本文關(guān)鍵詞：氟喹諾酮耐藥志賀菌臨床分離株AcrAB-TolC外排泵表達(dá)水平與耐藥關(guān)系的研究

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【摘要】：目的:鑒定并掌握近七年天津市部分醫(yī)院臨床分離志賀菌株的血清型分布及其主要血清群、型及亞型;分析天津市部分醫(yī)院志賀菌臨床分離株對常用17種抗菌藥物的敏感情況;研究對氟喹諾酮耐藥的志賀菌臨床分離株,其AcrAB-TolC外排泵mRNA水平的表達(dá)與菌株耐藥程度的相關(guān)性。方法:2009年-2015年,本研究所于天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院、天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院、天津市兒童醫(yī)院三家三甲醫(yī)院腸道門診非重復(fù)患者糞便收集獲得的志賀菌臨床株。1、采用生化鑒定及血清凝集法,對所收集的菌株進(jìn)行種(屬)鑒定并確定血清群(型),明確近七年天津部分醫(yī)院志賀菌臨床株流行的主要血清型。2、利用萘啶酸、亞胺培南、頭孢他啶等17種抗菌藥物進(jìn)行K-B紙片擴(kuò)散實驗,檢測志賀菌臨床分離株的藥物敏感水平;通過包括萘啶酸、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、氧氟沙星和諾氟沙星在內(nèi)的5種抗生素篩選多重氟喹諾酮耐藥(對3種或者3中以上的氟喹諾酮類抗生素耐藥)菌株,共計9株命為耐藥組,其菌株編號依次為:F2、N8、F44、157、187、368、1113、3171、3327;隨機(jī)挑選氟喹諾酮敏感菌株,9株命為敏感組,其菌株編號依次為:F13、1、22、174、186、377、1506、3283、3326。3、對上述耐藥組與敏感組志賀菌株,借用三步法進(jìn)行實時熒光定量RT-PCR實驗,檢測AcrAB-TolC外排泵基因mRNA水平的表達(dá)量,并使用SPSS17.0軟件對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果:1、菌株分型:經(jīng)常規(guī)生物化學(xué)、血清凝集實驗鑒定,192株志賀菌臨床分離株中,宋內(nèi)志賀菌(D群)98株(51%);福氏志賀菌(B群),83株(43%);鮑氏志賀菌(C群)和痢疾桿菌(A群)分別為9株和2株。2、藥物敏感試驗:192株志賀菌臨床分離株的多重耐藥率達(dá)95%。對第一代喹諾酮類(萘啶酸)耐藥率為97%,對于其他抗生素的耐藥率降低。其中,四環(huán)素、氨芐西林及復(fù)方新諾明的耐藥率依次為78%、77%、73%。對三代頭孢菌素的耐藥率較低(小于5%),且未見頭孢哌酮舒巴坦以及亞胺培南耐藥菌株。3、實時熒光定量RT-PCR:耐藥組中acrA基因的mRNA表達(dá)水平高于敏感組志賀菌株,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);耐藥組中acrB、tolC基因的mRNA表達(dá)水平均值高于敏感組志賀菌株,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:2009年-2015年天津市三家三甲醫(yī)院臨床分離志賀菌株主要血清型為宋內(nèi)志賀菌,其次為福氏志賀菌;2015年分離的鮑氏志賀菌和痢疾志賀菌株依次為9株、2株。志賀菌株對臨床17種抗生素耐藥率較高,多重耐藥菌株比例高達(dá)95%,對氨芐西林、四環(huán)素及復(fù)方新諾明的耐藥率較高,均超過70%。志賀菌臨床分離株氟喹諾類抗菌藥物的耐藥性與細(xì)菌AcrAB-TolC外排泵三個組成基因(acrA、acrB、tolC)mRNA表達(dá)量的增高有一定關(guān)系。
【關(guān)鍵詞】：志賀菌屬 氟喹諾酮耐藥 AcrAB-TolC外排泵 實時熒光定量RT-PCR
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R446.5
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-17
• 研究現(xiàn)狀、成果11-16
• 研究目的、方法16-17
• 一、志賀菌臨床分離株的血清型鑒定及藥物敏感性分析17-30
• 1.1 對象和方法17-21
• 1.1.1 實驗材料17
• 1.1.2 試劑與耗材17-19
• 1.1.3 試驗方法19-21
• 1.2 結(jié)果21-25
• 1.2.1 志賀菌株鑒定21-23
• 1.2.2 藥物敏感試驗結(jié)果23-25
• 1.3 討論25-29
• 1.3.1 志賀菌臨床分離株血清學(xué)特點25-27
• 1.3.2 志賀菌臨床分離株耐藥性特點27-29
• 1.4 小結(jié)29-30
• 二、Acr AB-TolC外排泵的表達(dá)與氟喹諾酮耐藥性的研究30-45
• 2.1 材料與方法30-37
• 2.1.1 實驗材料30-32
• 2.1.2 實驗方法32-37
• 2.2 實驗結(jié)果37-41
• 2.2.1 總RNA的提取結(jié)果37
• 2.2.2 熒光定量擴(kuò)增曲線37-38
• 2.2.3 熒光定量融解曲線38
• 2.2.4 實時熒光定量PCR結(jié)果38-41
• 2.3 討論41-44
• 2.4 小結(jié)44-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-56
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明56-57
• 綜述 致病微生物中外排泵結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制的研究57-74
• 綜述參考文獻(xiàn)64-74
• 致謝74-75
• 個人簡歷75

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本文編號：772909