本文關(guān)鍵詞：成都醫(yī)學(xué)院附一院鮑曼不動桿菌對氨基糖苷類藥物高水平耐藥的流行病學(xué)研究

  更多相關(guān)文章： 鮑曼不動桿菌 氨基糖苷耐藥基因 聚合酶鏈反應(yīng) 整合子 多位點序列分型

【摘要】：目的:了解鮑曼不動桿菌臨床分離株對氨基糖苷類藥物的耐藥情況,檢測5種氨基糖苷修飾酶基因、10種16Sr RNA甲基化酶及整合酶基因在鮑曼不動桿菌中的分布,探討其在介導(dǎo)氨基糖苷類抗菌藥物高水平耐藥中的作用,分析本地區(qū)鮑曼不動桿菌的耐藥機制,為臨床有效預(yù)防和控制耐藥菌在院內(nèi)的感染和播散流行提供實驗室依據(jù),同時也為尋找介導(dǎo)氨基糖苷類耐藥的新基因或新機制提供線索。方法:通過法國生物-梅里埃ATB細菌鑒定儀及16Sr RNA、rec A序列分析法,對臨床分離株進行菌種鑒定;對確證的鮑曼不動桿菌采用瓊脂二倍稀釋法檢測118株臨床分離菌對氨基糖苷類藥物的最低抑菌濃度(Minmal Inhibitory Concentrations MICs):將阿米卡星或慶大霉素MIC≥256μg/ml的菌株定義為高水平耐藥株,用PCR技術(shù)檢測5種修飾酶(ant(2'')-Ia、aac(6')-Ib、aph(3')-Ia、aac(3)-Ia、aac(3)-IIa)基因和10種16Sr RNA甲基化酶(arm A、rmt A、rmt B、rmt C、rmt D、rmt E、rmt F、rmt G、rmt H、npm A)基因,并分析甲基化酶和修飾酶在高水平耐藥株檢出情況。同時對菌株攜帶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ類整合子及Ⅰ類整合子可變區(qū)基因盒進行檢測,將PCR產(chǎn)物電泳觀察其大致大小,并隨機選取2個Ⅰ類整合子基因和若干個Ⅰ類整合子可變區(qū)陽性的PCR產(chǎn)物進行測序分析。統(tǒng)計Ⅰ類整合子陽性率并統(tǒng)計學(xué)分析Ⅰ類整合子陽性株和陰性株對氨基糖苷類藥物的耐藥性差異。應(yīng)用多位點序列分型(MLST)技術(shù),通過雙向測序技術(shù)獲得glt A、gyr B、gdh B、gpi、rec A、rpo D、cpn60 7個管家基因的序列,拼接核對后用e BURST軟件確立序列型(STs),進而對75株氨基糖苷類抗生素高水平耐藥鮑曼不動桿菌分型,分析其發(fā)育進化關(guān)系。結(jié)果:1、118株鮑曼不動桿菌對阿米卡星、慶大霉素、鏈霉素的耐藥率較高,分別為61.08%、61.02%、83.9%,其中有75株對阿米卡星或慶大霉素高水平耐藥;2、氨基糖苷修飾酶基因ant(2'')-Ia、aac(6')-Ib、aph(3')-Ia、aac(3)-Ia、aac(3)-IIa的檢出率依次是66.95%、69.49%、42.37%、39.83%、14.41%。45.76%的菌株(54/118)檢測到arm A,均同時對阿米卡星和慶大霉素高水平耐藥(MIC≥256μg/ml)。其他9種16Sr RNA甲基化酶基因未檢測到。arm A、ant(2'')-Ia、aac(6')-Ib基因陽性株對氨基糖苷類藥物的耐藥率明顯高于陰性株,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.001);3、118株中有116株擴增出Ⅰ類整合子,陽性率為72.88%,Ⅰ類整合子的可變區(qū)檢測到兩類基因盒,分別為dfr A17+aad A5和aac A4+cat B8+aad A1;4、MLST結(jié)果分析顯示75株高水平耐藥鮑曼不動桿菌經(jīng)過e BURST分析后共分為31個STs型,其中21個STs并歸為一個克隆復(fù)合體CC92,其他10個STs被確定為單體。