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基于microRNAs肺結(jié)核診斷模型的構(gòu)建及在肺結(jié)核診斷中的價(jià)值研究

發(fā)布時(shí)間:2017-08-12 10:18

  本文關(guān)鍵詞:基于microRNAs肺結(jié)核診斷模型的構(gòu)建及在肺結(jié)核診斷中的價(jià)值研究


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【摘要】:背景與目的肺結(jié)核(pulmonary tuberculosis,PTB)的快速準(zhǔn)確診斷對(duì)結(jié)核病(tuberculosis,TB)防治工作至為關(guān)鍵,然而該問(wèn)題至今仍然困擾著臨床醫(yī)務(wù)工作者。當(dāng)前PTB的診斷策略是結(jié)合患者臨床表現(xiàn)、影像學(xué)資料以及實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果等綜合作出判斷,但是現(xiàn)階段PTB的實(shí)驗(yàn)室診斷方法尚存在著局限性,傳統(tǒng)微生物學(xué)方法如抗酸染色法、分離培養(yǎng)法是當(dāng)前實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)的主要手段,但存在著陽(yáng)性率較低,或檢測(cè)周期長(zhǎng)等缺陷;現(xiàn)代分子生物學(xué)方法如Xpert MTB/RIF法雖提高了診斷的陽(yáng)性率,實(shí)現(xiàn)了對(duì)結(jié)核桿菌的快速檢測(cè),但對(duì)儀器設(shè)備要求高、費(fèi)用昂貴等。另外,PTB的臨床表現(xiàn)及影像學(xué)結(jié)果缺乏特異性,常常難以對(duì)肺結(jié)核與其他肺部疾病如肺炎及肺癌等作出鑒別診斷,因此研究者們一直在尋求更為理想的PTB診斷方法。micro RNA(mi RNA)與疾病發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),已作為腫瘤等疾病的診斷指標(biāo),為PTB實(shí)驗(yàn)室診斷提供了一種新的思路。多項(xiàng)研究證據(jù)顯示TB患者體內(nèi)存在著mi RNAs表達(dá)失調(diào),表達(dá)變化的mi RNAs可用于PTB的輔助診斷。然而,現(xiàn)階段對(duì)mi RNAs診斷PTB的研究更多的還只是停留在篩選診斷指標(biāo)的層面上,有必要在此基礎(chǔ)上繼續(xù)進(jìn)行深入研究與探索。本研究即在現(xiàn)有研究資料的基礎(chǔ)上,選取多種已報(bào)道過(guò)的可用作PTB診斷標(biāo)記物的mi RNAs,以qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)并進(jìn)行篩選,通過(guò)logistic回歸分析獲得回歸方程,并進(jìn)一步采用獨(dú)立樣本驗(yàn)證該方程的診斷效能,旨在建立一個(gè)基于mi RNAs的PTB診斷模型,以期能夠?qū)ΜF(xiàn)有的PTB診斷方法進(jìn)行有效補(bǔ)充。方法實(shí)驗(yàn)分為4組:健康組、肺炎組、肺癌組和PTB組,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)為三大部分:mi RNAs篩選、診斷模型構(gòu)建和診斷模型驗(yàn)證。(1)miRNAs篩選:共納入研究對(duì)象178例,其中PTB組70例,健康組、肺炎組和肺癌組各36例。首先選取8種文獻(xiàn)已報(bào)道過(guò)的在PTB患者中存在異常表達(dá)的mi RNAs,以qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)它們?cè)?78例研究對(duì)象中的表達(dá)水平;然后對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,選取符合篩選標(biāo)準(zhǔn)的mi RNAs進(jìn)入后續(xù)研究。(2)診斷模型構(gòu)建:應(yīng)用mi RNAs篩選階段的檢測(cè)數(shù)據(jù),對(duì)符合篩選標(biāo)準(zhǔn)的mirnas進(jìn)行多因素logistic回歸分析,采用向前逐步法篩選變量,建立回歸方程,并以roc曲線分析評(píng)價(jià)該方程的診斷效能。(3)診斷模型驗(yàn)證:為更準(zhǔn)確評(píng)價(jià)所構(gòu)建模型的診斷效能,采用獨(dú)立樣本進(jìn)行roc曲線分析驗(yàn)證,此階段納入共研究對(duì)象200例,其中ptb組80例,健康組、肺炎組和肺癌組各40例。