本文關鍵詞：PDTC阻斷炎癥通路減輕大鼠放射性心臟損傷的機制研究

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【摘要】：目的:建立急性放射性心臟損傷(radiation induced heart damage,RIHD)大鼠模型,觀察RIHD急性期心肌組織病理學變化,探討其發(fā)生機制并研究吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)對RIHD的保護作用及作用機制。方法:成年雄性Sprague-Dawlay(SD)大鼠21只隨機分為三組(n=7):空白對照組(Control組)、單純照射組(Irradiation,IR組)和PDTC+照射組(PDTC+IR組)。1照射處理:單純照射組及PDTC+照射組大鼠接受心前區(qū)局部20.0Gy單次劑量照射,直線加速器下6 MV-X線,2.0 x 2.0 cm大小射野,深度1.5 cm,劑量率1.8 Gy/min;2 PDTC處理:照射前大鼠稱重,計算PDTC給藥量(120mg/kg),PDTC+照射組大鼠在照射前30min腹腔注射PDTC,之后每天同一時間給藥1次,直至照射后第14天。同時空白對照組及單純照射組每天給予相應體積生理鹽水腹腔注射。3形態(tài)學觀察:放射線照射后第14天處死動物進行心肌組織病理切片染色。蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色觀察大鼠心肌細胞、成纖維細胞及細胞間質形態(tài)學改變。Masson染色觀察心肌膠原纖維表達及分布情況,應用軟件定量分析以評價心肌纖維化程度。4生物化學檢測:放射線照射后第14天處死動物進行蛋白質免疫印記法(Western blot)及實時熒光定量聚合酶鏈式反應(quantitative real-time polymerase chain reaction,q PCR)法分別檢測大鼠心肌組織核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)家族成員P50、P65,低氧誘導因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)、結締組織生長因子(connective tissue growth factor,CTGF)、Ⅰ型膠原(collagen typeⅠ,COL-1)蛋白及m RNA表達量的變化。結果:1形態(tài)學結果:(1)石蠟切片HE染色:單純照射組與空白對照組相比,心肌細胞水腫明顯,排列紊亂,部分心肌細胞斷裂;心肌細胞核輕度固縮,核染色加深,少量異形細胞核,心肌間質可見大量炎癥細胞浸潤,成纖維細胞增多。PDTC藥物干預后再進行照射上述損傷變化均得到改善。(2)Masson染色及定量分析:單純照射組膠原纖維被染為藍綠色,廣泛分布于心肌細胞間質,較對照組明顯增多,正常心肌細胞排列紊亂,有被膠原纖維替代的趨勢。定量分析單純照射組心肌膠原容積分數(collagen volume fraction,CVF)明顯高于對照組(P0.05);PDTC處理后再照射CVF下降(P0.05)。2 Western blot和q PCR結果:(1)心肌組織P50、P65蛋白表達及m RNA水平單純照射組較對照組均升高(均P0.05),PDTC+照射組較單純照射組下降(均P0.05);(2)心肌組織HIF-1α蛋白濃度及m RNA水平單純照射組較對照組均升高(均P0.05),PDTC+照射組較單純照射組下降(均P0.05);(3)心肌組織CTGF蛋白濃度及m RNA水平單純照射組較對照組均升高(均P0.05),PDTC+照射組較單純照射組均為有下降趨勢,但差異無統(tǒng)計學意義(均P0.05);(4)心肌組織COL-1蛋白單純照射組較對照組升高(P0.05),PDTC+照射組較單純照射組下降(P0.05);COL-1m RNA水平單純照射組較對照組升高(P0.05),PDTC+照射組較單純照射組有下降趨勢,但差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:1放射線照射早期可引起心肌細胞炎癥,啟動NF-κB炎癥反應調控通路,組織形態(tài)學表現為心肌細胞水腫,細胞間質大量炎癥細胞浸潤;2放射線照射早期可引起心肌細胞纖維化,組織形態(tài)學表現為細胞間質成纖維細胞增多,膠原纖維增多;3放射線照射可引起HIF-1α、CTGF在蛋白和基因水平表達上調,其可能與心肌炎癥及纖維化相關,在急性放射性心臟損傷過程中起到重要作用;4 PDTC能夠抑制NF-κB炎癥通路的過度激活,減輕急性放射性心肌炎癥及纖維化,同時下調HIF-1α的表達,提示可能通過抑制炎癥通路,進而抑制HIF-1α轉錄,使急性放射性心臟損傷在一定程度上得到改善。
【關鍵詞】：放射性心臟損傷 P50 P65 核因子-κB 吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽 實時熒光定量聚合酶鏈式反應 低氧誘導因子-1α 結締組織生長因子
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R730.55
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-20
• 結果20-22
• 附圖22-30
• 討論30-34
• 結論34-35
• 參考文獻35-38
• 綜述 放射性心肌纖維化分子生物學機制研究進展38-50
• 參考文獻45-50
• 致謝50-51
• 個人簡歷51

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