本文關(guān)鍵詞：TREM-2在腹腔感染膿毒癥的作用研究

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【摘要】：目的:探討腹腔感染性膿毒癥中TREM-2(髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體)與Janus激酶-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子(JAK/STAT)通路的關(guān)系。方法:實(shí)驗(yàn)對(duì)象為雄性清潔級(jí)Wistar大鼠,體重304±11g。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分為兩部分:第一部分為腹腔感染性膿毒癥大鼠模型的建立。將80只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(n=8)、假手術(shù)組(n=32)、模型組(CLP組,n=40),模型組采用盲腸結(jié)扎穿孔法[1](Cecal ligation and puncture,CLP)制備腹腔感染性膿毒癥模型;對(duì)照組不作處理;假手術(shù)組僅麻醉和開(kāi)關(guān)腹腔,不行手術(shù)處理。記錄72h死亡情況,采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清、腹引液白細(xì)胞介素(IL)-1、IL-4、IL-6、IL-10濃度變化。第二部分為應(yīng)用JAK2抑制劑AG490和STAT抑制劑雷帕霉素(RPM)干預(yù)后,觀察肝組織TREM-2表達(dá)情況:分為假手術(shù)組(n=24)、CLP組(n=48)、AG490組(n=48)和RPM組(n=48),后2組分別于CLP前0.5h皮下注射AG490 8 mg/kg、RPM 0.4mg/kg,各組于術(shù)后6、24、48、72h從內(nèi)眥靜脈取靜脈血0.3ml后處死動(dòng)物,留取血清、腹引液及肝組織標(biāo)本備用。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清、腹引液白細(xì)胞介素(IL)-1、IL-4、IL-6、IL-10濃度變化;采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)肝組織TREM-2m RNA的表達(dá)。結(jié)果:第一部分:對(duì)照組和假手術(shù)組大鼠隨時(shí)間進(jìn)展生命體征及腹部解剖無(wú)明顯改變。CLP組大鼠術(shù)后72h腹部探查可見(jiàn)多臟器淤血、粘連,回腸組織明顯腫脹,腹腔滲液增多伴惡臭等炎性改變。建模后72h,血液和腹引液中,CLP組IL-1、IL-6和IL-4、IL-10較對(duì)照組和假手術(shù)組均明顯增加(P0.01),說(shuō)明腹腔感染性膿毒癥大鼠模型復(fù)制成功。第二部分:(1)與假手術(shù)組相比,CLP組血清炎癥因子濃度6h即開(kāi)始升高,72h達(dá)高峰(P0.01)。應(yīng)用AG490后,血清炎癥因子濃度6h即開(kāi)始升高,72h達(dá)高峰,較CLP組相比無(wú)差異;RPM組IL-1、IL-4、IL-10的濃度6h最高,隨時(shí)間逐漸降低,且顯著低于相同時(shí)間點(diǎn)CLP組,而6h IL-6的濃度雖較CLP組無(wú)差異,但24h、48h、72h IL-6的濃度較CLP組顯著降低(P0.01)。(2)與假手術(shù)組相比,CLP組腹引液炎癥因子濃度6h即開(kāi)始升高,72h達(dá)高峰(P0.01)。應(yīng)用AG490后,腹引液炎癥因子濃度6h即開(kāi)始升高,72h達(dá)高峰,較CLP組相比無(wú)差異;RPM組,IL-4、IL-10 6h即達(dá)到峰值,隨時(shí)間推進(jìn)呈下降趨勢(shì),與相同時(shí)間點(diǎn)CLP組相比有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,而6h IL-1、IL-6的濃度雖較CLP組無(wú)差異,但24h、48h、72h IL-1、IL-6的濃度較CLP組顯著降低(P0.01)。(3)RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn),CLP組肝組織TREM-2 m RNA的表達(dá)隨時(shí)間逐漸減低;AG490組肝組織TREM-2 m RNA的表達(dá)隨時(shí)間延長(zhǎng)呈降低趨勢(shì),較同時(shí)間點(diǎn)CLP組肝組織TREM-2 m RNA的表達(dá)無(wú)顯著性差異;RPM組肝組織TREM-2 m RNA的表達(dá)雖在6h較CLP組TREM-2 m RNA的表達(dá)減少,但在24、48、72h顯著高于同時(shí)間點(diǎn)CLP組TREM-2 m RNA的表達(dá)(P0.01)。結(jié)論:1.本實(shí)驗(yàn)證實(shí)腹腔感染性膿毒癥時(shí)大鼠肝組織TREM-2表達(dá)顯著降低,而血清及腹引液炎癥因子明顯升高,說(shuō)明TREM-2對(duì)炎癥反應(yīng)的級(jí)聯(lián)擴(kuò)大有限制作用,TREM-2缺乏,導(dǎo)致這種限制作用減弱,炎癥因子大量釋放,加重膿毒癥的進(jìn)展。2.應(yīng)用STAT抑制劑RPM后,TREM-2的表達(dá)明顯增加,炎癥因子釋放減少,提示JAK/STAT通路可能阻礙了TREM-2的表達(dá),抑制STAT能夠上調(diào)TREM-2的表達(dá),從而發(fā)揮其在調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答方面的作用,但具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：膿毒癥 TREM-2 JAK/STAT AG490 RPM CLP
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R459.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明10-11
• 前言11-13
• 研究現(xiàn)狀、成果11-12
• 研究目的、方法12-13
• 一、腹腔感染性膿毒癥大鼠模型的建立13-20
• 1.1 對(duì)象和方法13-16
• 1.1.1 動(dòng)物模型的制備與分組13
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器13-14
• 1.1.3 標(biāo)本收集14
• 1.1.4 觀察指標(biāo)14
• 1.1.5 檢測(cè)方法14-16
• 1.1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法16
• 1.2 結(jié)果16-18
• 1.2.1 各組大鼠一般情況觀察16-17
• 1.2.2 對(duì)照組、假手術(shù)組和CLP組三組血清炎癥因子的比較17-18
• 1.2.3 對(duì)照組、假手術(shù)組和CLP組三組腹引液炎癥因子的比較18
• 1.3 討論18-19
• 1.4 小結(jié)19-20
• 二、TREM-2與JAK/STAT信號(hào)通路關(guān)系的研究20-39
• 2.1 對(duì)象和方法20-30
• 2.1.1 動(dòng)物模型的制備與分組20
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器20-22
• 2.1.3 標(biāo)本收集22-23
• 2.1.4 觀察指標(biāo)23
• 2.1.5 檢測(cè)方法23-30
• 2.1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法30
• 2.2 結(jié)果30-34
• 2.2.1 各組大鼠血清炎癥因子的變化30-31
• 2.2.2 各組大鼠腹引液炎癥因子的變化31-32
• 2.2.3 Real-time PCR檢測(cè)肝組織TREM-2mRNA的表達(dá)32-33
• 2.2.4 Western Blot檢測(cè)肝組織TREM-2蛋白的表達(dá)33-34
• 2.3 討論34-38
• 2.3.1 JAK/STAT信號(hào)通路與膿毒癥34-35
• 2.3.2 TREM-2與膿毒癥35-36
• 2.3.3 TREM-2對(duì)炎癥因子IL-1、IL-4、IL-6、IL-10的影響36-38
• 2.4 小結(jié)38-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明44-45
• 綜述 JAK/STAT、TREM-2與膿毒癥關(guān)系研究進(jìn)展45-54
• 綜述參考文獻(xiàn)51-54
• 致謝54-55
• 個(gè)人簡(jiǎn)介55

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

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本文編號(hào)：829628