本文關(guān)鍵詞：下丘腦弓狀核Src酪氨酸蛋白激酶參與外周炎癥痛的研究

  更多相關(guān)文章： 下丘腦ARC 外周炎癥痛 CFA大鼠 NMDA受體 NR2B亞單位 Src 慢病毒

【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)旨在研究外周炎癥時(shí),通過改變下丘腦弓狀核(hypothalamic arcuate nucleus,ARC)區(qū)的Src酪氨酸蛋白激酶的表達(dá),觀察NMDA受體(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR)的NR2B亞單位及相關(guān)信號(hào)分子如PKC、PKA、CaMKII的變化,探討Src對(duì)外周炎癥引起的痛覺過敏的影響。方法:用完全弗氏佐劑(Complete Freund's Adjuvant,CFA)建立大鼠外周炎癥模型;用Von Frey(VFF)法和熱輻射-縮腿法測(cè)定大鼠痛閾變化;用轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)(rota-rod test)測(cè)定大鼠的運(yùn)動(dòng)功能變化;用Western Blot方法檢測(cè)ARC區(qū)域NR2B,pNR2B(Y1472),Src,pSrc(Y416),PKA,PKCγ,pCa MKIIα(T286)的蛋白表達(dá);ARC內(nèi)微量注射NMDA受體抑制劑MK-801、含NR2B的NMDA受體抑制劑ifenprodil、PKC抑制劑chelerythrine、Src抑制劑PP2或Src小發(fā)夾結(jié)構(gòu)RNA(sh RNA)慢病毒,觀察CFA炎癥大鼠蛋白表達(dá)變化以及對(duì)大鼠痛覺過敏的影響。結(jié)果:1、CFA炎癥大鼠在造模后1、3、5、7、14天痛閾顯著低于對(duì)照組大鼠(P0.05或0.001),表現(xiàn)為熱輻射縮腿潛伏期縮短和VFF縮腿閾值降低,即出現(xiàn)痛覺過敏。2、與造模前比較,注射CFA后的1、3、7、14天,ARC組織內(nèi)的Src和NR2B無論是蛋白總量還是磷酸化水平都明顯升高(P0.05),PKCγ表達(dá)亦明顯升高(P0.05);pCaMKIIα表達(dá)在1、3、7天明顯下降(P0.05);PKA表達(dá)無明顯變化(P0.05)。3、在造模后7天的大鼠ARC內(nèi)分別微量注射MK-801,ifenprodil,chelerythrine,或PP2,機(jī)械痛閾與熱痛閾均較對(duì)照組有不同程度的反轉(zhuǎn),在20min或30min時(shí)間點(diǎn)作用最大(P0.05,0.01或0.001)。4、Src慢病毒下調(diào)外周炎癥大鼠ARC內(nèi)Src、pSrc的蛋白表達(dá)(P0.05,0.01或0.001);造模后3天,Src慢病毒組(LV-sh-src+CFA組)的NR2B、pNR2B、PKCγ蛋白表達(dá)較對(duì)照組(na?ve+CFA組或LV-sh-NC+CFA組)出現(xiàn)顯著下降(P0.05或0.01);造模后7天,Src慢病毒組的pNR2B蛋白表達(dá)仍較對(duì)照組明顯下降(P0.05或0.001);造模后14天,Src慢病毒組的NR2B、pNR2B、PKCγ表達(dá)與對(duì)照組比較雖仍呈下降趨勢(shì)但已沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Src慢病毒組的PKA、p CaMKIIα表達(dá)與對(duì)照組相比,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5、大鼠ARC內(nèi)感染Src慢病毒后,對(duì)外周炎癥誘發(fā)的機(jī)械痛敏有顯著影響,即造模后3、7、14天Src慢病毒組的機(jī)械痛閾與空載對(duì)照組相比顯著升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Src慢病毒組的熱痛敏亦發(fā)生改變,即造模后3、14天Src慢病毒組的熱痛閾升高,與空載對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:(1)ARC內(nèi)的NR2B、蛋白激酶Src和PKC參與了大鼠外周炎癥導(dǎo)致痛覺過敏的調(diào)節(jié)。(2)抑制ARC內(nèi)Src的蛋白表達(dá)可以使NR2B和PKC的蛋白表達(dá)及活性都減弱,從而提示Src通過NR2B參與了ARC對(duì)外周炎癥痛覺過敏的調(diào)節(jié),并起著重要的作用。
【關(guān)鍵詞】：下丘腦ARC 外周炎癥痛 CFA大鼠 NMDA受體 NR2B亞單位 Src 慢病毒
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R402
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-12
• 實(shí)驗(yàn)材料及方法12-21
• 一、實(shí)驗(yàn)材料12-14
• 二、實(shí)驗(yàn)方法14-21
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-44
• 一、外周炎癥誘發(fā)大鼠痛覺過敏21-23
• 二、下丘腦弓狀核中NMDA受體亞單位NR2B及蛋白激酶的表達(dá)23-25
• 三、下丘腦弓狀核給予NMDA受體拮抗劑及蛋白激酶抑制劑對(duì)外周炎癥痛大鼠痛覺過敏的影響25-31
• 四、下丘腦弓狀核慢病毒干擾Src酪氨酸蛋白激酶的表達(dá)對(duì)NR2B、蛋白激酶表達(dá)及對(duì)炎癥大鼠痛覺過敏的影響31-44
• 討論44-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-56
• 文獻(xiàn)綜述56-71
• 參考文獻(xiàn)63-71
• 相關(guān)試劑成分及配制方法71-74
• 縮略詞及中英文名對(duì)照表74-76
• 致謝76-78

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