本文關鍵詞：福爾馬林和薄荷醇對DRG神經(jīng)元TRPA1和CGRP表達的影響作用及其機制

  更多相關文章： 福爾馬林 薄荷醇 瞬時受體電位錨蛋白1 降鈣素基因相關肽 初級傳入神經(jīng)元 背根神經(jīng)節(jié)

【摘要】：瞬時受體電位錨蛋白1 (transient receptor potential ankyrin 1, TRPA1)是瞬時受體電位(transient receptor potential, TRP)家族的一個成員,是在感受傷害性刺激神經(jīng)元表達的離子通道,可被多個反應性的化合物所激活。最近的研究顯示,福爾馬林(formaldehyde, formalde)可激活TRPA1,而薄荷醇則可抑制TRPA1。降鈣素基因相關肽(calcitonin gene-related peptide, CGRP)是一種在初級傳入神經(jīng)元表達的感覺神經(jīng)肽,其感覺神經(jīng)元的釋放與TRPA1的激活有關。然而,TRPA1的激動劑福爾馬林和TRPA1的抑制劑薄荷醇是否會影響背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglion, DRG)初級傳入神經(jīng)元TRPA1和CGRP的表達,目前并不清楚。因此,本課題利用體外培養(yǎng)的新生大鼠DRG神經(jīng)元,研究福爾馬林和薄荷醇對DRG神經(jīng)元TRPA1和CGRP表達的影響作用,并進一步探討細胞外信號調節(jié)蛋白激酶1/2 (extracellular signal-regulated protein kinase, ERK1/2)信號通路在福爾馬林和薄荷醇對DRG神經(jīng)元TRPA1和CGRP表達所發(fā)揮的作用,以及TRPA1與TRPV1受體在DRG神經(jīng)元原位表達的相互作用關系。DRG神經(jīng)元原代培養(yǎng)48 h后,用于探測TRPA1和CGRP表達的DRG神經(jīng)元,預先用辣椒素受體阻斷劑辣椒平(capsazepine, CPZ,10 μmol/L)孵育30 min,阻斷辣椒素受體瞬時受體電位通道香草醛亞型-1 (transient receptor potential vanilloid typel, TRPV1)的活性,以消除TRPV1有可能對TRPA1產(chǎn)生的影響。之后,在DRG神經(jīng)元原代培養(yǎng)中分別加入福爾馬林(10μmol/L)、薄荷醇(300μmol/L)、ERK1/2抑制劑PD98059 (10 μmol/L)+福爾馬林以及ERK1/2抑制劑PD98059 (10 μmol/L)+薄荷醇,繼續(xù)孵育24 h,對照組的標本僅用CPZ (10μmol/L)孵育。終止培養(yǎng)后,用real-time PCR分析技術檢測TRPA1 mRNA和CGRP mRNA在DRG神經(jīng)元的表達,用Western blot分析技術檢測TRPA1和CGRP蛋白在DRG神經(jīng)元的表達,用TRPA1或CGRP與微管相關蛋白2 (microtubule associated protein 2, MAP2)進行免疫熒光雙標記,檢測TRPA1和CGRP在DRG神經(jīng)元原位的表達。用于探測TRPA1與TRPV1共表達的DRG神經(jīng)元,在正常培養(yǎng)48 h后,分別用福爾馬林(10μmol/L)、薄荷醇(300μmol/L)、ERK1/2抑制劑PD98059(10 μmol/L)+福爾馬林以及ERK1/2抑制劑PD98059 (10 μmol/L)+薄荷醇繼續(xù)孵育24 h,對照組的標本在培養(yǎng)液內(nèi)持續(xù)孵育。終止培養(yǎng)后,用TRPA1與TRPV1免疫熒光雙標記檢測兩種受體在DRG神經(jīng)元的共表達。結果顯示,福爾馬林可促進TRPA1及其mRNA、CGRP及其mRNA的表達、增加TRPA1陽性神經(jīng)元和CGRP陽性神經(jīng)元的比例；而薄荷醇則可抑制TRPA1及其mRNA、 CGRP及其mRNA的表達、降低TRPA1陽性神經(jīng)元和CGRP陽性神經(jīng)元的比例。ERK1/2抑制劑PD98059可以阻斷福爾馬林對CGRP表達的影響,但不能阻斷薄荷醇對CGRP表達的影響；ERK1/2抑制劑PD98059不能阻斷福爾馬林和薄荷醇對TRPA1表達的影響；TRPA1受體和TRPV1受體在相同的DRG神經(jīng)元亞群內(nèi)高度共表達；福爾馬林可提高TRPA1陽性神經(jīng)元在TRPV1陽性神經(jīng)元中所占的比例；薄荷醇可抑制TRPA1陽性神經(jīng)元在TRPV1陽性神經(jīng)元中所占的比例。本課題的研究結果將會對以TRPA1受體和感覺神經(jīng)遞質CGRP作為疼痛靶點的研究增添新的觀點和實驗依據(jù)。
【關鍵詞】：福爾馬林 薄荷醇 瞬時受體電位錨蛋白1 降鈣素基因相關肽 初級傳入神經(jīng)元 背根神經(jīng)節(jié)
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R402
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 符號及縮略語10-11
• 主要試劑及來源11-13
• 主要儀器設備13-14
• 前言14-17
• 材料和方法17-23
• 結果23-34
• 討論34-37
• 結論37-38
• 參考文獻38-45
• 攻讀學位期間發(fā)表論文目錄45-46
• 致謝46-47
• 附件47

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