發(fā)布時(shí)間：2017-08-21 08:45

  本文關(guān)鍵詞：超聲輻照載多西紫杉醇微泡對(duì)人肝癌細(xì)胞MHCC97-H的促凋亡作用及PCNA表達(dá)的研究

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【摘要】：第一部分超聲輻照載多西紫杉醇微泡對(duì)肝癌細(xì)胞MHCC97-H的促凋亡作用及機(jī)制目的探討超聲輻照載多西紫杉醇微泡誘導(dǎo)人高轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞MHCC97-H凋亡的影響及其作用過(guò)程細(xì)胞凋亡的機(jī)制,為肝癌臨床分子靶向治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法將人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞MHCC97-H隨機(jī)分為四組:對(duì)照組(CON)、載多西紫杉醇微泡組(DM)、超聲輻照組(US)、超聲輻照載多西紫杉醇微泡組(DM+US)。分別采用MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞存活率、倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況,凋亡試劑盒檢測(cè)細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)變化情況,細(xì)胞免疫熒光法、流式細(xì)胞儀檢測(cè)增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)蛋白的表達(dá),Western-blot檢測(cè)MAPK通路蛋白及PCNA蛋白的表達(dá)。結(jié)果24 h后,MTT法顯示DM組、US組、DM+US組細(xì)胞存活率分別為(76.0±3.0)%、(73.0±5.0)%和(52.0±6.0)%,DM+US組降低最明顯;倒置顯微鏡下觀察CON組腫瘤細(xì)胞形態(tài)大小正常,生長(zhǎng)旺盛,而DM組、US組、DM+US組細(xì)胞數(shù)量均有減少,細(xì)胞間隙增加,形態(tài)不規(guī)則,部分細(xì)胞脫落懸浮在培養(yǎng)液中,DM+US組改變更明顯;流式細(xì)胞儀顯示DM+US組細(xì)胞凋亡率為(26.81±2.82)%,與CON組(2.90±0.99)%比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);凋亡試劑盒檢測(cè)可見DM+US組多種凋亡蛋白表達(dá)變化:Caspase-3、c IAP-1、SMAC和HSP70等;細(xì)胞免疫熒光法、流式細(xì)胞儀檢測(cè)PCNA蛋白的表達(dá)均顯示DM+US組PCNA蛋白表達(dá)降低;蛋白免疫印跡法顯示DM+US組細(xì)胞p-ERK 1/2蛋白表達(dá)水平增多,p-p38蛋白表達(dá)下降,PCNA蛋白表達(dá)降低。結(jié)論超聲輻照載多西紫杉醇微泡通過(guò)影響ERK 1/2和p 38信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,調(diào)節(jié)PCNA等相關(guān)蛋白的表達(dá)而誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞MHCC 97-H的凋亡。第二部分超聲輻照載多西紫杉醇微泡對(duì)肝癌細(xì)胞裸鼠成瘤的影響以及PCNA的表達(dá)目的本實(shí)驗(yàn)通過(guò)超聲輻照載多西紫杉醇微泡對(duì)人肝癌細(xì)胞MHCC97-H裸鼠皮下荷瘤成瘤情況以及增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)表達(dá)的影響,為超聲載藥治療肝癌提供新的研究思路。方法建立人肝癌細(xì)胞MHCC97-H裸鼠皮下荷瘤模型并治療,觀察裸鼠生長(zhǎng)情況,30天后處死裸鼠,分析裸鼠體重增長(zhǎng),取出腫瘤組織,HE染色、透射電鏡觀察腫瘤組織細(xì)胞形態(tài),免疫組化檢測(cè)PCNA蛋白的表達(dá)情況,并采用圖像分析測(cè)定光密度值。結(jié)果成功建立了人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞MHCC97-H裸鼠荷瘤模型,成瘤率100%。經(jīng)HE染色病理觀察證實(shí)為肝癌,實(shí)驗(yàn)組裸鼠生長(zhǎng)狀態(tài)良好,未見明顯異常活動(dòng);裸鼠體重變化DM+US組與CON組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);HE染色和透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)表明DM+US組腫瘤組織內(nèi)細(xì)胞密度減少,細(xì)胞明顯凋亡;免疫組化檢測(cè)了裸鼠腫瘤組織內(nèi)PCNA蛋白的表達(dá),DM+US組光密度值為(69.42±16.72),CON組為(109.76±15.37),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論超聲輻照載多西紫杉醇微泡對(duì)人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞MHCC97-H荷瘤裸鼠體內(nèi)成瘤有明顯的抑制作用,并抑制了PCNA蛋白的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：微泡 肝癌 凋亡 MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 微泡 肝癌 超聲 PCNA
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7;R445.1
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-14
• 文獻(xiàn)回顧14-24
• 第一部分 超聲輻照載多西紫杉醇微泡對(duì)人肝癌細(xì)胞MHCC97-H的促凋亡作用及機(jī)制24-41
• 0 引言24
• 1 材料24-27
• 2 方法27-31
• 3 結(jié)果31-37
• 4 討論37-41
• 第二部分 超聲輻照載多西紫杉醇微泡對(duì)肝癌細(xì)胞裸鼠成瘤的影響以及PCNA的表達(dá)41-53
• 0 引言41
• 1 材料41-43
• 2 方法43-46
• 3 結(jié)果46-50
• 4 討論50-53
• 小結(jié)53-54
• 參考文獻(xiàn)54-62
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果62-64
• 致謝64

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本文編號(hào)：711935