結(jié)果1.mirnas篩選:篩選標(biāo)準(zhǔn)為ptb組與肺炎組、肺癌組及健康組分別進(jìn)行兩兩比較,三對(duì)比較中至少有一對(duì)滿(mǎn)足mirna表達(dá)水平有差異且相對(duì)變化倍數(shù)≥2或≤0.5。8種mirnas(mir-21、mir-29a、mir-101、mir-146a、mir-223、mir-361-5p、mir-378和mir-424)中,mir-29a的表達(dá)水平差異雖有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但因其在有表達(dá)差異的一對(duì)比較(ptb組vs肺炎組)中表達(dá)水平的變化倍數(shù)為0.7,不符合篩選標(biāo)準(zhǔn)而被排除,剩余7種mirnas均符合實(shí)驗(yàn)要求。2.診斷模型構(gòu)建:采用向前逐步法:似然比法篩選變量,成功構(gòu)建了基于3種mirnas(mir-101、mir-223和mir-424)的診斷模型,其余4種mirnas被剔除。應(yīng)用mirnas篩選階段數(shù)據(jù),roc曲線分析證實(shí)了該模型對(duì)ptb具有良好的診斷效能,auc=0.92,95%ci:0.87~0.95,診斷靈敏性為90.0%,特異性為84.3%。3.診斷模型驗(yàn)證:采用獨(dú)立樣本,roc曲線分析證實(shí)了該模型對(duì)ptb具有良好的診斷效能,auc=0.89,95%ci:0.84~0.93,診斷靈敏性為86.3%,特異性為80.8%。考慮到臨床上ptb經(jīng)常要與肺炎和肺癌進(jìn)行鑒別,我們也分析了該模型對(duì)ptb與上述兩種疾病的鑒別能力。結(jié)果顯示:與肺炎鑒別,auc=0.91,95%ci:0.86~0.96,診斷靈敏性為90.0%,特異性為80.0%;與肺癌鑒別,auc=0.92,95%ci:0.86~0.96,診斷靈敏性為88.8%,特異性為85.0%。結(jié)論1.在文獻(xiàn)調(diào)研基礎(chǔ)上選擇了8種mirnas進(jìn)行研究,經(jīng)qrt-pcr技術(shù)檢測(cè),7種mirnas(mir-21、mir-101、mir-146a、mir-223、mir-361-5p、mir-378和mir-424)在肺結(jié)核、肺炎和肺部腫瘤組中差異明顯,確定該7種mirnas進(jìn)入后續(xù)研究。2.對(duì)7種候選mirnas(mir-21、mir-101、mir-146a、mir-223、mir-361-5p、mir-378和mir-424)進(jìn)行多因素logistic回歸分析,構(gòu)建成功了一個(gè)基于3種mirnas即mir-101、mir-223和mir-424的診斷模型:logit(患ptb概率p)=6.214-1.480*(mir-101)-0.002*(mir-223)-0.051*(mir-424)。該診斷模型對(duì)肺結(jié)核的診斷效能為:auc=0.92,95%ci:0.87~0.95,診斷靈敏性為90.0%,特異性為84.3%。3.采用獨(dú)立樣本(PTB組80例,健康組、肺炎組和肺癌組各40例)經(jīng)ROC曲線驗(yàn)證,證實(shí)該模型對(duì)PTB具有潛在的診斷價(jià)值:AUC=0.89,95%CI:0.84~0.93,診斷靈敏性為86.3%,特異性為80.8%。
【關(guān)鍵詞】:微小RNA 結(jié)核 診斷 標(biāo)記物
【學(xué)位授予單位】:第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類(lèi)號(hào)】:R521;R440
【目錄】:
  • 縮略語(yǔ)表4-6
  • 英文摘要6-9
  • 中文摘要9-12
  • 1. 前言12-14
  • 2. 材料和方法14-21
  • 3. 結(jié)果21-30
  • 4. 討論30-34
  • 全文結(jié)論34-35
  • 參考文獻(xiàn)35-41
  • 文獻(xiàn)綜述 micro RNA:潛在的診斷結(jié)核病的新型生物標(biāo)記物41-56
  • 參考文獻(xiàn)50-56
  • 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章56-57
  • 致謝57

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本文編號(hào):661085

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