRP法引發(fā)甲基丙烯酸縮水甘油酯(GMA)得到PuPGMA,進一步用乙醇胺開環(huán)反應(yīng)環(huán)氧基團得到陽離子聚合物PuPGEA。最后,通過鄰二羥基與硼酸基團的成醚反應(yīng),靜電相互作用,PuPGEA分別與小分子造影劑GdL, GdW自組裝形成納米顆粒PuPGEA-GdW, PuPGEA-GdL,構(gòu)建了具有核磁造影功能的肝細胞靶向基因載體。對該載體系統(tǒng)進行了細胞活性,體外／體內(nèi)基因轉(zhuǎn)染效率,細胞吞噬和體外/體內(nèi)MRI造影性能等評價,實驗結(jié)果表明：基于普魯蘭的陽離子納米顆粒PuPGEA-GdW和PuPGEA-GdL的細胞毒性小于“金標”PEI(25 kDa),在肝細胞中的基因轉(zhuǎn)染效率更高。PuPGEA-GdW表現(xiàn)出的MRI造影性能更好�；趐ullulan構(gòu)建的具有肝細胞靶向和MRI造影功能的多糖基因載體的設(shè)計為多功能基因載體的構(gòu)建提供了新的思路。2、用慶大霉素、妥布霉素和新霉素分別與羥乙基二硫雙縮水甘油醚、乙二醇二縮水甘油醚開環(huán)反應(yīng),乙二胺(ED)封端來增加聚合物水溶性,制備得到可降解/不可降解的超支化聚合物SS-HP和HP。隨后比較了超支化聚合物SS-HP和HP的細胞毒性,基因轉(zhuǎn)染效率,細胞吞噬,紅細胞溶血,抗菌性能。最后,建立C6腦膠質(zhì)瘤動物實驗?zāi)Ｐ?評價SS-HP和HP負載p53后的抑瘤性能。實驗結(jié)果表明：由于雙硫鍵可以被谷胱甘肽(GSH)生物剪切,SS-HP的基因轉(zhuǎn)染效率顯著高于HP,細胞毒性低于HP; SS-HP和HP均具有良好的生物相容性和抗菌性能；用新霉素構(gòu)建的超支化聚合物SS-HPN和HPN的基因轉(zhuǎn)染效率最高；SS-HPN和HPN負載p53抑瘤基因后具有良好的動物體內(nèi)抗腫瘤效果。
【關(guān)鍵詞】：基因載體 開環(huán)反應(yīng) 普魯蘭 MRI 氨基糖苷類抗生素 抗菌
【學(xué)位授予單位】：北京化工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R450
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-15
• 符號說明15-16
• 第一章 緒論16-28
• 1.1 基因治療簡介16-17
• 1.2 病毒基因載體17
• 1.3 非病毒基因載體17-22
• 1.3.1 陽離子載體17-19
• 1.3.2 陽離子脂質(zhì)體19-20
• 1.3.3 天然多糖衍生物20-22
• 1.4 多功能陽離子基因載體的研究22-24
• 1.4.1 磁共振成像22-23
• 1.4.2 抗菌23-24
• 1.4.3 載藥24
• 1.5 原子轉(zhuǎn)移自由基聚合24-25
• 1.6 課題的設(shè)計意義25-28
• 1.6.1 基于開環(huán)反應(yīng)構(gòu)建具有核磁造影功能的多糖基因載體25-26
• 1.6.2 基于開環(huán)反應(yīng)構(gòu)建具有抗菌功能的超支化基因載體26-28
• 第二章 基于開環(huán)反應(yīng)構(gòu)建具有核磁造影功能的多糖基因載體28-46
• 2.1 引言28-29
• 2.2 實驗部分29-34
• 2.2.1 實驗材料與儀器29-30
• 2.2.2 陽離子聚合物PuPGEA的制備30-31
• 2.2.3 PuPGEA-GdL和PuPGEA-GdW納米顆粒的制備31-32
• 2.2.4 聚合物表征32
• 2.2.5 聚合物/pDNA復(fù)合物的制備32
• 2.2.6 細胞活性評價32-33
• 2.2.7 基因轉(zhuǎn)染效率測試33
• 2.2.8 細胞吞噬測試33
• 2.2.9 體外MRI測試33-34
• 2.2.10 體內(nèi)實驗34
• 2.3 結(jié)果與討論34-45
• 2.3.1 PuPGEA-GdL和PuPGEA-GdW的合成34-37
• 2.3.2 陽離子聚合物的DNA縮合性能測試37-39
• 2.3.3 細胞活性評價39-40
• 2.3.4 體外轉(zhuǎn)染效率測試40-41
• 2.3.5 細胞內(nèi)吞測試41-43
• 2.3.6 體外MRI測試43-44
• 2.3.7 體內(nèi)轉(zhuǎn)染效率和MRI測試44-45
• 2.4 本章小結(jié)45-46
• 第三章 基于開環(huán)反應(yīng)構(gòu)建具有抗菌性能的超支化基因載體46-64
• 3.1 引言46-47
• 3.2 實驗部分47-53
• 3.2.1 實驗材料與儀器47-48
• 3.2.2 基于抗生素構(gòu)建超支化聚合物48-50
• 3.2.3 聚合物/pDNA復(fù)合物的制備50
• 3.2.4 表征實驗50-51
• 3.2.5 細胞活性51
• 3.2.6 基因轉(zhuǎn)染效率51
• 3.2.7 細胞吞噬51-52
• 3.2.8 抗菌性能52
• 3.2.9 體外溶血實驗52-53
• 3.2.10 體內(nèi)抗腫瘤評價53
• 3.3 結(jié)果與討論53-62
• 3.3.1 超支化聚合物的DNA縮合性能測試53-55
• 3.3.2 細胞活性和基因轉(zhuǎn)染效率測試55-57
• 3.3.3 細胞吞噬57-58
• 3.3.4 抗菌性能評價58-60
• 3.3.5 紅細胞溶血試驗60-61
• 3.3.6 體內(nèi)抗腫瘤性能評價61-62
• 3.4 本章小結(jié)62-64
• 第四章 總結(jié)64-66
• 參考文獻66-74
• 致謝74-76
• 研究成果及發(fā)表的學(xué)術(shù)論文76-78
• 作者簡介78-80
• 導(dǎo)師簡介80-82
• 附件82-83

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