發(fā)布時間：2017-08-21 01:08

  本文關(guān)鍵詞：外源性一氧化碳釋放分子（CORM-2）對脂多糖刺激后中性粒細(xì)胞功能的調(diào)控作用及分子機(jī)制

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【摘要】：背景與目的膿毒癥(Sepsis)是主要由各種單一或混合型感染引起的一種全身性炎癥反應(yīng)綜合癥,膿毒癥發(fā)生發(fā)展嚴(yán)重時可以導(dǎo)致多器官功能的衰竭、膿毒性休克甚至死亡。關(guān)于膿毒癥的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜,至今尚未闡明,在膿毒癥發(fā)生的早期,機(jī)體感染部位可以迅速招募大量中性粒細(xì)胞,這些招募來的中性粒細(xì)胞可以通過吞噬病原微生物、脫顆粒釋放各種蛋白酶等物質(zhì)來達(dá)到殺滅細(xì)菌的作用。脂多糖(LPS)是革蘭氏陰性桿菌細(xì)胞壁的重要組成成分,是革蘭氏陰性桿菌所致的膿毒癥時最重要的致病成分。作為外源性刺激因子LPS刺激中性粒細(xì)胞可以促進(jìn)其釋放大量的IL-6、白細(xì)胞三烯B4、活性氧的炎性介質(zhì),且LPS刺激的中性粒細(xì)胞可以在遠(yuǎn)處器官大量的浸潤,而這是膿毒癥時SIRS以遠(yuǎn)處器官損傷的重要原因。一氧化碳(CO)是一種無色無味的有毒氣體,前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,CORM-2釋放的CO可以顯著的改善盲腸結(jié)扎并穿孔(CLP)小鼠以及LPS刺激小鼠的炎癥反應(yīng),有效的保護(hù)其重要臟器的損傷,提高生存率。而對LPS刺激的中性粒細(xì)胞,CORM-2對其功能的調(diào)控尚無明確的報(bào)道。方法采集健康成年志愿者靜脈血,采用Ficoll離心法分離健康成年人血液中中性粒細(xì)胞,采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為對照組(CONTROL),內(nèi)毒素(LPS)組,LPS+CORM-2(10μM)組,LPS+CORM-2(50μM)組,LPS+iCORM-2組。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測中性粒細(xì)胞的早期凋亡、活性氧的釋放以及吞噬功能;采用流式細(xì)胞術(shù)以及Elisa方法檢測中性粒細(xì)胞顆粒釋放情況;采用瓊脂糖凝膠細(xì)胞遷移模型檢測中性粒細(xì)胞遷移能力;在熒光顯微鏡下計(jì)數(shù)中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)(NET)的數(shù)量;采用免疫蛋白印跡(WB)檢測中性粒細(xì)胞胞內(nèi)蛋白P38、ERK1/2、AKT的表達(dá)。結(jié)果和結(jié)論1.LPS刺激能明顯促進(jìn)中性粒細(xì)胞的早期凋亡、抑制中性粒細(xì)胞的遷移能力,而使用CORM-2干預(yù)后并不能明顯調(diào)控LPS對中性粒細(xì)胞的早期凋亡以及遷移能力的影響。實(shí)驗(yàn)表明CORM-2對LPS刺激的中性粒細(xì)胞的早期凋亡以及遷移能力無明顯的影響。2.LPS刺激能明顯促進(jìn)中性粒細(xì)胞顆粒的釋放以及吞噬功能,而使用CORM-2干預(yù)后能明顯的抑制LPS刺激中性粒細(xì)胞活性氧產(chǎn)生以及顆粒釋放,并且可以進(jìn)一步增加中性粒細(xì)胞的吞噬功能。實(shí)驗(yàn)表明CORM-2可以明顯的保護(hù)LPS刺激中性粒細(xì)胞的以確保其能更好的發(fā)揮功能。3.LPS刺激并不能促進(jìn)中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)的產(chǎn)生,而CORM-2干預(yù)能有效的促進(jìn)LPS刺激中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)的產(chǎn)生。實(shí)驗(yàn)表明CORM-2可以明顯的促進(jìn)中性粒細(xì)胞捕獲并殺滅細(xì)菌的能力。4.LPS刺激后中性粒細(xì)胞關(guān)鍵蛋白ERK1/2、P38、AKT的表達(dá)均發(fā)生了一定程度的上升,而使用CORM-2干預(yù)后ERK1/2、P38、AKT的表達(dá)得到了大幅度的上升。實(shí)驗(yàn)表明CORM-2改善LPS刺激的中性粒細(xì)胞功能可能與ERK1/2、P38、AKT有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：膿毒癥 脂多糖 CORM-2 中性粒細(xì)胞 顆粒釋放 吞噬 ERK1/2
