發(fā)布時間：2017-08-31 08:45

  本文關鍵詞：LXRs活化轉錄后調控THP-1巨噬細胞炎性細胞因子mRNA降解及其機制

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【摘要】：肝X受體(Liver X Receptors,LXRs)具有廣譜抗炎特性,然而LXRs是否在轉錄后水平調控炎性細胞因子表達尚未闡明。mRNA降解調控是轉錄后調控基因表達的重要方式之一,AREs(AU-rich elements)介導的mRNA降解是炎性細胞因子m RNA代謝的一個共有方式。Tristetraprolin(TTP)作為一種典型的ARE結合蛋白,參與調控多種細胞因子mRNA降解。為闡明LXRs是否通過調控炎性細胞因子mRNA降解發(fā)揮抗炎特性,本研究通過體外細胞實驗探討LXRs在轉錄后水平調控基因表達的作用及機制。方法:佛波酯誘導THP-1單核細胞分化為巨噬細胞,LXRs激動劑T0901317(10μM)預處理THP-1巨噬細胞6h后,予以脂多糖(10ng/mL)刺激6h,利用ELISA、PCR、Western Blot等技術檢測TNF-α、IL-6、IL-1β和TTP mRNA及蛋白表達水平。不同因素處理組的THP-1巨噬細胞加入5ug/mL放線菌素D(Actinomycin D,Act D)終止轉錄,阻斷轉錄后的不同時間點提取RNA,利用實時熒光定量PCR技術不同時間段TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA的表達水平,以阻斷轉錄初始mRNA為標準計算mRNA殘留比例。通過小分子siRNA技術進行細胞轉染18h后,Western blot、ELISA檢測TTP siRNA沉默TTP表達效果和炎性細胞因子表達影響,實時熒光定量PCR檢測不同處理因素組炎性細胞因子mRNA表達水平。結果:T0901317預處理顯著抑制脂多糖誘導的THP-1巨噬細胞IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA及蛋白表達,且T0901317預處理顯著上調LPS誘導的THP-1巨噬細胞TTP表達。放線菌素D阻斷轉錄后60,90,120min時間點,T0901317預處理的THP-1巨噬細胞顯著抑制LPS誘導的TNF-α,IL-6,IL-1βm RNA表達水平,殘留比例顯著低于單純LPS處理組,說明T0901317預處理促使LPS誘導的TNF-α,IL-6,IL-1βmRNA降解。TTP siRNA轉染的THP-1巨噬細胞顯著下調TTP的表達,并明顯抑制T0901317下調炎性細胞因子表達和促進炎性細胞因子mRNA降解的作用。結論:1.LXRs活化轉錄后調控THP-1巨噬細胞炎性細胞因子mRNA降解。2.LXRs通過TTP促使LPS誘導的THP-1巨噬細胞炎性細胞因子mRNA降解。本研究明確了LXRs轉錄后調控炎癥反應的新型分子機制,為多靶點廣譜抗炎治療全身炎癥反應綜合征等急慢性炎癥性疾病開拓新思路,為抗炎藥物開發(fā)提供新靶點。
【關鍵詞】：肝X受體 mRNA降解 Tristetraprolin 炎性細胞因子
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R459.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 縮略詞表9-13
• 第一部分 LXRs活化對LPS誘導的THP-1巨噬細胞炎性細胞因子mRNA降解的影響13-33
• 1.前言13-15
• 2.實驗材料15-17
• 3.實驗方法17-23
• 4.實驗結果23-27
• 5 討論27-31
• 6 小結31-33
• 第二部分 LXRs活化促使炎性細胞因子mRNA降解的相關分子機制33-47
• 1.前言33-35
• 2.實驗材料35
• 3.實驗方法35-37
• 4.實驗結果37-43
• 5討論43-47
• 結論47-49
• 參考文獻49-53
• 介導mRNA降解的轉錄后調控炎癥反應機制及進展 綜述53-61
• 參考文獻57-61
• 作者攻讀學位期間的科研成果61-63
• 課題資助63-65
• 致謝65

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前1條

1 李濤;向蕾;涂劍;;肝X受體——膽固醇逆轉運與炎癥的共同平臺[J];中國動脈硬化雜志;2014年04期

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本文編號：764624