最常見的STs型是ST92,占38.67%(29/75);結(jié)論:1、瓊脂稀釋法能準確的篩選耐氨基糖苷類鮑曼不動桿菌;2、本地區(qū)鮑曼不動桿菌臨床分離株對氨基糖苷類抗生素耐藥率高;3、本研究顯示氨基糖苷類修飾酶基因aac(6')-Ib、ant(2'')-Ia和16Sr RNA甲基化酶arm A基因在氨基糖苷類抗生素高水平耐藥鮑曼不動桿菌中有極高的攜帶率,是整個地區(qū)該菌對氨基糖苷類抗生素產(chǎn)生耐藥性的主要原因;4、整合子檢測結(jié)果表明第Ⅰ類整合子在臨床菌株中分布廣泛,有較高的檢出率,但I類整合子陽性和陰性菌株氨基糖苷類抗生素耐藥性的比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義,推測整合子可能不是導(dǎo)致本院鮑曼不動桿菌對氨基糖苷類抗生素高水平耐藥的主要原因;5、多位點序列分型表明75株高水平耐藥鮑曼不動桿菌由當(dāng)前中國最流行的克隆復(fù)合體CC92進化而來。
【關(guān)鍵詞】：鮑曼不動桿菌 氨基糖苷耐藥基因 聚合酶鏈反應(yīng) 整合子 多位點序列分型
【學(xué)位授予單位】：成都醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R446.5
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-14
• 第一部分 臨床分離鮑曼不動桿菌對氨基糖苷類藥物的耐藥性分析14-20
• 1 引言14
• 2 材料和方法14-18
• 2.1 材料14-15
• 2.2 方法15-18
• 3 結(jié)果18-19
• 3.1 多重PCR鑒定結(jié)果18-19
• 3.2 藥敏結(jié)果19
• 4 討論19
• 5 小結(jié)19-20
• 第二部分 鮑曼不動桿菌耐氨基糖苷類藥物耐藥基因檢測20-37
• 1 引言20
• 2. 材料和方法20-24
• 2.1 材料20-22
• 2.2 方法22-24
• 3 結(jié)果24-33
• 3.1 氨基糖苷類修飾酶基因檢測結(jié)果24-29
• 3.2 氨基糖苷類 16Sr RNA甲基化酶基因檢測結(jié)果29-30
• 3.3 75 株氨基糖苷類藥物高水平耐藥株中修飾酶和 16Sr RNA甲基化酶基因的分布30-33
• 4 討論33-36
• 5 小結(jié)36-37
• 第三部分 鮑曼不動桿菌整合子分布與氨基糖苷類抗生素耐藥相關(guān)研究37-47
• 1 引言37-38
• 2 材料和方法38-40
• 2.1 材料38-39
• 2.2 方法39-40
• 3 結(jié)果40-44
• 4 討論44-46
• 5 小結(jié)46-47
• 第四部分 氨基糖苷類藥物高水平耐藥鮑曼不動桿菌多位點序列分型研究47-57
• 1 引言47-48
• 2 材料和方法48-51
• 2.1 材料48
• 2.2 方法48-51
• 3 結(jié)果51-54
• 3.1 氨基糖苷類藥物高水平耐藥株MLST分型結(jié)果51-52
• 3.2 eBURST分析結(jié)果52-54
• 4 討論54-55
• 5 小結(jié)55-57
• 結(jié)論57-58
• 文獻綜述58-63
• 參考文獻63-69
• 附錄69-70
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果70-71
• 致謝71

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 Ming-Feng Lin;Chung-Yu Lan;;Antimicrobial resistance in Acinetobacter baumannii : From bench to bedside[J];World Journal of Clinical Cases;2014年12期

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 蔡淑靜;鮑曼不動桿菌多重耐藥性與Ⅰ類整合子關(guān)系研究[D];吉林大學(xué);2012年

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本文編號：777131