本文關(guān)鍵詞：膿毒癥合并ALI的分子標(biāo)志物篩選

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【摘要】：目的：膿毒癥合并急性肺損傷(ALI)的早期診斷及有效的治療對疾病預(yù)后非常重要,但目前人們對該疾病的相關(guān)分子標(biāo)志物及機(jī)理認(rèn)識還十分有限。本研究應(yīng)用基因芯片技術(shù),高通量檢測外周血miRNA,研究膿毒癥合并ALI具有差異表達(dá)的miRNA,進(jìn)行篩選,討論這些miRNA能否可以應(yīng)用于膿毒癥合并ALI的診斷和預(yù)測；同時(shí),研究膿毒癥合并ALI外周血中TLR4及IL-34、IL-36的表達(dá)變化、三者間是否具有相關(guān)性,以及其與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性,為膿毒癥合并ALI的機(jī)制研究提供理論基礎(chǔ),為臨床膿毒癥合并ALI的預(yù)測提供新的研究思路。方法：收集內(nèi)蒙古包鋼醫(yī)院院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科收治的膿毒癥合并ALI患者和健康體檢者的外周血液標(biāo)本(正常組共11例,膿毒癥合并ALI組共18例)。Trizol法提取標(biāo)本(外周血)的總RNA,使用紫外分光光度儀(Nanodrop1000)測定出總RNA的質(zhì)量,篩選出符合實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的血液樣品(正常組6例,膿毒癥合并ALI組3例)。使用miRNA完全標(biāo)記和Hyb工具包的試劑盒來進(jìn)行基因芯片雜交,用Agilent Feature Extraction軟件對雜交圖片進(jìn)行分析,用GeneSpring軟件處理分析并篩選出膿毒癥合并ALI組和正常對照組之間有明顯差異表達(dá)的miRNA (以P值0.05和FC (abs)值2為條件),用DAVID工具對靶基因相關(guān)的功能進(jìn)行預(yù)測。2%EDTA抗凝劑的試管采集外周靜脈血(正常組5例,膿毒癥合并ALI組15例),離心取上清,用于ELISA法檢測TLR4、IL-34、IL-36。結(jié)果：1.Agilent芯片高通量檢測發(fā)現(xiàn)膿毒癥合并ALI中共有320個(gè)miRNA存在差異表達(dá),miRNA在膿毒癥合并ALI組中上調(diào)的有138個(gè),下調(diào)的有182個(gè)；包括7個(gè)10倍以上的上調(diào)基因：miRNA-619-5p、miRNA-6881-3p. miRNA-449b-3p、miRNA-3657、miRNA-4254、miRNA-34b-3p和miRNA-1287-5p;3個(gè)10倍以上的下調(diào)基因：miRNA-362-5p、miRNA-892b和miRNA-625-5p。這止匕miRNA目關(guān)的預(yù)測靶基因數(shù)量龐大,經(jīng)篩選獲得了大約有3500個(gè)共有的靶基因；靶基因功能分析結(jié)果顯示,主要與調(diào)控生物膜離子通道有關(guān)。2.膿毒癥合并ALI的外周血中TLR4、IL-34、IL-36均顯著提高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。3.經(jīng)Pearson才目關(guān)分析,IL-34濃度與TLR4濃度呈正相關(guān),IL-36濃度與TLR4濃度不相關(guān),IL-34濃度與IL-36濃度呈正相關(guān)。結(jié)論和意義：膿毒癥合并ALI中共有320個(gè)miRNA存在差異表達(dá),此中包含上調(diào)138個(gè),下調(diào)182個(gè)；這些miRNA共有的靶基因大約有3500個(gè),主要與調(diào)控生物膜離子通道有關(guān)。膿毒癥合并ALI的外周血中TLR4-IL、34.IL-36均顯著提高；IL-34濃度與TLR4濃度呈正相關(guān),IL-36濃度與TLR4濃度不相關(guān),IL-34濃度與IL-36濃度呈正相關(guān)。在膿毒癥合并ALI炎癥反應(yīng)中IL-34可能對TLR4及下游炎癥因子的表達(dá)有影響,IL-34、IL-36在調(diào)控炎癥因子的表達(dá)中協(xié)同作用。這對膿毒癥合并ALI機(jī)制研究提供了新的思路,對診斷、評估、治療膿毒癥合并ALI具有一定的生物學(xué)意義。
【關(guān)鍵詞】：膿毒癥合并ALI miRNA TLR4 IL-34 IL-36
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R459.7;R563.8
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 縮略詞表11-12
• 引言12-14
• 綜述：膿毒癥相關(guān)性肺損傷的作用機(jī)制及研究進(jìn)展14-18
• 第一章 研究材料與方法18-25
• 1.1 病例樣本18-19
• 1.1.1 一般資料18
• 1.1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)18
• 1.1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)18-19
• 1.2 miRNA芯片分析19-23
• 1.2.1 芯片分析試驗(yàn)儀器設(shè)備19
• 1.2.2 芯片分析試驗(yàn)主要試劑19-20
• 1.2.3 芯片分析樣本收集20
• 1.2.4 芯片檢測步驟及分析20-23
• 1.3 TLR4、IL-34、IL-36的ELISA研究方法23-25
• 1.3.1 ELISA試驗(yàn)儀器設(shè)備23
• 1.3.2 ELISA試驗(yàn)主要試劑23
• 1.3.3 ELISA樣本收集23-24
• 1.3.4 ELISA檢測步驟24-25
• 1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法25
• 第二章 研究結(jié)果25-36
• 2.1 miRNA芯片分析結(jié)果25-29
• 2.1.1 芯片樣品的選擇25-27
• 2.1.2 差異性表達(dá)miRNA的散點(diǎn)圖27
• 2.1.3 差異表達(dá)的miRNA分析27-28
• 2.1.4 相關(guān)靶基因及其功能28-29
• 2.2 外周血中TLR4及炎癥因子測定及相關(guān)性分析29-36
• 2.2.1 ELISA法測定TLR4、IL-34、IL-36含量29-33
• 2.2.2 TLR4與IL-34、IL-36的相關(guān)性分析33-35
• 2.2.3 TLR4、IL-34、IL-36在診斷膿毒癥合并ALI中的特異性及敏感性分析35-36
• 第三章 結(jié)論和討論36-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 致謝43-44
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄44

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本文編號：898720