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R459.7
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 英文縮寫及符號索引一覽表12-14
• 前言14-16
• 第一部分 中性粒細(xì)胞LPS刺激模型的建立以及外源性一氧化碳（CORM-2）的使用方案的確立16-29
• 第一節(jié) 分離并鑒定健康成人外周靜脈血中性粒細(xì)胞16-20
• 1. 材料與方法16-17
• 2. 結(jié)果17-19
• 3. 討論19
• 4. 結(jié)論19-20
• 第二節(jié) 體外建立與驗(yàn)證中性粒細(xì)胞LPS刺激模型20-23
• 1. 材料與方法20-21
• 2. 結(jié)果21-22
• 3. 討論22
• 4. 結(jié)論22-23
• 第三節(jié) 確立外源性一氧化碳（CORM-2）的使用方案23-29
• 1. 材料與方法23-24
• 2. 結(jié)果24-26
• 3. 討論26-27
• 4. 結(jié)論27-29
• 第二部分 外源性一氧化碳（CORM-2）對LPS刺激中性粒細(xì)胞功能的調(diào)控29-48
• 第一節(jié) 外源性一氧化碳（CORM-2）對LPS刺激中性粒細(xì)胞遷移的影響29-34
• 1. 材料與方法29-30
• 2. 結(jié)果30-31
• 3. 討論31-33
• 4. 結(jié)論33-34
• 第二節(jié) 外源性一氧化碳（CORM-2）對LPS刺激中性粒細(xì)胞顆粒釋放的影響34-40
• 1. 材料與方法34-35
• 2. 結(jié)果35-38
• 3. 討論38-39
• 4. 結(jié)論39-40
• 第三節(jié) 外源性一氧化碳（CORM-2）對LPS刺激中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)（NET）的影響40-44
• 1. 材料與方法40-41
• 2. 結(jié)果41-42
• 3. 討論42-43
• 4. 結(jié)論43-44
• 第四節(jié) 外源性一氧化碳（CORM-2）對LPS刺激中性粒細(xì)胞吞噬功能的影響44-48
• 1. 材料與方法44-45
• 2. 結(jié)果45-46
• 3. 討論46-47
• 4. 結(jié)論47-48
• 第三部分 外源性一氧化碳（CORM-2）對LPS刺激中性粒細(xì)胞功能影響的分子機(jī)制48-63
• 第一節(jié) 外源性一氧化碳（CORM-2）對LPS刺激中性粒細(xì)胞蛋白P38的影響48-53
• 1. 材料與方法48-50
• 2. 結(jié)果50-51
• 3. 討論51-52
• 4. 結(jié)論52-53
• 第二節(jié) 外源性一氧化碳（CORM-2）對LPS刺激中性粒細(xì)胞蛋白ERK1/2的影響53-58
• 1. 材料與方法53-54
• 2. 結(jié)果54-55
• 3. 討論55-57
• 4. 結(jié)論57-58
• 第三節(jié) 外源性一氧化碳（CORM-2）對LPS刺激中性粒細(xì)胞蛋白AKT的影響58-63
• 1. 材料與方法58-59
• 2. 結(jié)果59-60
• 3. 討論60-62
• 4. 結(jié)論62-63
• 總結(jié)63-66
• 參考文獻(xiàn)66-79
• 致謝79-80
• 攻讀碩士期間發(fā)表文章80-81

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本文編號：709929