本文關(guān)鍵詞：低頻超聲聯(lián)合多西他賽對(duì)小鼠乳腺癌移植瘤模型療效評(píng)估及相關(guān)機(jī)制的初步研究

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【摘要】：背景及目的:目前,乳腺癌是威脅著全世界女性生命健康的最常見的惡性腫瘤之一,它發(fā)展迅速,容易產(chǎn)生轉(zhuǎn)移,且發(fā)生因素非常復(fù)雜,與環(huán)境、遺傳、生活方式等都有著緊密的相關(guān)性,嚴(yán)重影響了女性的生活質(zhì)量。據(jù)統(tǒng)計(jì),每年在全部因惡性腫瘤死亡的女性中有約13%左右的女性是因乳腺癌而死亡。再者,世界范圍內(nèi)乳腺癌發(fā)生率呈逐年遞增趨勢(shì),患病人群也趨于年輕化[1]。臨床醫(yī)學(xué)等各領(lǐng)域?qū)ζ錂C(jī)制、治療方法及藥物研究不曾間斷。目前對(duì)乳腺癌的治療主要包括化學(xué)藥物治療、放射治療、內(nèi)分泌治療及手術(shù)切除。但是對(duì)于乳腺癌晚期的病人,已經(jīng)喪失了手術(shù)機(jī)會(huì),而內(nèi)分泌治療對(duì)三陰性乳腺癌患者無效,同時(shí)放射治療不能選擇性的殺滅腫瘤細(xì)胞,它在殺死腫瘤組織的同時(shí)破壞腫瘤周圍的正常細(xì)胞及組織,嚴(yán)重者甚至?xí)斐苫颊吖撬枰种频萚2]。故一般多采用化療藥物治療。但是化療藥物對(duì)腫瘤的敏感度低,再者藥物的耐藥性及對(duì)身體的損害一直是擺在臨床醫(yī)生及病人面前的巨大的障礙。基于以上因素,急需要新的安全有效的治療方法來提高晚期乳腺癌患者的生存期及生活質(zhì)量。低頻超聲是一種機(jī)械波,因?yàn)槠涮攸c(diǎn)為頻率較低,波長長、強(qiáng)度不高、故容易穿透組織被組織吸收的少,故而對(duì)正常組織損傷小。低頻超聲與組織的主要生物學(xué)效應(yīng)有機(jī)械效應(yīng)、空化效應(yīng)、熱效應(yīng)及化學(xué)效應(yīng)等,其中空化效應(yīng)對(duì)腫瘤的治療是現(xiàn)階段的一個(gè)研究熱點(diǎn)�？栈�(yīng)即存在于液體中的微小氣泡在超聲波的作用下發(fā)生振動(dòng),當(dāng)超聲波能量達(dá)到一個(gè)閾值時(shí),微小氣泡快速發(fā)生膨脹、收縮、崩潰閉合等一系列變化的動(dòng)力學(xué)過程,且同時(shí)釋放巨大能量[3]。國內(nèi)外研究顯示利用低頻超聲的空化效應(yīng)可以破壞腫瘤血管,而血管是腫瘤生長及轉(zhuǎn)移的必要條件。另外低頻超聲可以增加細(xì)胞膜的通透性提高細(xì)胞藥物濃度,提高藥物利用率,降低毒副作用從而抑制腫瘤的生長。隨著對(duì)低頻超聲的不斷探索研究,低頻超聲作為一種新型腫瘤治療的手段,越來越被國內(nèi)外認(rèn)可,但是大都尚處于實(shí)驗(yàn)室階段[4]。之前國內(nèi)外研究多局限于低頻超聲對(duì)腫瘤細(xì)胞干預(yù)治療,如前列腺癌細(xì)胞、大腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞、肝癌細(xì)胞等,但是對(duì)實(shí)體腫瘤的研究較少[5-7]。眾所周知,血管在乳腺癌的生長及侵襲等方面扮演著著非常重要的角色。同時(shí)紫杉醇類化療藥多西他賽是乳腺癌晚期治療的主要化療藥物,可以提高患者的生存期,但是仍不能避免的產(chǎn)生耐藥而影響治療效果。故本研究通過對(duì)建立的Balb/c小鼠4T1乳腺癌移植瘤模型進(jìn)行低頻超聲及多西他賽等不同的干預(yù)措施,評(píng)價(jià)小鼠乳腺移植瘤的體積變化、分析腫瘤微血管密度(MVD)及與侵襲性、血管生成相關(guān)的蛋白(VEGF、MMP-9、Notch1)表達(dá)情況及MVD與蛋白之間的關(guān)聯(lián)性,從而探討低頻超聲對(duì)小鼠移植瘤的療效及相關(guān)治療機(jī)制,及低頻超聲是否能增強(qiáng)紫杉醇類化療藥多西他賽對(duì)Balb/c小鼠4T1乳腺移植瘤的治療效果。方法:1、小鼠乳腺癌4T1細(xì)胞的培養(yǎng):置于恒溫37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞增殖達(dá)到培養(yǎng)瓶底面積的85%-95%時(shí),根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行重懸傳代或凍存。2、Balb/c小鼠4T1乳腺癌移植瘤模型的建立:注射4T1細(xì)胞懸液至Balb/c小鼠左側(cè)第二對(duì)乳腺脂肪墊下(0.3ml/只)。6-8天后成瘤。3、分組:將成瘤小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、多西他賽組、低頻超聲組、聯(lián)合組(低頻超聲治療+多西他賽);后兩組小鼠進(jìn)行低頻超聲治療前30min腹腔注射5%的水合氯醛(0.004ml/g)麻醉。4、記錄小鼠的質(zhì)量變化及計(jì)算各組小鼠移植瘤體積及各組小鼠移植瘤的抑瘤率(Tumor inhibition rate,TIR)。5、標(biāo)本處理:成瘤小鼠治療5次后,采用頸椎脫位法將其處死,完整解剖出乳腺腫瘤組織。采用Western blot檢測(cè)各組小鼠移植瘤組織中的VEGF、MMP-9、Notch1等蛋白表達(dá)量,采用免疫熒光法檢測(cè)CD34蛋白標(biāo)記的腫瘤血管計(jì)算腫瘤微血管密度(MVD)。結(jié)果:1小鼠質(zhì)量變化及各組小鼠移植瘤體積及抑瘤率對(duì)照組、多西他賽組、低頻超聲組、聯(lián)合組四組小鼠均日益消瘦,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。