本文關(guān)鍵詞：FGFR3負(fù)調(diào)控骨髓損傷修復(fù)中的小鼠造血干細(xì)胞增殖

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【摘要】：背景和目的:眾所周知,造血干細(xì)胞是(hematopoietic stem cells,HSCs)是一少部分能夠產(chǎn)生出所有成熟細(xì)胞和免疫細(xì)胞的原始造血細(xì)胞,具有自我更新能力和多向分化能力,是維持體內(nèi)各類血細(xì)胞穩(wěn)定的細(xì)胞群體。目前多種惡性疾病,比如白血病,自身免疫性疾病等的有效治療方法就是進(jìn)行HSCs移植。但由于HSCs數(shù)量較少,難以滿足臨床治療的需要,使HSCs的臨床應(yīng)用受到嚴(yán)重制約。因此如何高效的擴(kuò)增大量的HSCs以滿足臨床需要已成為HSCs移植亟待解決的問題。已有研究證實(shí)FGF信號對造血干細(xì)胞的自我更新、維持、發(fā)育和骨髓的恢復(fù)有重要作用。在體內(nèi),FGF2能夠促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞祖細(xì)胞和造血干細(xì)胞祖細(xì)胞的擴(kuò)增。FGF1能夠促進(jìn)由5-FU引起的骨髓損傷后的修復(fù)以及增強(qiáng)AMD3100誘發(fā)的干細(xì)胞的動員作用。FGFR3作為FGF的一個重要的受體,已有研究證明FGFR3在骨髓HSCs中表達(dá)水平較高。那么FGFR3對HSCs的增殖有什么調(diào)控作用呢?對本文就以此為出發(fā)點(diǎn)探討FGFR3對HSCs體內(nèi)擴(kuò)增的調(diào)控作用。方法:1.首先建立Fgfr3敲除型小鼠。2.我們主要采用臺盼藍(lán)染色進(jìn)行總細(xì)胞計(jì)數(shù),根據(jù)細(xì)胞表面標(biāo)記,通過流式細(xì)胞術(shù)分析WT和KO小鼠中骨髓和脾臟中LSK的比例,進(jìn)而分析LSK細(xì)胞的總數(shù)。3.通過Brd U標(biāo)記法檢測HSCs的增殖能力。4.流式細(xì)胞儀分析FGFR1的表達(dá)。5.通過細(xì)胞內(nèi)蛋白染色分析NF-κB及STAT1的磷酸化水平。6.RT-PCR檢測p15的m RNA表達(dá)水平。7.經(jīng)過骨髓移植探究FGFR3對造血重建能力及HSCs分化能力的影響。結(jié)果:1.在穩(wěn)態(tài)下,骨髓的總細(xì)胞數(shù)及LSK細(xì)胞數(shù)在WT和KO中沒有差別。2.骨髓中HSCs分化為粒細(xì)胞(Gr1+/CD11b+),B細(xì)胞(B220+)和T細(xì)胞(CD3e+)的水平,同樣也是沒有差別。3.在給予化療藥物5-FU處理14天后,KO小鼠中骨髓和脾臟中的HSCs數(shù)量分別是WT的2.1倍和1.8倍。3.KO HSCs的Brd U的陽性率是WT的1.5倍。4.流式細(xì)胞術(shù)分析在給予5-FU后,KO小鼠HSCs的FGFR1、p-NF-κB的表達(dá)水平明顯上調(diào)。5.給予5-FU處理后,STAT1的磷酸化程度降低。6.細(xì)胞增殖周期的抑制基因p15 m RNA的表達(dá)量下降。7.骨髓移植后WT和KO兩種BM細(xì)胞在受者體內(nèi)的重建造血能力及HSCs的分化能力均沒有差別。結(jié)論:我們證明在骨髓損傷修復(fù)中同時有兩條FGF-FGFR信號通路影響到HSCs的擴(kuò)增。一條是已經(jīng)被證明的FGF1-FGFR1信號通路,促進(jìn)HSCs增殖;另一條是FGF1-FGFR3信號通路,抑制HSCs的增殖。在本實(shí)驗(yàn)中我們第一次提出FGFR3在小鼠骨髓受損后修復(fù)過程中對HSCs在體內(nèi)擴(kuò)增的負(fù)調(diào)控作用。為在體外大量擴(kuò)增HSCs實(shí)現(xiàn)造血干細(xì)胞移植提供理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：FGFR3 造血干細(xì)胞 增殖 骨髓損傷修復(fù)
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R457.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 英文縮略詞匯8-11
• 第1章 緒論11-20
• 1.1 造血干細(xì)胞概述11-15
• 1.1.1 造血干細(xì)胞的生物學(xué)特性11-12
• 1.1.2 小鼠造血干細(xì)胞的主要表面標(biāo)記12-14
• 1.1.3 造血干細(xì)胞的體外培養(yǎng)14
• 1.1.4 造血干細(xì)胞的應(yīng)用14-15
• 1.2 FGFR3結(jié)構(gòu)和功能概述15-18
• 1.2.1 FGFR3的結(jié)構(gòu)特性15-16
• 1.2.2 FGFR3與疾病的關(guān)系16-18
• 1.3 FGF信號與HSCs18-19
• 1.4 本課題的研究思路19-20
• 第2章 材料和方法20-33
• 2.1 儀器與試劑20-23
• 2.1.1 主要的試劑20
• 2.1.2 抗體20
• 2.1.3 主要儀器20-21
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑的配方21-23
• 2.1.5 實(shí)驗(yàn)動物23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法23-33
• 2.2.1 小鼠基因型的鑒定23-25
• 2.2.2 小鼠骨髓細(xì)胞的分離25-26
• 2.2.3 小鼠脾臟細(xì)胞的分離26
• 2.2.4 臺盼藍(lán)染色法細(xì)胞計(jì)數(shù)26-27
• 2.2.5 BrdU標(biāo)記法檢測細(xì)胞增殖27-28
• 2.2.6 流式細(xì)胞術(shù)分析HSCs胞內(nèi)蛋白的表達(dá)28
• 2.2.7 CD117+造血干/祖細(xì)胞中的p15 mRNA表達(dá)檢測28-31
• 2.2.8 骨髓移植31-32
• 2.2.9 造血重建實(shí)驗(yàn)32-33
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-48
• 3.1 小鼠基因型鑒定33-35
• 3.2 穩(wěn)態(tài)下FGFR3對小鼠骨髓HSCs增殖和分化的影響35-36
• 3.3 5-FU處理后FGFR3對小鼠HSCs增殖的影響36-42
• 3.4 BrdU分析42-43
• 3.5 FGFR1表達(dá)檢測43-44
• 3.6 FGFR1通過激活NF-κB促進(jìn)HSCs增殖44-45
• 3.7 FGFR3通過激活STAT1負(fù)調(diào)控HSCs擴(kuò)增45
• 3.8 抑制細(xì)胞增殖周期的基因p15表達(dá)的檢測45-46
• 3.9 造血重建實(shí)驗(yàn)46
• 3.10 骨髓移植后造血細(xì)胞的分化情況46-48
• 第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)論48-49
• 第5章 實(shí)驗(yàn)討論49-53
• 參考文獻(xiàn)53-64
• 致謝64

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 許力;毛平;;白細(xì)胞介素3與白細(xì)胞介素6對人臍血單個核細(xì)胞體外擴(kuò)增及黏附分子和趨化因子受體4表達(dá)的影響[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2009年01期

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本文編號：644946