對(duì)照組、多西他賽組、低頻超聲組、聯(lián)合組腫瘤體積(mm3)分別為:2192±341、1603±336、1211±289、975±106,總體差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);多西他賽組較對(duì)照組、低頻組較多西他賽組、聯(lián)合組較低頻超聲組體積小,差異均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);對(duì)照組、多西他賽組、低頻超聲組、聯(lián)合治療組抑瘤率(%)分別為:0、28.5±12.4、45.6±10.1、55.6±4.3,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);低頻超聲及聯(lián)合組抑瘤率較多西他賽組高,差異存在顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),聯(lián)合治療組較低頻超聲組抑瘤率高,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2 Western blot結(jié)果2.1 MMP-9、VEGF表達(dá)情況對(duì)照組、多西他賽組、低頻超聲組、聯(lián)合組間總體差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其中多西他賽組較對(duì)照組表達(dá)水平低,但此差異不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),低頻超聲組較多西他賽組、聯(lián)合組較低頻超聲組表達(dá)水平低,且差異均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.2 Notch-1表達(dá)情況對(duì)照組、多西他賽組、低頻超聲組、聯(lián)合組間總體存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);其中多西他賽組較對(duì)照組Notch-1表達(dá)水平低,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),低頻超聲組較多西他賽組、聯(lián)合組較低頻超聲組Notch-1表達(dá)水平低,并且差異均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3組織免疫熒光法檢查CD34標(biāo)記的腫瘤血管密度(MVD)對(duì)照組、多西他賽組、低頻超聲組、聯(lián)合組微血管密度差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);其中多西他賽組較對(duì)照組水平低,但差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),低頻超聲較多西他賽組、聯(lián)合組較低頻超聲組水平低,并且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4 MVD、VEGF、MMP-9、Notch1蛋白表達(dá)關(guān)系CD34標(biāo)記的MVD與VEGF、-9、Notch1蛋白表達(dá)量呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)r依次為0.809、0.723、0.856(P0.05);VEGF與MMP-9、Notch1蛋白表達(dá)成正相關(guān),相關(guān)系數(shù)r分別為0.803、0.810(P0.05);MMP-9與Notch1蛋白表達(dá)量呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)r=0.715(P0.05)。結(jié)論:1、低頻超聲能抑制腫瘤體積的生長,顯著降低VEGF、MMP-9、Notch1蛋白的表達(dá),抑制腫瘤微血管的形成從而達(dá)到降低腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移、侵襲性效果。2、多西他賽具有抑制腫瘤生長,降低VEGF、MMP-9、Notch1蛋白的表達(dá),抑制腫瘤微血管的形成的作用,但效果均有限。3、低頻超聲與多西他賽聯(lián)合,較單獨(dú)使用多西他賽、低頻超聲在抑制VEGF、MMP-9、Notch1蛋白的表達(dá),抑制腫瘤微血管的形成方面效果得到增強(qiáng)。4、CD34標(biāo)記的MVD、VEGF、MMP-9及Notch1等蛋白表達(dá)各組指標(biāo)兩兩間均存在正相關(guān)的關(guān)系,提示低頻超聲作用于腫瘤組織時(shí)可通過Notch信號(hào)通路、VEGF通路、MMP-9間的協(xié)同作抑制腫瘤的生長,轉(zhuǎn)移。
【關(guān)鍵詞】：乳腺癌 低頻超聲 多西他賽
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.9;R445.1;R-332
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-13
• 英漢縮略名詞對(duì)照表13-14
• 引言14-17
• 材料與方法17-26
• 結(jié)果26-29
• 討論29-37
• 附圖37-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-47
• 綜述 低頻超聲對(duì)腫瘤的治療研究進(jìn)展47-55
• 參考文獻(xiàn)53-55
• 附錄55-59
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷及研究生期間發(fā)表的文章59-60
• 致謝60

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本文編號(hào)：730460